HBsAg检测阴性而HBV-DNA检测阳性标本乙肝两对半结果模式分析

熊丽红，钱榕，李国良

(江西省血液中心，江西南昌330047)

HBsAg检测阴性而HBV-DNA检测阳性标本乙肝两对半结果模式分析

熊丽红，钱榕，李国良

(江西省血液中心，江西南昌330047)

目的对ELISA检测HBsAg结果阴性而HBV-DNA检测阳性标本乙肝两对半结果进行比较分析。方法采用2种不同厂家ELISA试剂对52224例无偿献血者血液标本进行HBsAg检测，核酸检测方法对51797例HBsAg检测阴性标本进行HBV-DNA定性检测，83例HBV-DNA定性检测阳性标本进行HBV-DNA定量检测和乙肝两对半检测。结果52224例献血者HBsAg检测阴性为51797例；51797例检测HBsAg阴性标本而HBV-DNA定性检测阳性共83例；83例HBVDNA定性检测阳性标本经定量检测53例为阳性；83例HBV-DNA定性检测阳性标本乙肝两对半检测有10种模式，HBcAb阳性占87.95%；HBcAb和HBeAb同时阳性占56.63%；HBsAg阳性占22.89%。结论由于经济原因核酸检测暂不适宜全面推广情况下，为减少经输血传播乙肝，选择灵敏度和特异性好的ELISA试剂检测HBsAg；体检征询发现献血者HBcAb、HBeAb同时阳性时暂缓献血。

HBsAg；HBV-DNA；两对半

目前我国血站系统广泛采用ELISA技术检测HBsAg，其能淘汰部分乙肝阳性血液输入患者体内，不过该方法存在窗口期、免疫静默期、钩状效应等漏检现象。近年来，欧美、日本以及亚太地区一些国家地区陆续将NAT技术应用于献血者血液检测，以提高血液安全[1-3]。2010年卫生部在全国14家血液中心或大型中心血站试点核酸检测HBV、HCV、HIV，并将各单位核酸检测阳性标本进行定量检测和乙肝两对半的检测，现将本中心ELISA检测HBsAg阴性而核酸检HBV-DNA阳性标本其乙肝两对半结果分析如下。

1 材料与方法

1.1 样本来源本中心2010年8月9日至2011年4月30日无偿献血者血液标本52224例。

1.2 试剂和仪器

1.2.1 HBsAg ELISA试剂盒为试剂A(北京金豪生物制品有限公司)和试剂B(厦门新创生物制品有限公司，HBV-XC)。仪器采用HIMILTON STAR加样仪(瑞士哈美顿公司)；FAME全自动酶免分析仪(瑞士哈美顿公司)。

1.2.2 NAT检测试剂为Cobas TaqScreen MPX HBV/HCV/HIV联合检测试剂(美国罗氏诊断公司定性检测试剂)。核酸检测平台(美国罗氏诊断公司)：HIMILTON STAR IVD标本混样仪(瑞士哈美顿公司)，Cobas AmpliPrep核酸提取仪与cobas TaqMan分析仪通过混样和数据管理服务器(PDM)连接组成平台(简称CAP/CTM)。

1.2.3 乙肝两对半罗氏公司所提供的乙肝两对半相配套试剂，采用电化学发光法。卫生部临床检验中心工作人员负责检测并将结果反馈至本中心。

1.2.4 核酸定量检测HBV-DNA定量试剂为罗氏公司提供，实时荧光定量PCR系统，检测平台亦采用CAP/CTM平台。由卫生部临床检验中心工作人员负责检测并将结果反馈至本中心。

1.3 方法

1.3.1 ELISA方法将抗凝血液标本室温离心后,用HIMILTON STAR加样仪自动加样,FAME全自动酶免分析仪检测,过程严格按照试剂盒说明书操作,结果以吸光度值大于80%CUT-OFF值判定为阳性。

1.3.2 NAT方法ELISA试剂检测HBsAg阳性不做核酸检测。核酸定性检测采用Cobas TaqScreen MPX方法，按试剂说明书HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA-1最低检测限95%可信度分别是3.7IU/ m l，10.7IU/m l，49IU/m l。

1.4 统计学处理所有资料均以例或百分率表示。

2 结果

2.1 52224例无偿献血者标本ELISA方法检测HBsAg结果52224例献血者HBsAg检测阴性为51797例。阳性共427例，总阳性率为0.82%；两种试剂均阳性为332例，阳性率为0.64%；单试剂阳性为95例，阳性率为0.18%。51797例检测HBsAg阴性标本而HBV-DNA定性检测阳性共83例，阳性率为0.16%。83例HBV-DNA定性检测阳性标本经定量检测57例阳性，26例定量检测阴性。

2.2 83例HBV-DNA定性检测阳性经卫生部乙肝两对半检测结果乙肝两对半检测结果共有10种模式，分别以A～J表示，结果见表1。HBcAb阳性73例，占87.95%；HBcAb和HBeAb同时阳性47例，占56.63%；HBsAg阳性19例，占22.89%。

表1 HBsAg阴性而HBV-DNA定性检测阳性乙肝两对半检测结果

3 讨论

乙型肝炎及乙肝病毒携带者在我国广泛流行,人群感染率高,是当前危害人民健康最严重的传染病之一,从而影响人们的生活质量。乙肝病毒主要通过血液和其他体液排出体外,并通过注射或非注射途径进入易感者体内。注射途径包括输血及血制品、集体预防接种、药物注射和针刺、吸毒人员互相混合使用注射器等方式。为减少经输血传播乙型肝炎《献血者健康检查要求》明确要求血液必需由不同工作人员使用不同厂家的试剂检测HBsAg，随着社会的发展，核酸检测慢慢向输血行业推广，由于经济原因目前尚未向全国推广。

应用ELISA方法检测HBsAg阴性而HBVDNA定性检测阳性的标本再次用电化学发光法检测发现有22.89%HBsAg阳性，表明ELISA试剂检测灵敏度有待进一步提高。在核酸检测不能大规模推广时，为减少经输血传播乙肝，选择特异性好，灵敏度高的试剂和方法不失为过渡之选，有研究报道使用酶联免疫吸附法与定量聚合酶链反应检测乙肝两对半结果均未见明显差异[4]。

应用ELISA方法检测HBsAg阴性而HBVDNA定性检测阳性的标本乙肝两对半检测结果显示其中HBcAb阳性占87.95%，HBcAb和HBeAb同时阳性占56.63%。此现象的发生有可能为HB-sAg浓度过低，ELISA方法检测不出；亦可能为HBsAg浓度过高，ELISA检测中出现钩状效应检测为阴性；也可能为基因突变形成新的变异株；亦可能为既往感染。

83例HBV-DNA定性检测阳性中有26例定量检测阴性，主要原因可能是与试剂灵敏度有关，罗氏公司定性检测试剂灵敏度为3.8 IU/mL，而定量检测试剂灵敏度为12 IU/mL；亦不排除定性检测过程中经污染造成假阳性结果。

总之，为减少经输血传播乙型肝炎，首先应加强HBsAg的检测，选择灵敏度和特异性好的试剂，其次为保证受血者的安全，即使两对半未纳入无偿献血的常规检测，但应增强对献血者征询，在知道其HBcAb、HBeAb同时阳性时应暂缓献血，与相关报道相符[5]。

[1]Kleinman SH，KuhnsMC，Todd DS，etal．Frequency of HBV DNA detection in US blood donors testing positive for the presence of anti-HBc:implications for transfusion transmission and donor screening[J]．Transfusion,2003,43(6):696-704．

[2]Jarvis L，Becker J，Tender A，et al．Evaluation of the Roche cobas s201 system and cobas TaqScreen multiplex test for blood screening:a Europeanmulticenter study[J]．Transfusion，2008,48(9):1853-1861．

[3]Mine H，Emura H，Miyamoto M，et al．High throughput screening of 16 million serologically negative bloods donors for hepatitis B virus，and human immunodeficiency virus type-1 by nucleic acid amp lification testing with specific and sensitive multiplex reagent in Japan[J]．JVirolMethods,2003,112(1-2):145-151．

[4]岳化葵.酶联免疫吸附法与定量聚合酶链反应对乙肝两对半测定的比较分析[J],临床和实验医学杂志,2008,7(11):73.

[5]王良华,叶贤林,尚桂芳,等.免疫筛查阴性献血者血样病毒核酸检测的研究[J].中国输血杂志,2005,18(4):286-289.

R446.62,R512.6+2

A

1674-1129(2013)05-0496-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.038