HPLC法测定肾衰宁丸中盐酸小檗碱的含量

姜启娟 刘 畅 韩 宇

（1吉林省通化市食品药品检验所，通化134000；2吉林省吉林市食品药品检验所，吉林132000）

HPLC法测定肾衰宁丸中盐酸小檗碱的含量

姜启娟1刘 畅1韩 宇2

（1吉林省通化市食品药品检验所，通化134000；2吉林省吉林市食品药品检验所，吉林132000）

肾衰宁丸；盐酸小檗碱；HPLC

肾衰宁丸是由太子参、黄连、丹参、半夏（制）、陈皮、茯苓、大黄等十味中药组成。黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch．三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao或云连Coptisteeta Wall.Paeonia lactiflora Pall.的干燥根茎。主要成份为盐酸小檗碱、盐酸巴马汀等。用于湿热痞满，呕吐吞酸等症。与本品的功能主治有密切关系，是本制剂的主药之一。因此，以黄连中盐酸小檗碱作为含量测定指标来控制本制剂的内在质量具有合理性。我们采用反相高效液相色谱法测定黄连中盐酸小檗碱的含量，方法简便，易于操作，结果准确，重现性良好。

1 仪器与试药

日本岛津LC-2010AHT高效液相色谱仪；AB265-S型电子天平，BSA224S型电子天平。

盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200208，产地：中国药品生物制品检验所，规格：供含量测定用），乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱柱依利特C18（4.6×200mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05mol／L磷酸二氢钾溶液（30∶70）；流速：0.8ml／min；检测波长：349nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于3000。

2.2 对照品及样品溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加盐酸-70%乙醇（1∶100）混合液制成每1ml含50μg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约0.7g，精密称定，精密加盐酸-70%乙醇（1∶100）混合液50ml，称定重量，加热回流1小时，取出，放冷，再称定重量，用盐酸-70%乙醇（1∶100）混合液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml置10ml量瓶中，用盐酸-70%乙醇（1∶100）混合液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备取不含黄连的阴性对照样品照供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2.3 干扰试验照上述色谱条件，吸取上述三种溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照样品溶液在此保留时间无干扰，证明此方法可行。

2.4 线性关系考察分别精密吸取对照品溶液2、6、10、14、18μl测定，以进样量和峰面积积分值进行回归，得到回归方程为Y＝4342997.059x-5331，r＝0.9999。结果表明盐酸小檗碱在0.051～0.459μg范围内，呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验分别精密吸取同一供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，连续进样6次，盐酸小檗碱面积平均值为110425，其RSD＝0.15%。

2.6 稳定性试验分别精密吸取同一供试品溶液10μl，于0，2，4，8，12h进样，测定盐酸小檗碱平均峰面积值为1129755，其RSD＝0.20%。

2.7 重复性试验取同一批样品6份，按供试品溶液的制备方法制备、测定，结果盐酸小檗碱平均含量为18.1mg／g，其RSD＝0.36%。

2.8 回收率试验精密称取已知含量的供试品（含量为18.16mg／g）6份，分别精密加入对照品溶液（0.451mg／ml）20ml，依法测定，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果

如表1所示，测得盐酸小檗碱的平均回收率为99.98%，RSD＝0.14%

2.9 样品含量测定取3批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，结果见表2。

表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果（n＝4）

3 讨论

3.1 流动相的选择我们对乙腈-0.033mol／L磷酸二氢钾溶液（30∶70）、乙腈-0.05mol／L磷酸二氢钾溶液（30∶70）进行优化试验，结果，以乙腈-0.05mol／L磷酸二氢钾溶液（30∶70）为流动相分离效果较好，保留时间适度，因此，确定其为本法的流动相。

3.2 提取方法的考察我们采用了盐酸-甲醇（1∶100）混合溶液在60℃水浴加热超声提取。用盐酸-甲醇（1∶100）混合溶液加热回流提取；用盐酸-乙醇70%（1∶100）混合溶液加热回流提取；经对比发现用盐酸-70%乙醇（1∶100）混合溶液加热回流提取方法测定含量高，分离效果好。因此我们采用正文所述的供试品溶液的制备方法。

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.19.103

1672-2779（2013）-19-0148-01

苏 玲

2013-08-29）