乙肝病毒大蛋白与乙肝病毒核酸检测在抗病毒治疗中的作用

耿坤静 董爱英 王玉红 武志强 卢淑兰 刘书兰 王丽

中国慢性乙肝患者感染者约占全世界的1/3［1］，乙型肝炎在中国感染率高，而且容易慢性化，引起肝硬化和原发性肝癌，已经成为危害人类健康的社会性问题。慢性乙肝患者主要以抗病毒治疗为主，因此，本研究通过乙肝患者抗病毒治疗不同阶段HBV-LP、HBV-DNA、PreS1Ag和HBV-M检测结果，探讨各检测指标间的相关性及临床作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2009年3月至2010年4月在河北省保定市传染病医院住院和门诊的符合抗病毒治疗条件、并接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者120例，给予核苷(酸)类似物抗病毒治疗。其中男79例，女41例;年龄16～55岁，平均年龄32.5岁。均符合2005年中华医学会肝病学会与感染病联合制定的中国慢性乙型肝炎防治指南的诊治标准。120例患者在接受治疗0、3、6、9和12个月时，分别采集血样，及时提取血清置－70℃低温冰箱冰冻保存以备测。

1.2 试剂与仪器 试剂:乙肝病毒标志物(HBV-M)、PreS1Ag的定性、HBV-DNA定量诊断试剂盒(上海科华生物工程股份有限公司提供);HBV-LP诊断试剂盒(北京贝尔生物工程有限公司提供)。仪器:酶标仪:Labsystem Dragon公司，MUL-TISKAN MK3型;洗板机:北京普朗新技术有限公司;荧光定量PCR仪:上海宏石医疗科技有限公司。

1.3 检测方法与结果判定 采用酶联免疫(ELISA)法检测HBV-LP、PreS1Ag和 HBV-M;采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA。所有试剂盒均在有效期内，严格按试剂说明书及临床实验操作规程操作。

1.4 统计学分析 应用SPSS 12.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 抗病毒治疗不同阶段进行 HBV-DNA、HBV-LP、preS1Ag和HBeAg阳性率比较 抗病毒治疗前，HBV-DNA阳性率均显著高于 PreS1Ag、HBeAg阳性率(P＜0.01)，而 HBV-LP和HBV-DNA阳性率差异无统计学意义(P＞0.05);在抗病毒治疗后，PreS1Ag、HBeAg与HBV DNA阳性率差异有统计学意义(P＜0.01)。在不同治疗阶段PreS1Ag和HBeAg阳性率之间差异无统计学意义(P＞0.05)，而PreS1Ag和HBeAg阳性率的变化趋势一致，随着抗病毒治疗时间的延长，阳性率均在降低。在抗病毒治疗后，HBV-DNA的阳性率明显低于HBV-LP的阳性率，二者阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。随着抗病毒治疗时间的延长HBV-DNA和HBV-LP的变化趋势一致，而且HBV-LP消退晚于HBV-DNA、PreS1Ag和HBeAg的消减，抗病毒治疗12个月时，HBV DNA阳性率从100%降到61.40%，HBV-LP阳性率从100%降到80.70%。见表1。

表1 抗病毒治疗过程中患者HBV-LP、HBV、DNA、preS1Ag和HBeAg阳性率比较 %

2.2 以HBV DNA为金指标对HBV-LP的灵敏度、特异度、阴、阳性预测值比较 抗病毒治疗不同阶段共检测528例次，在抗病毒治疗前HBV-LP的灵敏度、阳性预测值最高(均为100%)。在抗病毒治疗后，随着抗病毒治疗时间的延长，HBV-LP的灵敏度降低，特异度升高，阳性预测值降低。治疗后12个月时，HBV-LP的灵敏度最低(94.28%)、特异性最高(52.94%)，均显示HBV-LP是 HBV感染者体内病毒复制的可靠指标。见表2。

表2 以HBV DNA为金标准时HBV-LP的各指标数据 %

3 讨论

目前，临床上用于评估乙肝患者病毒复制与抗病毒疗法的监测指标主要是HBV-DNA载量和HBeAg的血清转换。虽然定量PCR方法监测HBV-DNA已成为目前判定HBV复制最直接和可靠的指标，但对于抗病毒治疗患者来说，HBV-DNA阴性并不意味着病毒已经清除了。因为肝内cccDNA的降低远远低于血清HBV-DNA水平，血清HBV-DNA不能真实反映肝组织内HBV复制的情况。同时HBeAg也不能反映干细胞内HBV复制的情况，在HBeAg阴性的慢性乙肝患者中，由于HBV基因前C区或者CP区的变异［2］，导致HBeAg合成障碍，容易造成漏检，患者HBeAg呈阴性而病毒仍在复制现象。

本研究中PreS1Ag阳性率低于HBV-LP阳性率可能由于HBV-LP试剂采用的是针对HBV-LP前S蛋白的构象表位制备的单克隆抗体。PreS1Ag作为大蛋白的一部分，无法模拟其复杂的拓扑结构。在制作单克隆抗体时其序列会被折叠、卷曲而失去暴露表位的机会，这样的低级结构抗原制作出的单克隆抗体在实际应用中便可以导致漏检［3］。提示检测含构象前S区的HBV-LP比单独检测HBV PreS1Ag更能准确反映出患者体内病毒复制情况。

抗病毒治疗前HBV-LP的灵敏度、阳性预测值最高(均为100.00%)，抗病毒治疗后，随着抗病毒治疗时间的延长，HBVLP的灵敏度降低，特异度升高，阳性预测值降低。治疗后12个月时，HBV-LP的灵敏度最低(94.28%)、特异性最高(52.94%)，均显示HBV-LP是 HBV感染者体内病毒复制的可靠指标。

另在抗病毒治疗前，HBV-LP和 HBV-DNA阳性率差异无统计学意义(P＞0.05)，而在抗病毒治疗后，HBV-LP和 HBVDNA阳性率差异有统计学意义(P＜0.05)。随着抗病毒治疗时间的延长HBV-DNA和HBV-LP的变化趋势一致，而且HBVLP消退晚于HBV-DNA消减，这与陈晓明等［4］对拉米夫定治疗患者的研究结果一致。抗病毒治疗12个月时，HBV-DNA阳性率从100%降到61.40%，HBV-LP阳性率从100%降到80.70%。抗病毒治疗过程中HBV-LP持续阳性者，HBV-DNA出现转阴的概率降低。慢性乙肝患者主要以抗病毒治疗为主，理论上只有当血液中HBV-DNA和HBV-LP都检测不到了才意味着病毒核酸的复制、外膜蛋白的表达已经处于终止状态，提示抗病毒治疗的终点，因此，联合检测HBV-LP和HBV-DNA对抗病毒治疗监测愈后具有重要临床意义。

1 贾继东.乙型肝炎HBeAg阴性慢性乙型肝炎治疗.中华肝脏病杂志，2005，13:539-126.

2 Lambert C，Mann S，Pranqe R.Assessnent of determ inants affecting the dual topology of hepadnaviral large envelope proteins.J Gen Virol，2004，85:1221-1225.

3 彭建明，李金明.病毒样颗粒在免疫测定中的应用研究进展.中华检验医学杂志，2005，28:214-216.

4 陈晓明，杨梅芳，薛寒，等.乙型肝炎病毒大蛋白和DNA在抗病毒治疗过程中的变化.中华传染病杂志，2007，25:405-407.