肝静脉主干缩窄法制备家兔布加综合征模型

汪海军 吴 猛 牛 坚 刘 斌

（1.徐州医学院 江苏 徐州 221002；2.徐州医学院附属医院普外科 江苏 徐州 221002）

布加综合征（Budd－Chiari syndrome，BCS）是由各种原因引起的较大肝静脉或肝段下腔静脉部分／完全梗阻性肝静脉——下腔静脉血液回流障碍，导致淤血性门静脉高压症和下腔静脉高压症两大综合征［1］。BCS尤其是肝静脉阻塞型布加综合征的外科治疗，一直是血管外科领域中的疑难重症，是内科、外科、介入科和影像医学研究的重点和难点［2］。而布加综合征的发病机制仍不十分清楚，其中可能的原因之一是缺乏理想的动物模型。本实验通过缩窄肝静脉主干的手段，在家兔上成功制作了这种模型。

1 材料与方法

1.1 动物选择：20只家兔（由徐州医学院实验动物中心提供）。雌雄各半，体重为2.0kg－2.7kg，平均2.3kg，随机等分为实验组（10只）和对照组（10只）。

1.2 麻醉方法：全身麻醉，耳缘静脉静脉注射戊巴比妥钠（1.0ml／kg体重）。

1.3 操作步骤：手术前24h禁食（可以饮水），麻醉成功后术区备皮。选择上腹正中切口，0.5%碘伏消毒，覆盖无菌巾单。切开口取约10cm长，切开腹壁各层组织进腹，牵开腹壁，向下牵开兔肝显露第二肝门，离断镰状韧带。用血管钳自外侧向内分离出肝右静脉带线标记。自左侧离断左三角韧带，切开下腔静脉表面腹膜及血管外膜，用直角钳自肝右静脉和肝中静脉之间的裂隙（已穿线标记处）向左侧分离出肝左静脉和肝中静脉共干处（汇入下腔静脉开口处），钳子露头后，尺子测量共干处血管横径R，带线穿过共干备用。预计缩窄后的血管周径C＝Rπ＊20%.计算出C值后，用尺子测量与C值等长的双线（一根线对折，从对折处量起），然后双股线线尾打三叠结固定死成圆环状线圈，将此线圈穿过肝左静脉和肝中静脉共干处（汇入下腔静脉开口处），用其中的一根线头穿过圆环后打结。至此，主干肝静脉缩窄成功。缩窄后的主干静脉周径理论值为原来主干周径的约80%.缩窄后观察相应肝叶淤血改变。检查术野无活动性出血。逐层关腹。对照组同样麻醉备皮进腹后不做任何处理再关腹。依次缝合切口。术后送回饲养笼中，注意保持呼吸道通畅，防止误吸死亡。完全清醒后正常喂养。手术后8周两组分别在全麻下进入腹腔，先穿刺插入导管进入肠系膜上静脉来测门静脉压力，先观察肝脏外形和腹腔积液情况，再观察胃底、膈肌血管和食管下端扩张情况；游离解剖肝静脉开口处和下腔静脉，切下肝脏组织作病检。

1.4 统计学方法：数据以均数±标准差表示。采用t检验。

2 结果

实验组术1周后测量出现开口处内径缩小，肝左静脉内径缩小，门静脉内径增粗，门静脉流速及肝左静脉流速减慢，与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组术后2周测量肝左静脉远端内径开始增粗，门静脉流速及肝左静脉流速均较对照组加快。术后第4周实验组肝左静脉内径及门静脉内径缩小，肝左静脉流速增快明显，与对照组相比差异明显，有明显统计学意义（P＜0.01）。两组家兔开口处内径，肝左V内径，门V内径，门静脉流速，肝左静脉流速测量结果详见表1。

术后8周实验组门静脉压力升高明显（详见表2），与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.01），大体解剖见肝脏表面可见弥漫性粟粒样结节，直径为0.2～1.1cm，明显肝硬化表现；肝静脉高度狭窄，部分闭塞内可见的血栓组织；10例均出现腹水，其中2例严重肝硬化者肝脏体积变小。而对照组没有上述表现。实验组病理切片见肝静脉内膜炎和血栓形成，肝静脉管腔出现纤维化、狭窄或闭塞，有点呈纤维索条状改变，扩张的肝小叶静脉，肝窦扩张，淤血明显，看到大量红细胞；可见较多的肝静脉闭塞和胆管闭塞，部分肝组织变性、坏死，脂肪变性，可见炎性细胞浸润，小叶中央区纤维化，可见结节性增生和纤维化。在中小肝静脉内可发现血栓，大肝静脉内也可发现，并延伸至下腔静脉。可见中重度瘀血性脾肿大。而对照组无上述表现。实验组3例（30%）可发现胃底、食管下端静脉曲张，侧枝循环血管增加；病理组织切片检查6例（60%）可见胃黏膜表面充血水肿明显、有的可见点状糜烂。可在膈肌表面发现很多的浅静脉曲张。而对照组组织结构正常。

表1 各组家兔开口处内径，肝左V内径，门V内径，门静脉流速，肝左静脉流速测量结果

表2 各组家兔手术前后门静脉压力测量结果

3 讨论

近年来对于布加综合征的影像诊断及治疗方法等临床方面研究较多，但其基础研究报道较少，特别是其发病机制及病因尚未完全明确。因此对布加综合征的基础研究还需要深入，而理想的布加综合征动物模型将为这些研究提供便利。动物模型一直是探讨人类疾病的活体替代对象，不仅有利于病因学研究，而且有利于药物治疗方案和手术治疗方案的探讨，有利于比较和总结各种治疗方案的优点以及不足之处［3］。然而目前制备肝静脉阻塞型布加综合征动物模型的方法报道不多。王春喜等［4］通过介入技术制备肝静脉阻塞性布加综合征犬模型。介入方法的实施需要专门的技术与特殊的设备，限制了模型的广泛使用，而且这种模型血流动力学干扰大，不适于这方面研究［5］。

我们的经验是通过外科技术找出肝右静脉和肝左静脉及肝中静脉共干（汇入下腔静脉开口处），保留一支主干肝静脉（肝右静脉），通过缩窄肝左静脉和肝中静脉共干处（汇入下腔静脉开口处），缩窄约80%，导致肝静脉阻塞和局部血栓形成，逐渐形成肝静脉闭塞或严重狭窄，造成肝脏血液回流障碍，瘀血性肝脏肿大，逐渐形成肝硬化、门静脉高压症，并出现胃底食管静脉迂曲扩张现象，病理切片下形态学结构与人类肝静脉阻塞引起的肝硬变即布加综合征形成的肝硬变一致。

本实验动物模型的优点：（1）成本低。通过外科手术技术缩窄主干肝静脉的大部分（非完全结扎）造成局部狭窄，血栓形成达到阻塞肝静脉的目的。（2）拟人性、可重复性好。由于家兔肝脏组织与人类相似，模型出现的征象和病理形态与人类一致，模型组均出现肝静脉回流障碍、门静脉高压和肝硬变，胃底食管静脉出现典型的扩张现象，故其拟人性和重复性较好。（3）此方法造模成功率高，死亡率低，周期短，方法简单易行。本模型还有待改进的地方，可以在肝左静脉和肝中静脉共干处前方平行放置1枚9号钝头L形针，用丝线连同共干处静脉干一并结扎，随后移去L形针，也可完成肝静脉主干缩窄，大约可缩窄75%－80%.下一步实验拟采用这种方法。

［1］Janssen HL，Garcia－Pagan JC，Elias E，et al.Budd－Chiari syndrome：a rerview by an expert panel.J Hepatol，2003，38：364－371

［2］Hernandez－Guerra M，Turnes J，Rubinstein P，et a1.PTFE－covered Stents improve TIPS patency in Budd－Chiari syndrome.Hepatology，2004，40：1197－1202

［3］Terasaki M，Kitai T，Morimoto T，et a1.Hemodymics and hepatic energy metabolism in canine model of actue hepactic venous occlusion with mesoveral shunt.Eur Surg Res，1994，26：19－27

［4］王春喜，梁发启，韩丽娜，等.肝静脉阻塞型布加综合征动物模型的制作［J］.中华实验外科杂志，2005，22（4）：494－495

［5］邓礼明，张启瑜.门静脉高压症大动物模型的研制进展［J］.温州医学院学报，2010，40（1）：99－102