Survivin、PCNA在子宫内膜异位症组织中的表达及其意义

李书艳，冯卫群

（浙江省舟山市中医骨伤联合医院妇科，浙江舟山 316000）

Survivin、PCNA在子宫内膜异位症组织中的表达及其意义

李书艳，冯卫群

（浙江省舟山市中医骨伤联合医院妇科，浙江舟山 316000）

目的观察凋亡抑制蛋白（Survivin）、细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）在子宫内膜异位症组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学法检测子宫异位症患者43例在位内膜组织和异位内膜组织及正常健康的子宫内膜组中Survivin和PCNA的表达水平。结果Survivin、PCNA在子宫内膜异位症患者在位子宫内膜组和异位内膜组的表达与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），而在位子宫内膜组和异位内膜组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论Survivin和PCNA在子宫内膜异位组表达明显增高，Survivin和PCNA可能与子宫内膜异位症的发生密切相关。

子宫内膜异位症；凋亡抑制蛋白质类；细胞增殖核抗原

子宫内膜异位症（endometriosis，EM）是妇科最常见的疾病之一，是指具有生长功能的子宫内膜出现在子宫体以外的部分，其主要临床表现为疼痛、不孕和其他症状，在育龄妇女中的发病率为10％～15％［1］。EM虽然是良性病变，但是却具有局部播散、远处转移的恶性行为，治疗后易复发，甚至发生恶性变，其发病机制目前仍不明确。因此，寻找EM的病因已经成为医学研究热点，异位子宫内膜细胞得以在宫腔外种植并继续存活，与其凋亡及增殖特性改变有关。为此，本研究对细胞增殖核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和凋亡抑制蛋白（Survivin）在子宫内膜组织中的表达进行分析，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2006年1月—2011年1月在我院妇产科经过手术后病理确诊为EM患者43例，年龄24～43岁，平均（33.6±3.1）岁。所有入选对象均符合下列标准。①月经规律，无内科并发症；②术前半年未服用过激素等药物，按r-AFS分期标

准［2］，Ⅰ～Ⅱ期24例，Ⅲ期10例，Ⅳ期9例。选取同期因子宫肌瘤行子宫切除术而子宫内膜组织正常的患者20例为对照组，年龄26～39岁，平均（31.8±2.7）岁。2组患者年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 免疫组织化学染色方法：对43例EM患者异位子宫内膜组织、在位子宫内膜组织和20例对照组子宫内膜组织进行免疫组织化学检测。Survivin和PCNA鼠单克隆抗体均购于武汉博士德生物工程有限公司，SP试剂盒、二氨基联苯胺显色剂均购于北京中杉金桥生物技术有限公司，严格按照试剂盒染色操作程序进行。石蜡切片脱蜡至水后，在30mL的3％H2O2去离子水孵育10min以消除内源性过氧化物酶活性；抗原修复后分别滴加一抗，4℃过夜，PBS冲洗3次；滴加生物素标记的二抗工作液，37℃孵育30min，PBS冲洗3次；滴加辣根酶标记链霉卵白素，37℃孵育30min，PBS冲洗3次；DAB显色；自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水透明，常规封片。用PBS代替一抗做阴性对照。

1.3 结果判断标准：Survivin和PCNA均为粗细不一的棕黄色颗粒，由我院2名病理科医师观察每张切片，染色为棕黄色颗粒为阳性，随机选择10个高倍视野进行观察，每个视野观察100个细胞中的阳性细胞比例，取平均数作为结果，其中无阳性细胞为（-），阳性细胞数＜25％为（+），25％～50％为（++），＞50％为（+++）。

2 结果

2.1 Survivin在EM及正常对照组表达情况：Survivin在在位子宫内膜患者中阳性率为79.06％，在异位内膜中阳性率为90.69％，在对照组中阳性率为10.00％，在位内膜和异位内膜阳性率与对照组比较差异有统计学意义（χ2=26.59、39.12，P＜0.01），而在位子宫内膜组和异位内膜组比较差异无统计学意义（χ2=2.27，P＞0.05）。见表1。

表1 Survivin在EM及正常对照组表达情况Table 1 Survivin expression in EM and normal control groups（n）

2.2 PCNA在EM及正常对照组表达情况：PCNA在在位子宫内膜组患者中阳性率为74.42％，在异位内膜组中阳性率为88.37％，在对照组中阳性率为40.00％，在位内膜和异位内膜阳性率与对照组阳性率比较差异有统计学意义（χ2=5.69、21.10，P＜0.05，P＜0.01），而在位子宫内膜组和异位内膜组比较差异无统计学意义（χ2=2.76，P＞0.05）。见表2。

表2 PCNA在EM及正常对照组表达情况Table 2 PCNA expression in EM and normal control groups（n）

3 讨论

EM发病机制至今仍不明确，其中经血逆流学说是比较公认的机制，认为脱落的子宫内膜组织通过输卵管逆流入腹腔而种植于腹膜表面，几乎所有的妇女都存在经血逆流现象，但最终发生EM的却是少数。有研究［3］认为这可能是增殖活跃、凋亡减弱的子宫内膜脱落后，随经血逆流至其他部位后能继续生长，引起EM。推测增值活跃和凋亡减弱是发生EM的关键因素。

Survivin是最近研究发现的抗凋亡因子，也是目前为止发现的作用最强的凋亡抑制因子，其具有抑制细胞凋亡及参与血管形成等功能，并且其只多表达在未成熟的组织及癌组织中［3-4］。PCNA是一种相对分子质量为36的酸性核内蛋白质，由261个氨基酸组成，参与DNA多聚酶的活性作用，与细胞的增长关系密切，近年来PCNA广泛应用于恶性肿瘤及一些增生性疾病的研究中［5-6］。本研究中在位子宫内膜和异位内膜Survivin和PCNA阳性率与对照

组比较差异均有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01），而在位子宫内膜组和异位内膜组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。说明在增殖增强和凋亡减弱的双重作用下，月经期脱落的内膜中存在继续生长的内膜细胞，而这些能继续生长的细胞随着经血逆流至腹腔后继续生长，从而发生了EM。在这一过程中Survivin保护了内膜细胞不会凋亡，而PCNA保持了内膜细胞的增殖能力。

综上所述，笔者认为PCNA和Survivin过度表达在EM发病中发挥了重要的作用，但是对于PCNA和Survivin在子宫内膜中过度表达是导致EM发病的原因，还是在EM的发病中与其他因素共同发挥作用，有待进一步研究。

［1］ ABBASS，IHLE P，KÖSTER I，et al.Prevalence and incidence of diagnosed endometriosis and risk of endometriosis in patients withendometriosis-related symptoms：findings from a statutory health insurance-based cohort in Germany［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，2012，160（1）：79-83.

［2］ RAMOS IM，PODGAEC S，ABRÂO MS，et al.Evaluation of CA-125 and soluble CD-23 in patients with pelvic endometriosis：a case-control study［J］.Rev Assoc Med Bras，2012，58（1）：26-32.

［3］ JIN Y，SHAO CK，TANG LY，et al.Protein expression and significance of survivin and NF-κB in hepatocellular carcinoma［J］.Zhonghua Yi Xue Za Zhi，2011，91（36）：2542-2545.

［4］ BIAN K，FAN J，ZHANG X，et al.MicroRNA-203 leads to G1 phase cell cycle arrest in laryngeal carcinoma cells by directly targeting surviving［J］.FEBS Lett，2012，586（6）：804-809.

［5］ DEMIRALAY E，ALTACA G，DEMIRHAN B.Morphological evaluation of parathyroid adenomas and immunohistochemical analysis of PCNA and Ki-67 proliferation markers［J］.Turk Patoloji Derg，2011，27（3）：215-220.

［6］ SALEHINEJAD J，ZARE-MAHMOODABADI R，SAGHAFI S，et al.Immunohistochemical detection of p53 and PCNA in ameloblastoma and adenomatoid odontogenic tumor［J］.JOral Sci，2011，53（2）：213-217.

（本文编辑：赵丽洁）

EXPRESSION AND SIGNIFICANCE OF SURVIVIN AND PCNA IN ENDOM ETRIOSIS

LIShuyan，FENGWeiqun
（Department of Gynaecology，Orthopedics＆Traumatology of Chinese Medicine Hospital of Zhoushan City，Zhejiang Province，Zhoushan 316000，China）

Objective To observe the expression and significance of Survivin and proliferating cell nuclear antigen（PCNA）in endometriosis.M ethods Immunohistochemical method was used to examine the expression of Survivin and PCNA in endometrium and ectopic endometrial tissues of43 cases of uterine endometriosis patients and normal endometrium of 20 cases of healthy people.Results Survivin and PCNA expression in eutopic endometrium and ectopic endometrium group were significantly different（P＜0.05，P＜0.01）from those of control group，while there was no significant difference between eutopic endometrium and ectopic endometrium group（P＞0.05）.Conclusion Survivin and PCNA expression in endometriosiswas significantly higher，whichmaybe associated with the occurrence of endometriosis.

endometriosis；inhibitor of apoptosis proteins；proliferating cell nuclear antigen

R711.71

A

1007-3205（2013）01-0018-03

2012-02-08；

2012-04-07

李书艳（1977-），女，浙江舟山人，浙江省舟山市中医骨伤联合医院主治医师，医学硕士，从事妇产科疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.01.007