青蒿素紫外光谱行为及测定方法研究

韩志慧

（天津市林业果树研究所，天津 300192）

青蒿（Artemisia annua L.）又称黄花蒿，为常用的中草药之一。青蒿素（artemisinin，QHS）是中国科学工作者从青蒿中提取、分离、鉴定的一种新型抗疟药，因其结构特殊，疗效高而毒性很低，引起国内外的重视［1，2］。尤其是近年来，青蒿素的国际市场行情很好，中国国内已有多家企业从事青蒿素的生产。青蒿广泛分布于中国南北各地，资源十分丰富。由于青蒿品种、种植条件、种植技术等的差异，从而导致青蒿中青蒿含量的不同［3］。

目前已有报道青蒿素的测定方法主要有反相高效液相色 谱法（RP－HPLC 法［4－6］、薄 层 色 谱 法［7］、红 外 光 谱 法［8］等。由于青蒿素仅在紫外区203nm 处有较弱的末端吸收，但与碱（0.2% NaOH）反应后，产生一化合物（α，β－不饱和酮酸盐，Q292），该物质在292nm 处有最大吸收，可用于紫外分光光度法测定。化合物（Q292）在pH 5.58～6.04 条件下，又可定量地转化为化合物Q260，该物质在260nm 处有最大吸收，可用于高效液相法定量测定青蒿素含量。目前研究［9］报道应用较多的是RP－HPLC法。

但对于青蒿素生产企业而言，在青蒿的收购时期，需要对大量的原料样品进行检测。由于液相检测每检测一个样品，包括前期准备时间，通常需要5～10 min，因此需要多台液相色谱同时工作，这务必需要增加检测成本。本试验利用青蒿素与碱反应后产生的化合物（Q292）在292nm 处有最大吸收的特点，建立一个快速、准确的低成本的青蒿素紫外分光光度法。

1 材料与方法

1.1 原料、试剂及仪器

青蒿：天津药材公司；

青蒿浸膏：青蒿素含量9.0%（RP－HPLC 法测定），本实验室自制；

青蒿素对照品：99.9%，美国Sigma公司；

石油醚（30～60℃）、95%乙醇、NaOH 等：均为分析纯，天津科威试剂公司；

紫外可见分光光度计：UV－1750，日本岛津公司；

电子天平：AUW120D，长沙湘仪公司。

1.2 试验方法

1.2.1 提取方法 参考文献［10］，略有改动，将经过筛选的青蒿叶置于烘箱中40℃烘烤3h后取出，用瓷乳钵研磨至粉状，过筛60目，制成青蒿叶粉，储于干燥器中备用。准确称取青蒿样品1g置纸筒中，置于索氏提取器中，加入石油醚浸泡，提取温度50 ℃，提取至溶剂无色，提取时间2h。浓缩去石油醚，得青蒿浸膏。

1.2.2 浸膏的处理 取青蒿浸膏58 mg，加入50 mL 石油醚溶解后，置分液漏斗中，再加入50 mL 2% NaOH 溶液振荡静置分层，弃去下层碱液后，加入50 mL 蒸馏水洗去碱溶性部分至中性。经水洗后的提取液置于圆底烧瓶中55 ℃减压浓缩，得到含青蒿素的浸膏，再以95%乙醇溶解浸膏，并定容于50mL容量瓶，得样品原液（A）。

另取青蒿浸膏58mg，加入95%乙醇溶解浸膏，并定容于50mL容量瓶，得样品原液（B）。

1.2.3 青蒿素紫外光谱行为测定与标准曲线的制定 精确称取80 ℃干燥至恒重的青蒿素标准品5.0 mg置50 mL 容量瓶中，用95%乙醇溶解稀释至刻度，得标准溶液C。

（1）青蒿素紫外光谱行为的考察：吸取标准溶液C 8mL于50mL容量瓶中，以95%乙醇补充至10 mL，补加0.2%NaOH 溶液至刻度，置（50±1）℃水浴中反应30 min，流水冷却至室温，得标准溶液C1。

另吸标准溶液C 8mL于50mL容量瓶中，以95%乙醇补充至10mL，补加蒸馏水至刻度，置（50±1）℃水浴中反应30min，流水冷却至室温，得标准溶液C2。分别考察标准溶液C1和C2的紫外光谱行为。

（2）青蒿素标准曲线的制定：分别吸取标准溶液C 0，2，4，6，8，10 mL 于50 mL 容 量 瓶 中，以95%乙 醇 补 充 至10mL，补加0.2% NaOH 溶液至刻度，置（50±1）℃水浴中反应30 min，流水冷却至室温。以空白为对照，并测定292nm 处的吸光值，制定标准曲线。

1.2.4 待测溶液的制备与测定

（1）样品溶液A1：吸取样品原液A 5mL于50mL容量瓶中，补充95%乙醇至10mL后，加入0.2% NaOH 溶液至刻度。50 ℃水浴中反应30 min后取出，流水冷却至室温。以空白为对照，考察溶液的紫外光谱行为，记录292nm 处的吸光值。

（2）样品溶液A2：吸取样品原液A 5mL于50mL容量瓶中，补充95%乙醇至10mL后，加入水至刻度。50℃水浴中反应30min后取出，流水冷却至室温。以空白为对照，考察溶液的紫外光谱行为，记录292nm 处的吸光值。

（3）样品溶液B1：吸取样品原液B 5mL 于50mL 容量瓶中，补充95%乙醇至10mL后，加入0.2% NaOH 溶液至刻度。50 ℃水浴中反应30 min后取出，流水冷却至室温。以空白为对照，考察溶液的紫外光谱行为。

（4）样品溶液B2：吸取样品原液B 5mL 于50mL 容量瓶中，补充95%乙醇至10mL后，加入水至刻度。50℃水浴中反应30min后取出，流水冷却至室温。以空白为对照，考察溶液的紫外光谱行为。

浸膏中青蒿素含量按式（1）计算：

2 结果与分析

2.1 青蒿素对照品的紫外光谱行为

标准溶液C1和C2紫外光谱行为见图1和图2。由图1和图2可知，青蒿素经0.2% NaOH 溶液处理前后标准溶液C1和C2的紫外光谱行为不同。图2 的最大吸收波长为292nm，图1为212nm。这是由于50 ℃时青蒿素在0.2%NaOH 溶液中，定量生成α，β－不饱和酮酸盐，得到一吸收峰在292nm 处的化合物。青蒿素对照品不经0.2% NaOH 溶液于50 ℃处理，溶液在292nm 处吸收很小。

2.2 青蒿样品液A 的紫外光谱行为

图1 青蒿素标准溶液C1 的紫外光谱Figure 1 Artemisinin standard solution C1 UV spectral behavior

图2 青蒿素标准溶液C2 的紫外光谱Figure 2 Artemisinin standard solution C2 UV spectral behavior

图3 青蒿素样品溶液A1 的紫外光谱Figure 3 Artemisinin sample solution A1 UV spectral behavior

图4 青蒿素样品溶液A2 的紫外光谱Figure 4 Artemisinin sample solution A2 UV spectral behavior

图3青蒿素样品溶液A1和A2紫外光谱扫描结果见图3和图4。由图3和图4可知，样品溶液A1在292nm 处有较强的吸收，其吸收光谱同青蒿素对照品在260～290nm 处基本相似，在292nm 处的吸光值为0.766；样品溶液A2在292nm 处的吸收较弱，吸光值为0.122。这一结果表明样品溶液A1有α，β－不饱和酮酸盐存在；而样品溶液A2由于没有添加0.2% NaOH，没有α，β－不饱和酮酸盐生成，因此其在292nm 处的吸收不是来源于青蒿素，而是来源于样品原液中的其它非青蒿素类物质的吸收，属于背景吸收，在进行样品的定量测定时应将此部分吸光值减去。

2.3 青蒿样品原液B的脱蜡处理对紫外光谱影响

青蒿素样品溶液B1和B2紫外光谱扫描结果见图5和图6。由图5和图6可知，样品溶液B1和B2在292nm 的吸光值要大于相应的溶液A1和A2的吸光值。这一结果表明，青蒿浸膏中蜡质物质对青蒿素的吸收有影响。如果青蒿浸膏不经2% NaOH 溶液的脱蜡处理，青蒿浸膏在292nm下吸光值将升高，从而造成青蒿素含量测定结果偏高。

2.4 标准曲线的考察

青蒿素的标准曲线见图7。对图7标准曲线进行线性回归，回归方程：

式中：

图5 青蒿素样品溶液B1 的紫外光谱Figure 5 Artemisinin sample solution B1 UV spectral behavior

图6 青蒿素样品溶液B2 的紫外光谱Figure 6 Artemisinin sample solution B2 UV spectral behavior

图7 青蒿素的标准曲线Figure 7 The standard curve of Artemisinin

x—— 青蒿素含量，mg；

y——292nm 处的吸光值（OD）。

回归结果表明青蒿素在292nm 的吸光值与青蒿素含量0.2～1.0mg／mL范围下呈线性相关。

2.5 自制青蒿浸膏中青蒿素含量的测定

经吸光度测定样品A1中ODA1＝0.766，样 品A2中ODA2＝0.122，ΔOD ＝ODA1－ODA2＝0.644。将ΔOD 代入标准曲线回归方程，可推得样品溶液A1中青蒿素含量为0.539 mg。进一步可推得自制浸膏中青蒿素含量为9.29%。该测定结果同RP－HPLC 测定数据9.0%基本一致。如果直接将样品A1的ODA1＝0.766代入回归方程，计算得出浸膏中青蒿素含量为11.2%，这一数值将比实值高出24.4%，使测定结果偏高。

3 结论

青蒿浸膏经2% NaOH 溶液脱蜡处理后，可有效消除青蒿原料中蜡质对青蒿素在292nm 下吸光值的影响。针对青蒿素α，β－不饱和酮酸盐在292nm 下具有特征吸收，建立了青蒿素含量测定的紫外分光光度法。HPLC 法和紫外分光光度法检测技术广泛应用食品和药品的检测工作［11，12］。HPLC法每检测一个样品需要5～10 min；而紫外分光光度法上机测定一个试样只需30s～1 min。另外，购置一台液相色谱仪需要数十万元的资金，而购置一台紫外分光光度计只需一万元左右的资金。因此，应用紫外分光光度法可太大缩短了检测时间，提高了检测效率，降低检测费用。因此，紫外分光光度法相对于RP－HPLC法而言，具有投资少，检测量大，检测速度快的特点，该技术可广泛应用于青蒿素加工生产企业的原料收购中。

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12 陈意光，阮文红，罗东辉，等.紫外分光光度法测定食品模拟物中六价铬和铝［J］.食品与机械，2012，28（5）：65～67.