青风藤植物不同部位中青藤碱的含量测定

谢丽明 李荣贵 巴文强

（1广东省中医院药学部，广州510120；2广州中医药大学中药学院，广州510006）

青风藤植物不同部位中青藤碱的含量测定

谢丽明1李荣贵1巴文强2

（1广东省中医院药学部，广州510120；2广州中医药大学中药学院，广州510006）

目的测定青风藤植物不同部位中青藤碱的含量，为合理有效地开发青风藤中药资源提供依据。方法 采用高效液相色谱法，以Diamonsil-C18（4.6×250mm，5μm）为色谱柱，甲醇-水（50∶50）为流动相，检测波长为262nm，流速：1.0ml／min；进样量10μl条件下测定。结果 青藤碱在0.27μg～13.50μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为99.46%，RSD值为1.66%；青风藤根中青藤碱的平均含量为1.65%，藤茎皮为1.35%，茎为0.28%，叶为0.11%。结论 不同部位青风藤中青藤碱的含量具有较大差异，其中根中最高，藤茎皮次之，茎和叶中较低。

青风藤；青藤碱；高效液相色谱法

青风藤为防己科植物青藤Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.和毛青藤Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.var.cinereum Rehd.et Wils.的干燥藤茎，功能祛风湿，通经络，利小便，用于治疗风湿痹痛，关节肿胀，麻痹瘙痒等症［1］。中医应用青风藤治疗疾病已有千年的历史，《本草汇言》：清风藤，散风寒湿痹之药也，能舒筋活血，正骨利髓，故风病软弱无力，并劲强偏废之证，久服常服，大建奇功。《本草便读》：凡藤蔓之属，皆可通经入络，此物善治风疾，故一切历节麻痹皆治之，浸酒尤妙。

《日本药局方》第15改正版收载的青风藤，以根入药，治疗肌肉、神经和关节等疼痛。《陕西中草药》收载的青风藤，也是以根入药。《本草图经》：“清风藤，生天台山中。其苗蔓延木上，四时常有，彼土人采其叶入药。”则是用其叶入药，这与中国药典规定的青风藤以藤茎入药不同［2］。青风藤中的化学成分主要有青藤碱、胡萝卜苷、尖防己碱、蝙蝠葛波酚碱等［3-4］。有文献报道从青风藤根中提取青藤碱的

研究［5-6］。青藤碱的含量测定方法有反相离子对色谱法、RPHPLC、HPLC等［7-9］。本试验建立了青藤碱的HPLC测定法，对青风藤的根、藤茎皮、茎枝和叶进行测定，为青风藤入药部位选择及合理利用资源提供试验依据。

1 仪器与试药

1.1仪器Summit P680型高效液相色谱仪（德国Dionex公司）；色谱柱Diamonsil柱-C18（4.6mm×250mm，5μm，美国菲罗门公司）；KQ5200DE型数控超声清洗器（功率：200W，江苏省昆山市超声仪器有限公司）；AUW120电子分析天平（日本岛津）；中药粉碎机（浙江瑞安市永历制药机械有限公司）。

1.2试药青藤碱对照品（含量测定用，中国药品生物制品检定所提供，批号：110774-200806）；甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯；青风藤植物在秋末采自广东，经鉴定为防己科植物青藤Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.。将采来的新鲜植物除去杂质，分为青风藤根、藤茎皮、茎、叶，晒干，粉碎、过3号筛制得试验样品，备用。

2 方法与结果

2.1对照品溶液的制备精密称取五氧化二磷干燥至恒重的青藤碱对照品5.4mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.54mg／ml的对照品溶液，置4℃冰箱保存，备用。

2.2供试品溶液制备精密称定青风藤根的粉末0.5g，置100ml具塞锥形瓶中，加入70%乙醇15ml，密塞，称定重量，超声处理（功率200W，频率为30k Hz）30min，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液置蒸发皿中，水浴挥干溶剂，残渣加入水15mL，加稀HCl（1%）调节pH至2，充分搅拌，离心，弃去沉淀，用氨试液调pH至11，加氯仿使氯仿：溶液为1∶2，分别萃取3次，合并氯仿，水浴挥干溶剂，残渣用甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得供试品溶液，置4℃冰箱保存，备用。

2.3色谱条件与系统适用性色谱柱：Diamonsil-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：甲醇-水（50∶50，V／V），加入0.25%的乙二胺作为改性剂调节p H；检测波长：262nm；柱温：室温；流速：1.0ml／min；进样量：10μl。分别取对照品溶液、供试品溶液进样，记录色谱图。青藤碱保留时间约为9.8min，与其他组分达基线分离，分离度不低于2.0，理论塔板数以青藤碱峰面积计算不低于1500。

2.4线性关系考察分别精密吸取上述青藤碱对照品溶液0.5、1、5、10、15、20、25μl进样，测定色谱峰面积积分值，以峰面积积分值Y为纵坐标，青藤碱对照品进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线，计算求得回归方程为：Y= 568.656X-16.257，r=0.9997（n=7）。结果表明，青藤碱在0.27～13.50μg质量范围内呈良好的线性关系。

2.5精密度试验精密吸取青藤碱对照品溶液10μl进样，重复6次，测定青藤碱峰面积积分值，并计算相对标准偏差值（RSD），结果RSD=0.38%，说明仪器精密度良好。

2.6稳定性试验精密吸取同一份供试品溶液各10μl，分别于1、2、4、8、12h进样，测定，青藤碱峰面积积分值RSD为1.12%（n=5），表明供试品溶液12h以内稳定性良好。

2.7重现性试验取同一批青风藤根粉末0.5g，5份，分别按照“2.2”方法制备成供试品溶液，精密吸取10μl，进行测定。结果青藤碱RSD为1.68%（n=5），表明该方法重现性较好。

2.8回收率试验取已知含量的青风藤根粉末样品约0.25g，5份，精密称定，精密加入一定量的青藤碱对照品溶液，挥干，分别按照“2.2”方法制备成供试品溶液，精密吸取10μl，进行测定。根据标准曲线计算青藤碱回收率，结果见表1。结果表明青藤碱平均回收率为99.46%，RSD值为1.66%。本方法准确性好。

表1 加样回收率测定结果（%）

2.9青风藤中根、藤茎皮、茎枝、叶中的青藤碱含量测定分别称取不同部位的药材粉末，各取约0.5g，精密称定，按照“2.2”方法制备供试品溶液，采用HPLC外标一点法，分别精密吸取对照品溶液10μl与各供试品溶液10μl，按上述色谱条件测定，计算各部位中青藤碱的含量。结果见表2。测得青风藤根中青藤碱的平均含量为1.65%，藤茎皮为1.35%，茎枝为0.28%，叶为0.11%。

表2 青风藤不同部位青藤碱含量测定结果（%）

3 讨论

不同地区的气候、土壤，不同采收季节等因素对药材的质量也有很大的影响。大多数文献都是以产自北方的青风藤作为研究对象，本试验则是对华南地区

生长的青风藤来进行研究，对开发华南地区青风藤资源提供了依据。试验结果表明，同株青风藤不同部位中青藤碱的含量不同，根中青藤碱含量最高，藤茎皮次之，茎和叶较低。藤茎皮和茎比较可知青藤碱在茎中主要存在于韧皮部，原因可能是藤茎中间木质化程度比外围要高。

《中国药典》2010年版收载青风藤的入药部位为青风藤植物的干燥藤茎，且临床上大多是以藤茎入药。根据试验结果可知，青风藤植物根中的青藤碱含量最高，叶中最低，可以考虑将青风藤根作为新的药用部位收载。

青藤碱的提取方法有很多，本试验是以70%乙醇作为溶媒，超声提取法提取，能够有效地减少加热提取过程中青藤碱的损失。在青藤碱纯化中，根据文献［10］加稀HCl溶液方法，其目的是将提取的青藤碱转化为青藤碱的盐酸盐，水溶性增加，有利于除去酸不溶性杂质。本试验所选用青藤碱的提取方法虽然步骤多，但所含杂质较少，测定效果较好。

试验的流动相曾选用《中国药典》2010年版收载的甲醇-磷酸盐缓冲液（0.005mol／L磷酸氢二钠溶液，以0.005mol／L的磷酸二氢钠溶液调节p H至8.0，再以1%三乙胺调节pH至9.0）（55∶45），配制过程烦琐，进样后峰形拖尾，影响测定结果的准确性。参考文献方法［11-12］改进流动相，采用甲醇-水（50∶50，V／V），加入0.25%的乙二胺作为改性剂调节p H作为流动相，结果色谱图上峰形较好，不拖尾，保留时间适宜。

［1］药典委员会.中华人民共和国药典［S］.一部.北京：化学工业出版社，2010：182.

［2］王岩，周莉玲，李锐.青风藤的研究进展［J］.中药材，2002，25（3）：209-211.

［3］班小红，黄筑艳，等.青风藤化学成分的研究［J］.时珍国医国药，2008，19（8）：1831-1832.

［4］黄筑艳，张援虎，周岚.青风藤化学成分的研究（II）［J］.中草药，2009，40（2）：193-196.

［5］陈曦.HPLC法青风藤根中青藤碱含量的测定及其提取工艺的优化［J］.安徽农业科学，2010，38（29）：16236-16238.

［6］潘娓婕，李晓宁，张尊听，等.超声法从青风藤根中提取青藤碱［J］.天然产物研究与开发，2003，15（2）：127-129.

［7］王慧，叶卿，赵亮，等.反相离子对色谱法测定青风藤中青藤碱的含量［J］.第二军医大学学报，2010，31（2）：193-195.

［8］严华，马双成.RP-HPLC法测定青风藤中青藤碱的含量［J］.药物分析杂志，2006，26（2）：201-203.

［9］王海龙，赵庆华，王宝全，等.HPLC法测定神痛灵胶囊中青藤碱的含量［J］.齐鲁药事，2012，31（1）：17-18.

［10］方达任，张志.复方祛风缓释片中青风藤的提取纯化工艺研究［J］.湖北中医药大学学报，2012，13（6）：28-30.

［11］张英丰，周莉玲，汪小根，等.青藤碱微透析体外回收率的测定及影响因素的研究［J］.中药材，2005，28（12）：1064-1067

［12］张英丰，王利胜，周莉玲.微透析法进行盐酸青藤碱肌注给药的药代动力学研究［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（8）：109-112.

焦树德经验方——天麻丸

天麻180g，牛膝180g（二药用酒同浸三日，焙干用）、萆薢180g，元参180g，杜仲210g（酒炒去丝）、全当归300g，羌活300g，独活150g，炮附子30g，生地黄500g（有一方无独活）上药研为细末，炼蜜为丸，如梧桐子大，每服50～70丸，病重者可加至100丸，清晨空腹时，温开水送服，每日1次。

本方为养血、祛风、补肾、壮筋骨之剂。可用于治疗肾经虚热生风，筋脉牵掣，遍身疼痛，手足麻木，口眼歪斜，半身不遂等症。

方中虽然重用生地、当归补肾养血为主药，但其妙用全在天麻、牛膝同浸同焙，以使风痰浊湿下降而不上逆作为辅药。又以萆薢、杜仲益肾、祛风湿、壮筋骨，玄参养肾阴壮水以制火，附子补肾阳温经以通络，又可使生地、玄参之“阴得阳助，而源泉不竭”，共为佐药。更以羌独二活祛太阳风、搜少阴伏风以驱除风邪为使药。诸药扶正祛邪，标本合治，具有养血、祛风、壮筋骨、补肾固本之功能。

近些年来，临床上以此方随证加减治疗由肾虚风动而出现头晕目花、头重脚轻、两腿无根、肢体麻木或抽痛的高血压病（血压不高的也可服用）。可再酌加生赭石、生石决明、钩藤、泽泻、桑寄生、菊花之类的药物。

《灵枢·海论》说：“脑为髓之海”，又说：“髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧。”本方中补肾药占了很大比重，所以我在治疗眩晕、耳鸣以及神经衰弱等病出现头晕、耳鸣、视力减退、健忘、腰腿酸软、全身倦怠等症状，经辨证属于肾虚证者，常用此方加生石决明30g（先煎），养肝阴而潜肝阳，兼能明目；加远志10～12g，夜交藤15～20g，交通心肾而安神；灵磁石15～25g（先煎），纳肾气而治耳鸣；菊花10g，钩藤15～20g，祛风明目，配合天麻而除头晕。将原方药物参考其比例约减少20倍，作为汤剂煎服，每收良效。请参考试用。

本方与风引汤（用量加倍）相合，再加生石决明250g，橘红180g，泽泻180g，钩藤180g，作为丸药，对年过45岁以上之人经常出现头晕眼花、头胀头痛、耳鸣健忘、腰酸膝软、两脚无根，或血压时常偏高，或肢体、手指、足趾时有麻木、欲作中风者，经常服用此丸，可有治疗和预防中风的作用（血压不高有上述诸症者，也可以用）。

本方与天麻散（《卫生宝鉴》方：天麻、半夏、茯苓、白术，共为细末，每用3～4g，姜汤水送服）均治中风、半身不遂、口眼歪斜、语言艰涩。但本方主用于肾虚、血虚而虚风内动之证，天麻散则主用于痰浊内盛，风痰上扰之证。中风病名虽同，但二方所主之证却不同，临症者必须加以辨认，以免误治。

附注：古人书中还有一方无独活，而方中之羌活要求用独本者（即独一茎者），谓此“即真独活，不必更加也。”附此供参考。

Determination of Sinomenine in Different Parts of Caulis Sinomenii Medicinal Materials with HPLC

Xie Liming Li Ronggui Ba Wenqiang
（1 Guangdong Province Hospital of Chinese Medicine，Guangzhou 510120，China；2 College of Chinese Traditional Medicine，Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of sinomenine in different parts of caulis sinomenii medicinal materials. Methods Stationary phase was Diamonsil-C18 column（4.6×250mm，5μm）；mobile phase was methanol-water（50∶50）；UV detection wavelength was set at 262nm，and the flow rate was 1.0mL／min.Results Sinomenine showed the good linear relationship in the range of 0.27μg～13.50μg（r=0.9997）.The average recovery rate was 99.46%with RSD1.66%（n=7）.The average content of sinomenine in root of caulis sinomenii was 1.65%，rattan bark was 1.35%，stem was 0.28%and leaf was 0.11%.Conclusions The results showed that there was a significant differentiation in the contents of sinomenine in the above caulis sinomenii medicinal materials samples described in this article and the content is the root was the highest in the samples.

Caulis Sinomenii；Sinomenine；HPLC

10.3969／j.issn.1672-2779.2013.12.105

1672-2779（2013）-12-0161-03

��吴义红

2013-05-19）