昆明地区儿童下呼吸道感染流感嗜血杆菌分离株的耐药性和血清分型研究

胡莹，夏晓玲，黄海林，单斌，李丰良，黄云昆，刘晓莉

(1、昆明医科大学第二附属医院检验科，云南昆明650101;2、昆明市儿童医院检验科3、昆明医科大学第一附属医院检验科；4、云南省第一人民医院检验科；5、昆明市延安医院检验科)

昆明地区儿童下呼吸道感染流感嗜血杆菌分离株的耐药性和血清分型研究

胡莹1，夏晓玲1，黄海林2，单斌3，李丰良4，黄云昆5，刘晓莉1

(1、昆明医科大学第二附属医院检验科，云南昆明650101;2、昆明市儿童医院检验科3、昆明医科大学第一附属医院检验科；4、云南省第一人民医院检验科；5、昆明市延安医院检验科)

目的了解昆明地区急性下呼吸道感染患儿中分离的流感嗜血杆菌体外耐药模式和血清分型情况。方法收集2009年1月1日至2010年1月1日4家三甲医院的儿科和儿童医院急性呼吸道感染患儿鼻咽分泌物或深部吸痰标本分离的流感嗜血杆菌，用头孢硝噻酚法检测β-内酰胺酶，纸片扩散法检测其对抗菌药物的敏感性，并用玻片凝集法对流感嗜血杆菌进行血清分型。结果流感嗜血杆菌对氨苄西林的敏感率为52%，耐药率为42.7%；32株β-内酰胺酶阳性，产酶率为17.6%；菌株对头孢哌酮-舒巴坦、亚胺培南、阿莫西林-克拉维酸、头孢噻肟、头孢曲松和头孢呋辛、阿奇霉素的敏感率为93.4%～100.0%，对复方磺胺磺胺甲噁唑的耐药率最高，达78%；产β-内酰胺酶流感嗜血杆菌多重耐药率达65.6%；血清分型以不定型株为主，Hib仅占1.57%。结论昆明地区急性呼吸道感染儿童流感嗜血杆菌的耐药性和产酶率呈上升趋势，临床应根据药敏结果合理使用抗菌药物。血清分型以不定型株为主，流感嗜血杆菌b分离率不高。

流感嗜血杆菌；耐药性；β-内酰胺酶；血清型；儿童

流感嗜血杆菌是社区获得性肺炎的常见致病菌之一。近年来，产β-内酰胺酶的流感嗜血杆菌不断上升，抗生素耐药性问题越来越受到世界各地的关注[1]。为了解昆明地区儿童呼吸道感染流感嗜血杆菌的耐药模式，并为临床经验治疗提供科学的参考依据，本文对2009年1月至2010年1月的昆明市4家三甲医院的儿科和儿童医院门诊及住院急性呼吸道感染患儿呼吸道分离到的流感嗜血杆菌进行了β-内酰胺酶测定、血清分型和耐药性分析。现将其分析结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料2009年1月至2010年1月门诊及住院符合诊断标准[2]的急性呼吸道感染患儿共2948例，取鼻咽分泌物及痰标本标本，分离出182株流感嗜血杆菌。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养及鉴定患儿于入院当天或次日取其鼻咽深部分泌物或用吸痰器吸取深部痰标本

送检。进行HE染色细胞镜检筛选合格标本(鳞状上皮细胞≤10个/低倍视野、中性白细胞≥25个/低倍视野。对合格标本分别接种于血琼脂平板、巧克力色琼脂平板、麦康凯琼脂平板，置5%CO2培养箱中35℃培养18～24 h，然后进行菌落观察、涂片镜检，用细菌鉴定仪(法国梅里埃制造VITEK32)行细菌鉴定。

1.2.2 药敏试验用纸片扩散法行药敏试验,纸片由英国OXOID公司提供,包括氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、头孢哌酮/舒巴坦、头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢吡肟、亚胺培南、阿奇霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、复方磺胺磺胺甲噁唑。判断标准按照CLSI 2009年版规定，以敏感(S)、中敏(I)、耐药(R)报告结果。质控菌株为流感嗜血杆菌标准菌株ATCC49247和ATCC49766。

1.2.3 β-内酰胺酶测定头孢硝基噻酚显色反应方法，试剂采用OXOID公司产品。

1.2.4 血清分型采用玻片凝集法分离到流感嗜血杆菌进行血清分型，流感嗜血杆菌分型血清采用日本DENKA SEIKEN株式会社产品。

1.2.5 统计学方法用Whonet5.3软件进行分析。

2 结果

2.1 流感嗜血杆菌耐药情况流感嗜血杆菌对12种抗生素耐药性监测结果显示，流感嗜血杆菌对氨苄西林的耐药率已达到42.7%，各种抗菌药物耐药率与以往相比呈上升趋势[3]，耐药情况见表1。

表1 182株流感嗜血杆菌对12种抗菌药物的药敏结果(%)

2.2 流感嗜血杆菌产酶情况182株流感嗜血杆菌中32株产生β内酰胺酶，总产酶率17.6%。有2株氨苄西林耐药的流感嗜血杆菌为β内酰胺酶酶阴性。β内酰胺酶阳性菌株中多重耐药株共21株，其耐药情况情况见表2。

表2 32株β内酰胺酶阳性菌株流感嗜血杆菌对12种抗生素耐药情况(%)

2.3 血清分型情况分离的182株流感嗜血杆菌中，Hib为2株，占1.09%(2/182)，Hic为2株，Hie为3株，Hif为3株，其余为不定型株(NTHi)，占94.51%(172/182)。

3 讨论

流感嗜血杆菌是本地区儿科常见呼吸道病原体之一，且耐药特点具有较强的地区特色，耐药性问题随着临床用药习惯的改变以及病原菌本身的变异和相互影响，因此对于流感嗜血杆菌的耐药性研究，有利于临床抗生素的合理选择；良好的分型为本地区制定预防儿童呼吸道疾患的针对性措施提供参考。

本次检测显示，昆明地区流感嗜血杆菌对头孢哌酮-舒巴坦、亚胺培南、阿莫西林-克拉维酸、头孢噻肟、头孢曲松和头孢呋辛、阿奇霉素具有高度的活性，敏感率为93.4%～100.0%。对复方磺胺磺胺甲噁唑的耐药率最高,达78%，提示临床经验用药时应避免选择复方磺胺磺胺甲噁唑。氨苄西林耐药率已达42.7%，低于南京地区报道的49.7%[4]，高于广州地区性报道的30.0%[5]和本地区2001年间的34.5%[3]，明显高于杭州地区[6]报道的22.4%。氨苄西林因价格低，不良反应小，常作为治疗流感嗜血杆菌感染的首选药物应用于临床，用量大，应用时间长。因此，对该药的耐药率增长较快。应引起临床医生的重视。

流感嗜血杆菌对氨苄西林的主要耐药机制是β内酰胺酶的产生。本研究中，流感嗜血杆菌总产酶率17.6%，与近几年亚洲地区如新加坡(51%)[7]相

比较低，也低于汪复报道全国9家医院产酶率儿童33%，成人25%及华中科技大学同济医学院附属同济医院孙自镛报道的42.4%[8]。β内酰胺酶阳性菌多重耐药的情况较严重，多重耐药株约65.6%，提示对于本地区在常规药物治疗失败后的流感嗜血杆菌呼吸道感染病例，β-内酰胺酶稳定剂值得优先采用。值得一提的是发现2株流感嗜血杆菌固有耐药菌株，即β-内酰胺酶阴性而对氨苄青霉素耐药株(BLNAR株)，因为它对常用的β-内酰胺药物可以产生联合耐药[9]，具有重要的临床意义，其耐药机制是结合蛋白改变还是外膜蛋白通透性下降需要进一步研究。

流感嗜血杆菌可分为有荚膜型和无荚膜型两大类。根据荚膜多糖抗原可将有荚膜型分成a、b、c、d、e、f 6个血清型和无荚膜不定型(NTHi)，有荚膜型的b型毒力强、侵袭力也强，常引起肺炎、菌血症和脑膜炎等严重感染，且主要侵犯学龄前儿童。了解流感嗜血杆菌型别的地区特点对于疾病防治至关重要，良好的分型是进行流感嗜血杆菌致病性和流行病学研究的基础，本文分离到的182株流感嗜血杆菌以不定型株为主，可分型菌株数量稀少，没有优势型。Hib是小儿肺炎的重要病原菌，但本次只检测到2株，可能与标本来源单一，没有来自脑脊液和血液的标本或取标本前已使用抗生素有关。

[1]Volturo GA,Low D E,Aqhababian R.Managing acute lower respiratory tract infections in an era of antibacterial resistance[J].Am J Emerg Med,2006,24(3):329-342.

[2]胡亚美,江载芳,诸福棠.实用儿科学[M].第7版.北京:人民卫生出版社,2002:1167-1175.

[3]赵云,夏星,高辉.马血巧克力平板分离流感嗜血杆菌及其耐药性分析[J].上海检验医学,2003,18(1):55-56.

[4]徐飞,王惠云,钟天鹰,等.2005年至2006年南京地区儿童流感嗜血杆菌耐药性分析[J].实用医技杂志,2007,14(10):1234－1236.

[5]邓秋连,邓力,谢永强,等.广州地区儿童急性呼吸道感染流感嗜血杆菌耐药性和血清分型研究[J].中国实用儿科杂志,2009,24(5): 362-365．

[6]裘益辉,张艳,华春珍,等.杭州市上呼吸道感染患儿分离的流感嗜血杆菌分离株的血清分型及其对氨苄西林的耐药性分析[J].中国当代儿科杂志,2009,11(3):217-220.

[7]Fernaays MM,Lesse AJ,Cai X,et al.Characterization of iga B,a secondimmunoglobulinA1proteasegeneinnontypeable Haemophilus influenzae[J].Infect Immun,2006,74(10):5860-5870.

[8]朱旭慧,孙自镛,李丽,等.流感嗜血杆菌的分布及耐药性分析[J].实验与检验医学,2010,28(2):114-116.

[9]Krasan GP,Sauer FG,Cutter D,et al.Evidence for donor strand complementioninthebiogenesisofHaemophilusinfluenzae haemagglutinating pili[J].Mol Microbiol,2000,35(6):1335-1347.

Study on serotype and drug resistance of haemophilus influenzae isolates from children with respiratory tract infection in Kunming

HU Ying,XIA Xiaoling,HUANG Hailin，et al.Department of Clinical Laboratory，Second Affiliated Hospital of Kunming Medical University,Kunming 650101,China

ObjectiveTo investigate serotype and antibiotics resistance patterns of Haemophilus influenzae(Hi)isolated from children with respiratory tract infection in Kunming.Methods 182 isolates from sputum and throat swabs of children with acute respiratory tract infection were collected.Nitrocefin test was used to detect β-lactamase.The sensitivities of antibiotics against 182 strains were determined in vitro by Kirby-Bauer diffusion method,and serotypes were measured by Haemophilus Influenzae Antiserum.Results The susceptibility to AMP was 52%while the resistance rate was 42.7%.The prevalence of β-lactamase was 17.6%in all Hi isolates.The sensitive rates to CFS,IMP,AMC,CXT,and CRO were from 93.4%to 100.0%.The resistance rate of SXT was 78%which was the highest one.Hib accounted only 1.57%among all Hi strains.ConclusionsThe resistance rate of Hi isolated from children in Kunming is in an upward trend,so antibiotics should be used rationally and be based on the drug sensitivity results in clinical therapy.NTHi is the major serotype of Hi in children with acute respiratory tract infection.The prevalence of Hib is low.

Haemophilus influenzae;Drug resistance;β-lactamase；Serotype；Children

R446.5,Q939.92,R378.4+1

A

1674-1129(2013)02-0118-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2013.02.005

胡莹,女,1977年生,主治医师,硕士学位,毕业于昆明医学院临床微生物与分子生物学专业，主要从事细菌耐药方面研究。

刘晓莉,女，1960年生，主任医师，学士学位，毕业于昆明医学院临床医学专业，主要从事细菌耐药方面研究。