BP1在乳腺癌组织中的临床表达及其与Bcl-2表达相关性

乔晓娟 李昊昌 李云霞 李筱贺

1.内蒙古医科大学附属医院保健中心一病区,内蒙古呼和浩特 010050；2.内蒙古医科大学附属医院超声科，内蒙古呼和浩特 010050；3.内蒙古医科大学基础医学院解剖教研室，内蒙古呼和浩特 010050

乳腺癌属于临床女性最普遍恶性肿瘤，目前国际上病死率仅比肺癌低，位于致死疾病第二位，且仍然处于逐年增长的趋势。乳腺癌的致病标志物研究一直属于临床研究重要课题，以期能为乳腺癌的治疗找到新方向。本研究主要对2012年5月～2013年5月在本院行手术治疗的乳腺癌患者72例的乳腺癌组织标本中BP1蛋白的阳性表达及其与Bcl-2表达的相关性进行研究，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本资料随机选取2012年5月～2013年5月在本院行手术治疗的乳腺癌患者72例，年龄为31～76岁，平均（46.0±6.7）岁。

1.2 诊断标准

患者的临床症状均与相关标准中乳腺癌的诊断标准相符合，且经过钼钯及彩超等相关检查方法的确诊[1]。

1.3 纳入和排除标准

纳入标准：患者均知情并同意相关病理检验；所有患者无手术和麻醉相关禁忌证。排除标准：手术前经过化疗、放疗者；无严重的心脏肝肾疾病者。

1.4 方法

将在本院进行手术治疗的乳腺癌患者72例的乳腺癌组织标本作研究组，将同一乳腺癌患者的乳腺癌旁组织（距离乳腺癌的病灶边缘大于5cm位置处正常的乳腺组织）标本72例作对照组，对两组予以Westem blot和免疫组织的化学方法进行阳性检测。

1.4.1 试剂和材料选择 实验中材料和试剂选择，BP1蛋白由Novus Bio-logicals生产的兔抗BP1的多克隆抗体，由Santa Cruz生产的Bcl-2的鼠抗单克隆的抗体，β-actin的鼠抗单克隆的抗体等。选择由Sigma Biotechnology生产的硝酸纤维的过滤膜；Promega生产的NBT/BCIP的显影剂，以及北京的中杉金桥生产的免疫组化和DAB的显示相关试剂盒等。

1.4.2 Westem blot方法 将从机体取下并做好的组织均放与-80℃的温度下保存，从研究组和对照组两种细胞均取下组织100mg放在EP管内，剪碎后放入匀浆液冰水中高速匀浆直到组织块不可见，然后进行离心，提取上层清夜。依据改良后的Lowary等方法，进行蛋白测定以及两组标本中BP1的阳性表达和其与Bcl-2表达相关性的测定。

1.4.3 免疫组化方法 选择研究组乳腺癌的组织标本，连续切片后，进行切片的脱蜡至水，后微波修复，选择免疫组化的试剂盒进行封闭，放置于温度4℃下进行过夜等操作，通过DAN的显色之后，选择苏木精进行复染，乙醇的脱水以及中性树胶的封片等操作，检测BP1的阳性表达和其与Bcl-2的表达相关性等。

1.5 观察指标

观察并统计分析两组组织标本中的BP1的临床表达，研究组乳腺癌的组织中BP1及Bcr-2的的临床表达，以及乳腺癌的组织中BP1和临床病理相关性情况。

1.6 疗效标准

1.6.1 阳性表达相关标准 BP1阳性表达主要分布于上皮细胞胞质及部分胞核，Bcl-2阳性表达主要分布上皮细胞胞质，相应的部位呈棕黄色的颗粒表示阳性。

1.6.2 细胞计数相关标准 计数于显微镜下进行，统一进行（×40）放大，由三名专业操作，独立随机选择等距的每张切片5个视野，分析系统5个视野阳性的细胞数量，并取平均数。

1.7 统计学分析

所有数据应用SPSS19.0软件包完成统计分析，一般资料应用（±s）完成表示，计量资料应用t完成检验，计数资料应用x2完成检验，当P＜0.05表示比较差异具统计学意义。

2 结果

2.1 两组的BP1的临床表达情况

研究组组织内BP1的阳性表达，比对照组组织内BP1阳性表达高，比较差异具统计学上的意义（t=2.351，P=0.000，P＜0.05）。如表1。

2.2 研究组中BP1及Bcr-2的的临床表达情况

研究组的乳腺癌的组织Bcl-2的蛋白阳性表达和BP1阳性表达具有正相关性（r=0.7854，P＜0.05）。如表2。

表1 两组的BP1的临床表达情况（±s）

表1 两组的BP1的临床表达情况（±s）

组别 n Westem blot（+） 免疫组化（+）研究组 72 0.95±0.58 302.80±153.76对照组 72 0.09±0.06 103.92±58.12

表2 研究组中BP1及Bcl-2的的临床表达情况（±s）

表2 研究组中BP1及Bcl-2的的临床表达情况（±s）

方法 n BP1表达 Bcr-2表达Westem blot（+） 72 0.95±0.58 0.62±0.39免疫组化（+） 72 302.80±153.76 212.37±127.45

2.3 研究组中BP1和临床病理相关性情况

研究组标本中，BP1的阳性表达和乳腺癌病理因素中PR、ER和C-erb-B-2具有相关性（r=0.684，r=0.812，r=0.668，P＜0.05）。如表3。BP1的阳性表达和患者绝经、年龄、肿瘤大小、病理类型、临床分期以及Ki-67等相关因素不相关（P＞0.05）。

3 讨论

机体组织内的BP1蛋白发现于行β珠的蛋白表达相关调控时，克隆出的BP1的cDNA长度是1254bp，由240个氨基酸进行编码，结构域呈现为螺旋状同源异性。同时BP1蛋白同家族是DLX，BP1也可称DLX9。

BP1蛋白是新近发现的转录因子与人类乳腺癌发生密切相关，有研究表明BP1的高表达与多种恶性肿瘤的发生密切相关。有研究在急性白血病中BP1的表达高于正常人，其主要机制为BP1在肿瘤的形成中发挥上游因子的作用。依据相关临床研究实践表明，BP1可能属于乳腺癌的肿瘤形成重要上调因子，可能促进机体肿瘤的形成和发展，且机体乳腺癌组织内的BP1阳性表达，明显比癌旁的正常组织内高[2]。机体PR、ER和C-erbB-2乳腺癌的内分泌相关敏感性判断重要病理指标，BP1蛋白的表达可与其指标具有正相关性。依据相关研究表明，Bcl-2蛋白参与很多肿瘤发生和发展，Bcl-2蛋白具有细胞凋亡抑制以及细胞生存期延长作用，当乳腺癌细胞处于凋亡期期，Bcl-2蛋白具有直接影响[3-9]。依据相关研究表明，BP1蛋白的表达对于机体Bcl-2的上升表达具有促进效果[10-11]。

表3 研究组中BP1和临床病理相关性情况（±s，n=72）

表3 研究组中BP1和临床病理相关性情况（±s，n=72）

ER（%） PR（%） C-erb-B-2（%）0～50 51～100 0～50 51～100 0～50 51～100 Westem blot（+） 1.2±0.5 0.7±0.6 1.1±0.5 0.7±0.6 0.5±0.4 1.0±0.5免疫组化（+） 348.5±130.3 251.8±131.1 352.2±106.5 245.4±180.6 123.8±123.4 342.1±130.5方法

本研究表明，研究组组织内BP1的阳性表达，比对照组组织内BP1阳性表达高，比较差异具统计学上的意义，说明在本组研究中BP1可以作为乳腺癌诊断标志物；研究组的乳腺癌的组织Bcl-2的蛋白阳性表达和BP1阳性表达具正相关性，由此可以推断，BP1可能通过雌二醇的调节作用而升高，发挥其诱导癌变。研究组标本中BP1的阳性表达和乳腺癌病理因素中PR、ER和C-erb-B-2具相关性；BP1的阳性表达和患者绝经、年龄、肿瘤大小、病理类型、临床分期以及Ki-67等相关因素不相关，表明BP1不能应用到对乳腺癌治疗的疗效监控。研究表明乳腺癌组织内BP1的阳性表达和乳腺癌的发生以及组织内Bcl-2的蛋白阳性表达具有相关性。

综上所述，乳腺癌患者的乳腺癌组织内BP1蛋白阳性表达，可同乳腺癌的发生、发展具有相关性，且可与Bcl-2的上升表达的促进具有相关性，从而产生乳腺癌的细胞凋亡抑制作用，具有一定临床研究和应用价值。

[1] 李淑莲，李丽娟，单叔煤.BP1蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表达及意义[J].中国妇幼健康研究，2011，24（1）：467-469.

[2] 贺广珍，李金运，张敬川.乳腺癌组织中BP1与Bcl-2表达相关性的临床意义[J].现代肿瘤医学，2013，21（9）：316-317.

[3] 温芝华.花生四烯酸通过mTOR通路促进乳腺癌发生[D].广州：南方医科大学，2011：38-42.

[4] 苏静，李孟圈，陈明勋，等.乳腺癌中BP1及mTOR的表达及临床意义[J].山东医药，2011，16（44）：291-293.

[5] Shanmugam R， Kusumanchi P，Cheng L，et al.A water-soluble parthenolide analogue suppresses in vivo prostate cancer growth by targeting NFkappaB and generating reactive oxygen species[J].Prostate，2010，25（4）：1234-1236.

[6] 张珊珊，柯越海.支架蛋白Gab2信号调控与乳腺癌[J]. 中国生物化学与分子生物学报，2011，7（4）：61-62.

[7] 任妮丽.重组人干扰素α-2b对乳腺癌MCF-7细胞端粒酶活性的影响[J]. 湖北医药学院学报，2011，8（1）：103-104.

[8] Brito OM，Scorrano L.Mitofusin 2 tethers endoplasmic reticulum to mitochondria[J].Nature.2008，124（25）：4256-4262.

[9] Liu JW，Cai MX，Xin Y，et al.Parthenolide induces prolifera-tion inhibition and apoptosis of pancreatic cancer cells in vitro[J]. Exp Clin Cancer Res，2010，24（5）：2412-2416.

[10] 刘科.抑癌基因ING4转染对乳腺癌细胞MDA-MB-435S生物学行为的影响[J].华中科技大学学报（医学版），2010，9（4）：55-56.

[11] 梁静，卞美璐.泛素结合酶E2-EPF高表达质粒的构建及对绒癌细胞JEG-3生长功能的初步探讨[J].中日友好医院学报，2011，7（3）：23-24.