补肾活血方对去卵巢大鼠骨质疏松检测指标的影响

李学朋等

【摘要】 目的：试通过对去卵巢大鼠不同时期骨质疏松相关指标的检测，为补肾活血方治疗骨质疏松症提供实验依据。方法：将雌性大鼠30只随机分为3组：去卵巢对照组、补肾活血方实验组，假手术对照组共3组，每组10只。每周称量体重1次。动物饲养13周后，处死，剥离左、右侧股骨，剔除干净骨周围附着软组织，测定骨恒重和骨钙。取大鼠右侧股骨在105 ℃烘箱中烘干至恒重后（间隔1 h称量差值不超过0.0003 g），称量骨干重。原子吸收法测定右侧股骨钙含量。测量左侧股骨全长，以双能X线吸收骨密度仪（DEXA）测定股骨中点、远心端和近心端骨密度。并进行统计学分析。结果：去卵巢动物体重均明显高于假手术对照组（P<0.05）。补肾活血方实验组大鼠右侧股骨恒重明显高于去卵巢对照组和假手术对照组（P<0.05）；补肾活血方实验组和假手术对照组大鼠股骨钙含量明显高于去卵巢对照组（P<0.05）。去卵巢对照组大鼠左侧股骨中点、远心端和近心端骨密度均明显低于假手术对照组（P<0.05），表明本实验大鼠骨密度低下模型成功。结论：比较各组骨密度结果表明，补肾活血方实验组股骨中点、远心端、股骨近心端骨密度均高于去卵巢对照组，且比较差异均有统计学意义（P<0.05）。补肾活血方实验组股骨长度亦明显高于去卵巢对照组（P<0.05）。

【关键词】 骨质疏松症； 中医药疗法； 骨钙； 骨密度； 实验研究； 大鼠

补肾活血方为新泰孟氏医院孟照明教授的经验方，为纯中药制剂，其主要功能为调整骨代谢，治疗骨质疏松。处方成分主要由熟地、杜仲、山药、巴戟天、肉苁蓉、牛膝、枸杞、桃仁、红花、赤芍、川芎、当归、血竭等20味药物组成。骨质疏松症是目前随着人口老龄化而增长并且逐渐危及到人们健康的一种疾病。为此，通过建立动物实验模型，对去卵巢大鼠不同时期骨质疏松相关指标进行检测，以期探讨补肾活血方对骨质疏松症的治疗预防作用。

1 材料与方法

1.1 受试物 补肾活血方，由新泰孟氏骨科研究所提供。性状：中药汤剂，供实验用。人体推荐摄入量：1剂/d，煎至300 ml，分早晚2次服用。

l.2 实验动物 SPF级健康成年10 周龄SD大鼠，雌性，30只，体重250～300 g。由山东大学医学部实验动物中心提供，实验动物生产许可证：SCXK2006-0008。动物使用许可证：SYXK20uo-0025，饲养环境为SPF级，实验环境温度23～24 ℃，湿度54%～58%。

1.3 动物饲料 参照AIN93饲料配方配制半成品饲料，用适当的物质替换饲料中来源于大豆的成分，以避免大豆异黄酮等植物雌激素对实验结果的干扰（主要成分为23%酪蛋白，32%玉米淀粉，30%蔗糖，5%纤维，5%玉米油，3.5%混合矿物盐1，1%混合维生素2，0.3%DL-蛋氨酸，0.2%酒石酸胆碱）。由中国医学科学院实验动物研究所提供，饲料生产许可证号：SCXK（京）2006-0003。饲料中钙含量为153 mg/100 g。

1.4 主要仪器设备 双能X线吸收骨密度仪（DEXA，美国NORLAND公司生产的XR.36型）；原子吸收分光光度计（PE股份有限公司生产，PE-2eemam-5100型）。

1.5 试验方法 按照卫生部《药品检验与评价技术规范》（2003年版）“增加骨密度功能检验方法”进行。

1.5.1 手术处理及动物分组 SD大鼠经适应性饲养1周后，按体重随机分为去卵巢组和假手术对照组。大鼠经腹腔注射40 mg/（kg·bw）戊巴比妥钠溶液（1%）麻醉，固定，经背部肋脊角切口行卵巢切除术；假手术组切除卵巢周围部分脂肪，然后对切口分层缝合。术后10 d，按体重将去卵巢动物随机分为去卵巢对照组、补肾活血方组，计入假手术对照组共3组，每组10只。

1.5.2 剂量选择及受试物给予方式 补肾活血方5.00 ml/（kg·bw），作为补肾活血方组。实验期间各组动物喂饲基础饲料，自由摄食和饮用去离子水。试验组分别灌胃给以补肾活血方受试物，去卵巢对照组和假手术对照组灌胃给以去离子水。灌胃量为10 ml/（kg·bw），每日灌胃1次，共13周。

1.6 观察指标 体重：每周称量1次。骨恒重和骨钙测定：动物饲养13周后，处死，剥离左、右侧股骨，剔除干净骨周围附着软组织。取大鼠右侧股骨在105 ℃烘箱中烘干至恒重后（间隔1 h称量差值不超过0.0003 g），称量骨干重。原子吸收法测定右侧股骨钙含量。骨密度测定：测量左侧股骨全长，以双能X线吸收骨密度仪（DEXA）测定股骨中点、远心端和近心端骨密度。

1.7 统计学处理 采用SPSS13.0软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，采用单因素方差分析和双因素重复测量数据方差分析，组间比较采用LSD-t法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 受试物对大鼠体重的影响 去卵巢动物体重均明显高于假手术对照组（P<0.05）。实验初始（0周）补肾活血方实验组动物体重与去卵巢对照组相比，比较差异无统计学意义（P>0.05）；实验结束时（第13周末）补肾活血方实验组大鼠体重均明显低于去卵巢对照组（P<0.05）。见表1。

2.2 受试物对大鼠股骨恒重和骨钙含量的影响 补肾活血方实验组大鼠右侧股骨恒重明显高于去卵巢对照组和假手术对照组（P<0.05）；补肾活血方实验组和假手术对照组大鼠股骨钙含量明显高于去卵巢对照组（P<0.05）。见表2。

2.3 受试物对大鼠骨密度的影响 去卵巢对照组大鼠左侧股骨中点、远心端和近心端骨密度均明显低于假手术对照组（P<0.05），表明本实验大鼠骨密度低下模型成功。比较各组骨密度结果表明，补肾活血方实验组股骨中点、远心端、股骨近心端骨密度均高于去卵巢对照组，且比较差异均有统计学意义（P<0.05）。补肾活血方实验组股骨长度亦明显高于去卵巢对照组（P<0.05）。见表3、4。

经口连续13周每天给以去卵巢模型大鼠补肾活血方5.00 ml/（kg·bw），结果表明，补肾活血方实验组大鼠股骨中点、股骨远心端、股骨近心端骨密度均明显高于去卵巢对照组（P<0.05）；补肾活血方实验组大鼠股骨钙含量也高于去卵巢对照组（P <0.05）。

3 讨论

建立去卵巢大鼠骨质疏松模型研究骨质疏松症已得到公认，并已经被广泛采用[1]。雌性大鼠在卵巢切除后松质骨骨量减少，骨的强度下降，某些部位骨丢失现象加快，这种特征与人正常绝经后高转换型骨质疏松发生的骨丢失现象相类似[2]。本实验研究中，去卵巢大鼠体重均明显高于假手术对照组，补肾活血方试验组大鼠右侧股骨恒重明显高于去卵巢对照组和假手术对照组，补肾活血方试验组和假手术对照组大鼠股骨钙含量明显高于去卵巢对照组，去卵巢对照组大鼠左侧股骨中点、远心端和近心端骨密度均明显低于假手术对照组，表明本实验大鼠骨密度低下模型成功。成年大鼠骨重建周期为30～40 d，为了得到更加明显的实验结果，本研究将补肾活血方的治疗时间定为13周。在本实验中补肾活血方组大鼠体重均与模型组差异无统计学意义，提示补肾活血方可能不具有雌激素的抗体重增加作用，但其理论依据还需进一步探讨。本研究结果表明，大鼠给予补肾活血方后，骨恒重和骨钙含量明显增高，股骨中点、远心端、股骨近心端骨密度均高于去卵巢对照组，说明补肾活血方可促进骨形成，使骨形成大于骨吸收，以治疗骨质疏松的发生。反映了中药补肾活血方可以提高成骨细胞活性，使骨生长增强，有效治疗去卵巢大鼠的骨质疏松症。

骨质疏松是以骨量减少和骨组织细微结构退化（松质骨骨小梁变细、断裂数量减少，皮质骨多孔、变薄）为特征的，导致骨的脆性增加以及骨折危险增加的一种全身骨骼疾病。骨质疏松最终会导致骨折，特别是椎体、髋部股骨颈、转子间、桡骨远端与肱骨近端[3]。中医以为骨质疏松症属于“骨痿”和“骨痹”的范畴，《内经》云：“肾者主蛰，封藏之本，精之处也”。《医经精义》亦云：“肾藏精，精生髓，髓生骨，故骨者肾之所合也；髓者精之所升也，精足则髓足。髓在骨内，髓足则骨强”。根据“肾藏精，主骨生髓”的理论，对骨质疏松的治疗主要以补肾中药为主，而在补肾药中又以补益药中的补阳药物为最多。多数学者以“肾主骨”理论为指导[4]，对中医药防治骨质疏松症进行了大量的临床与实验研究，取得了较好的效果，也进一步加深了中医对本病的认识：本病病因病机的关键在于各种原因所致的肾虚，属本虚标实，病位在肾，与肝、脾有关。本虚以肾（气、阴、阳）为主，涉及肝阴、脾气及气血不足；标实多为瘀血[5]。补肾活血方以熟地、杜仲为君药。熟地性甘，微温；归肝、肾经；具有养血滋阴，补精益髓之功效。杜仲，性甘、温，归肝、肾经；具有补肝肾，强筋骨之功效。以巴戟天、肉苁蓉、牛膝、骨碎补、川芎、当归、桃仁、红花为臣药，山药、枸杞、赤芍、血竭、三七、续断、茯苓、黄芪、木香、陈皮为佐使药。共奏补肾活血，强筋壮骨，益气健脾，活血通络之功。

现代药理学研究表明，补肾药物中含有类雌二醇样物质[6]，可能显著提高雌性大鼠体内的雌激素水平。同时，续断，杜仲等补肾中药中含有黄酮类物质，与己烯雌酚有相类似的结构，从而具有雌性激素样作用[7]，可以促进成骨细胞分化和增殖[8]。补肾活血方对于骨质疏松症有明显的预防及显著的治疗作用，同时，避免了单纯的抗骨吸收药物在降低骨转换率的同时也部分抑制了成骨细胞活性的缺点，为中医药治疗骨质疏松症开辟了一条新思路，开发前景广阔。

参考文献

[1] 张晗祥，梅浩，骆旭东.仙灵骨葆对去卵巢大鼠骨质疏松症模型预防效果的研究[J].中国中医骨伤科杂志，2011，20（3）：25-27.

[2] 李展春，程光齐，臧危平，等.骨碎补治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究[J].中国中医骨伤科杂志，2011，20（4）：14-16.

[3] 杨海明，林华，徐天舒，等.绝经后女性骨质疏松跌倒风险的分析与评价[J].中国骨质疏松杂志，2010，16（5）：347-349.

[4] 黄宏兴，陈彦东.中西医结合防治骨质疏松症的研究思路和方法[J].中医正骨，2008，20（3）：74-75.

[5] 邵宝良.骨质疏松症的成因及预防[J].中国食物与营养，2008，20（1）：63-64.

[6] 黄宏兴，魏合伟，刘庆思，等.中药骨康对去势大鼠血清激素水平变化的影响[J].广州中医药大学学报，1999，16（2）：138-141.

[7] 朱丹，袁芳，孟坤，等.黄酮类化合物的研究进展[J].中华中医药杂志，2007，22（6）：387-389.

[8] 周轶琳，赵敏，杨杏芬，等.大豆异黄酮对去势大鼠类雌激素样作用的研究[J].华南预防医学，2007，33（3）：20-25.

（收稿日期：2012-11-12） （本文编辑：李静）