抗gp210及sp100抗体在原发性胆汁性肝硬化患者中的临床研究

詹克勤，彭卫华，陈建华，李俊明，鞠北华，胡意，罗忠勤

(1、婺源县人民医院检验科，江西婺源333200；2、南昌大学第一附属医院,江西南昌330006)

抗gp210及sp100抗体在原发性胆汁性肝硬化患者中的临床研究

詹克勤1，彭卫华2，陈建华2，李俊明2，鞠北华2，胡意2，罗忠勤2

(1、婺源县人民医院检验科，江西婺源333200；2、南昌大学第一附属医院,江西南昌330006)

目的探讨抗gp210、sp100抗体检测在原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者的相关性及临床意义。方法53例原发性胆汁性肝硬化及168例非原发性胆汁性肝硬化(非PBC)患者及50例健康对照采用免疫印迹法检测抗gp210和sp100自身抗体并观察其临床评价指标，对其结果进行回顾性分析。结果(1)53例PBC患者采用免疫印迹法检测gp210和sp100等自身抗体结果显示其阳性率分别为41.5%和17.0%；与非PBC和对照组比较，P＜0.01有非常显著性意义。(2)53例PBC患者检测gp210和sp100等自身抗体与非PBC及对照组比较，其临床评价指标结果显示敏感性为41.5%和17.0%，特异性为97.2%和99.5%。结论PBC患者检测抗gp210和抗sp100抗体,对PBC的诊断及治疗具有重要的作用，有助于提高PBC诊疗水平。

原发性胆汁性肝硬化；抗gp210抗体；抗sp100抗体

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)是一种与自身免疫相关的病因不明的慢性疾病,表现为肝内小胆管进行性破坏伴门静脉炎症性改变,最终导致肝纤维化及肝硬化。临床上以黄疸、皮肤瘙痒、脾肿大为特点,近年来对自身抗体的检测如抗核包膜蛋白抗体(gp210)和抗核多点抗体(sp100)等对该病的诊断具有重要意义。本研究对PBC患者及非PBC患者进行了检测，并探讨了其对PBC诊断的价值，现将结果分析报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源53例PBC、168例非PBC患者及50例健康体检者均为江西省婺源县人民医院、南昌大学第一附属医院自2008年1月至2012年12月门诊、住院确诊病例，诊断标准参照2009年美国肝病学会(AASLD)关于PBC诊断建议[1]。53例PBC患者，其中男7例，女46例，男女比例为1:7；确诊时年龄22～71岁，平均48.6岁。患者均无特殊临床表现。因肝功能异常就诊，确诊时间为0.5～22个月，平均8.0个月；其中168例非PBC分别为31例自身免疫性肝炎(AIH)和15例原发性硬化性胆管炎(PSC)患者其中男6例，女40例，男女比例为1:7，确诊时年龄为4～67岁，平均年龄为45岁；病毒性肝炎患者组63例,其中乙型肝炎41例，丙型肝炎22例，男28例，女35例，男女比例为1:1.3，确诊时年龄为15～57岁，平均年龄为37岁；结缔组织病患者组59例,其中系统性红斑狼疮35例,类风湿关节炎24例，男6例，女53例，男女比例为1:8.8，确诊时年龄为10～64岁，平均年龄为41岁；50例对照组均为江西省婺源县人民医院体检中心健康体检者，其中男性20例，女性30例，年龄为23～47岁，平均年龄为33岁。

1.2 试剂与方法

1.2.1 标本的采集采集被检患者的血标本均为空腹不抗凝血2.0m l～3.0m l，以1000×g离心15min分离血清，取上清检测，并将标本放于-20℃保存待检，避免反复冻融。

1.2.2 试剂抗gp210和抗sp100抗体采用德国欧蒙医学实验诊断有限公司产生的免疫印迹试剂。严格按操作说明书及我室的SOP标准文件进行操作。对所检测结果进行回顾性分析，观察临床评价指标。

1.3 统计分析数据分析均采用SPSS 17.0统计软件包进行统计学分析，计数资料以例数(百分比)描述，组间单因素分析采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PBC患者等采用免疫印迹法检测自身抗体结果53例PBC、168例非PBC及50例健康体检者采用免疫荧光法检测gp210和是sp100抗体自身抗体检出率结果详见表1。

表1 PBC、非PBC及健康体检者检测各种自身抗体结果

2.2 各种疾病免疫印迹法检测结果采用免疫印迹法检测gp210和sp100抗体结果见表2。

2.3 临床评价指标结果53例PBC患者检测gp210和sp100自身抗体与非PBC及对照组比较，其各项临床评价指标结果，详见表3。

3 讨论

PBC患者随病情进展,出现腹水、黄疸、自发性腹膜炎及肝性脑病等严重并发症。对PBC患者早诊断、早治疗可延缓病程进展,改善预后。但其症状不典型极易造成误诊。目前，我国尚无PBC完整的流行病学资料，随着对疾病认识和检验水平的不断提高，其PBC发病率也逐年升高。PBC一般在50岁左右发病，多见于中年女性，男女之比约为1∶8[2-4]。本研究病例数男女之比为1:7，平均年龄48.6岁。PBC的确切病因和发病机制尚不清楚，目前研究发现，PBC发病与自身免疫、接触化学物品、病原微生物感染、遗传和环境因素等有关[4]，这与自身免疫病的发病机制极为相近。PBC是一种可能与自身抗体产生有关的慢性进行性胆汁淤积性肝脏疾病，主要病理学表现为非脓性肝内胆管慢性炎症阻塞和汇管区淋巴细胞浸润，从而导致胆汁淤积，发生肝纤维化及肝硬化。本研究在前期工作基础上，进一步多点合作、扩大标本量对PBC患者gp210和sp100两种自身抗体进行检测，结果显示患者体内存在gp210和sp100两种与自身免疫病相关的自身抗体，表明免疫机制参与了PBC的发病过程，同时为PBC诊断提供了有力的自身抗体检测依据。PBC起病缓慢而隐匿，早期症状多不明显，由于缺乏对其的认识和存在诊断水平差异等原因，容易造成临床误诊，尤其是单纯仅靠生化指标ALP、GGT等升高更易产生漏诊，因此，对PBC患者检测其自身抗体更有诊断价值。

表2 免疫印迹法检测gp210和sp100抗体结果

表3 PBC等患者抗体检测的各项实验评价指标结果

抗gp210抗体靶抗原是位于核孔复合物上的210kD跨膜糖蛋白,所识别的表位是gp210羧基末端上的15个氨基酸残基[5],故名为gp210。其抗原决定簇为氨基末端的15个线样氨基酸片段和羧基末端的氨基酸片段[6]。抗gp210抗体对PBC患者诊断虽然其敏感性不高，只有41.5%，但特异性则高达97.2%，尤其是抗线粒体抗体阴性的PBC患者中有非常强的诊断价值，这与文献报道[5]的结果基本一致。本研究在53例PBC患者中检测到21例gp210阳性,疾病对照组168例非PBC患者中6例gp210阳性,对这6例患者的临床资料重新评价后发现其中3例为PBC/AIH重叠综合征,1例是PSC患者，2例是SLE患者可能与临床诊断有误相关；而HBV、HCV、RA组gp210均阴性,因此可以推断抗gp210抗体是PBC特异性自身抗体,研究结果与Nakamura等[5]的基本一致。

sp100蛋白是1个磷酸化的细胞核蛋白,电泳时sp100分子量为100KD左右。点状分布于细胞核内，sp100是一转录活化因子，用SV40和JC病毒转化细胞，或者用有丝分裂原刺激淋巴细胞，以及用干扰素处理细胞都可观察到sp100蛋白水平和mRNA水平的升高[4，7]。sp100为核多点型靶抗原之一。sp100是通过负向调节内皮素1的作用来实现其生物学作用的。本研究对53例PBC患者检测抗sp100抗体阳性为9例，阳性率为17.0%，其AIH、PSC、HBV、HCV和SLE等及对照组均阴性。

总之，应用免疫印迹法对PBC患者检测抗gp210和sp100自身抗体[8，9],在临床上对PBC的诊断具有广阔应用前景,将会对PBC患者的诊断和治疗具有重要的作用，可有助于提高PBC诊疗水平。

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Clinical research of anti-gp210 and anti-sp100 antibody in primary biliary cirrhosis patients

ZHAN Keqin,PENGWei-hua,CHEN Janhua,et al.Department of Clinical Laboratory ofWuyuan County People's Hospital，JiangxiWuyuan 333200,China

Primary biliary cirrhosis;Anti-gp210 antibody;Anti-sp100 antibody

R657.3+1，R446.62

A

1674-1129(2013)05-0416-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.05.004

江西省科技厅支撑计划资助项目(编号：2007BS23008)

詹克勤、女，1965年5月生，南昌大学医学院、学士，副主任技师、长期从事临床免疫学相关研究。

彭卫华,女，副主任技师，主要从事微生物及免疫学相关研究。

Absract:ObjectiveTo explore the relativity and the clinical significance of testing anti-gp210 and anti-sp100 antibody in patientswith primary biliary cirrhosis(PBC).M ethodsSamp les from 53 cases of PBC patients,168 cases of non-PBC patients and 50 cases of healthy people were collected and autoimmune antibodies including anti-gp210 and sp100 antibodieswere tested with Western blotting.Then,the clinical evaluation indexes were observed and the results were analyzed retrospectively.ResultsThe positive rates of anti-gp210 and sp100 were 41.5%and 17.0%,respectively,in 53 cases of PBC patients tested withWestern blotting.Compared with non-PBC cases and control cases,there were significant difference between these groups.The sensitivity of anti-gp210 and sp100 were 41.5%and 17.0%,respectively,and the specificity of anti-gp210 and sp100 were 97.2%and 99.5%, respectively.ConclusionDetection of anti-gp210 and sp100 has great significance in the diagnosis and treatment of PBC.