高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量

李明松许 青

1.贵州省安顺职业技术学院，贵州 安顺 561000；2.贵州省安顺市人民医院，贵州 安顺 561000

高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量

李明松1许 青2

1.贵州省安顺职业技术学院，贵州 安顺 561000；2.贵州省安顺市人民医院，贵州 安顺 561000

目的：探讨苦参中苦参碱的测定方法。方法：采用高效液相色谱法（HPLC法），用Zorbax NH3（4.6mm×1.5mm）色谱柱，以乙腈－无水乙醇－水（80∶10∶10）为流动相，磷酸调PH＝2，流速为1.0ml/min，柱温为50℃，检测波长为210nm。结果：苦参碱在0.0141～0.0865 mg/ml之间与峰面积积分值呈良好的线性关系（r＝0.9962），平均加样回收率98.15%，RSD＝1.42%。结论：HPLC法操作简便，结果准确，可用于苦参中苦参碱的含量测定。

高效液相色谱法；苦参碱；含量测定

苦参［1］为豆科槐属（Leguminosae）植物Sophora flavescens Ait的干燥根，性寒，味苦。具有清热燥湿，杀虫，利尿等功效，主要作用有以下几点：①用于湿热泻痢，便血，黄疸；②用于湿热带下，阴肿阴痒，疥癣；③用于湿热小便不利。本品含20多种生物碱，主要为苦参碱、氧化苦参碱，由于苦参药材中主要含有生物碱和黄酮两大类化学成分，其中生物碱中又以苦参碱和氧化苦参碱的含量较高，多作为控制质量的有效成分［2］。本文采用高效液相色谱法对苦参中苦参碱的含量进行测定，来检测该法对苦参药材的质量控制是否可行。

1 实验仪器、药品

苦参碱对照品（批号：110805－200306）供含量测定用，中国药品生物制品检定所；苦参药材购于贵阳市花果园药材批发市场，经中药鉴定教研室刘芃教授鉴定为豆科槐属（Leguminosae）植物苦参Sophora flavescens Ait的干燥根；高效液相色谱仪（LC5A），日本岛津；所用试剂均为分析纯。

2 溶液、试液配制

2.1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的苦参碱对照品，精密称定，置10m l量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得到浓度为0.4024mg·ml－1的苦参碱对照品溶液，然后精密吸取1ml对照品溶液至100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，最终得到浓度为4.024μg·ml－1的苦参碱对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备 称取苦参块约50g，精密称定，加入8倍量PH＝4.5的酸水，置于50℃的恒温水浴内浸泡15 min，电炉加热至沸，微沸30min，取出滤液；药渣再分别煎煮两次，每次加入8倍量的酸水，煎煮30min，合并三次滤液，浓缩至250ml左右，3000r/min离心10min，转移到250ml容量瓶中，加水稀释到刻度，摇匀，用10m l移液管精密吸取10m l水提液倒入分液漏斗中，加入氨水用酸度计调PH＝10左右，用60ml氯仿分三次萃取，合并氯仿层，挥干，加入甲醇溶解，定容到10m l容量瓶中，即得。

3 含量测定方法［3－4］

采用高效液相色谱法测定苦参中苦参碱的含量。

3.1 色谱条件 色谱柱：Zorbax NH3（4.6mm×1.5mm）；柱温：50℃；流动相：乙腈－无水乙醇－水（80∶10∶10），磷酸调PH＝2；流速：1.0ml/min；检测波长210nm。

3.2 线性范围考察 精密吸取浓度为4.024μg·ml－1的苦参碱对照品溶液0.5μl、3.5μl、6.5μl、9.5μl、12.5μl、15.5μl、18.5μl、21.5μl，按色谱条件进样，测定峰面积。以苦参碱对照品（x，mg·m l－1）为横座标，峰面积积分值（y）为纵座标进行线性回归，得回归方程为Y苦＝1.2829· 10－4X-2.1811·10－4，r＝0.9962，苦参碱在0.0141～0.0865 mg·ml－1范围内呈良好线性关系。

3.3 稳定性试验 按2.2供试品溶液制备方法，制备供试品溶液，再按3.1色谱条件操作，每隔2小时进样一次，每次进样20μl，测定苦参碱峰面积，结果表明，供试品中苦参碱面积在8小时内基本不变，计算结果如表1，苦参碱RSD＝1.5601%。

表1 苦参碱稳定性试验

3.4 重复性试验 取同一批苦参样品按供试品溶液的制备方法制备6份供试液，按3.1色谱条件下进样，测定苦参碱峰面积，计算结果列入表2，苦参碱含量RSD%＝2.6566。3.5 加样回收试验 取已知浓度的苦参样品水提液，从中分别精密吸取出9份样品溶液，每份样品10ml，分为三组（即A、B、C，每一组的三个样为同一水平），在这三组中分别加入7、8、9ml浓度为0.0176 mg.ml－1的苦参碱对照品，照上述色谱条件，进样、测定，记录色谱图，计算含量，求相对标准偏差，RSD＝1.4239%，结果表明，此方法具有较好的加样回收率，结果见表3。

表2 重复性实验

表3 苦参碱加样回收实验

4 讨论

4.1 利用高效液相色谱法对苦参药材中的主要成分苦参碱进行含量测定，该法操作简便、快速准确，分离效果好，稳定性和重复性好，可作质量控制方法。适用于对苦参药材的质量控制。

4.2 曾采用乙腈－无水乙醇－水（90∶5∶5）作为流动相，结果峰形不太稳定，改为乙腈－无水乙醇－水（80∶10∶10）后，苦参碱得到良好的分离。

［1］李家实.中药鉴定学［M］.上海科学技术出版社，2001年第1版，2001：108.

［2］李家实.苦参生物碱测定［J］.北京中医学院学报，1984，（2）：25.［3］金莉霞，崔燕岩.苦参生物碱的高效液相色谱法测定［J］.药学学报，1993，28（2）：136.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典（第1版）［M］.化学工业出版社，2005：161.

表3 不同产地穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

3 讨论

3.1 检测波长的确定 分别比较了225nm、254nm及 225nm（0～15min）和254nm（15～25min）条件下穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的峰面积，结果发现分段检测其值最大，故选择检测波长为225nm（0～15min），用于检测穿心莲内酯，254nm（15～25min）用于检测脱水穿心莲内酯，所确定的检测波长与国家药典［4］收载的数据一致。

3.2 流动相的选择 曾采用乙腈－水（65：35）、甲醇－水（60：40）等多种溶剂体系作为流动相，色谱分离效果和峰形均不理想。综合考虑峰形、分离度、出峰时间等因素，经反复摸索，发现甲醇－水（65：35）作为流动相最为理想。

3.3 通过我们的研究证明，产自GAP规范化种植基地的穿心莲药材有效成分普遍高于普通产地，且相对较稳定，该法是提高药材质量的有效途径，值得推广。

参考文献

［1］江苏新医学院.中药大辞典（下册）.［M］.上海：上海科学技术出版社，1986.

［2］王国才，胡永美，张晓琪，等.穿心莲的化学成分［J］.中国药科大学学报，2005，36（5）：405～407.

［3］谢青，陈珠灵，洪培山，等.反相高效液相色谱法同时测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量［J］.时珍国医国药，2009，20（5）：1194～1195.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典（2010版一部）.［S］.北京：中国医药科技出版社，2010.

（收稿日期：2013.02.02）

Determ ining M atrine Content in Sophora Flavescens by HPLC

LiMing－song1，Xu Qin2
（1.Anshun Vocational and Technical College，Guizhou，561000，China；2.The people＇s Hospital of Anshun City，Guizhou，561000，China）

Objective：In order to investigate the determination ofmatrine in the sophora flavescens.Methods：By adopting the method of high－performance liquid chromatography（HPLC），using Zorbax NH3（4.6mmx1.5mm）chromatographic column，taking acetonitrile－ethanol－water（80∶10∶10）asmobile phase，modulating orthophosphoric acid as pH＝2，with the flow being 1.0ml/min，the column temperature being 50℃，and the wavelength of detection being 210nm.Results：The matrine showed a good linear relationship（r＝0.9962），with the integral value of peak－area being from 0.0141 mg/m l to 0.0865 mg/ml.The average rate of recovery was98.15%with relative standard deviation（RSD）of1.42%.Conclusion：The HPLCmethod is operated easily，and the result of detection is accurate，which can be used for the content determination ofmatrine in sophora flavescens.

high performance liquid chromatography（HPLC）；matrine；content determination

R284.1

A

1007－8517（2013）05－0019－02

2013.01.21）