高效液相色谱法测定饲料添加剂L-赖氨酸硫酸盐的含量

■卢 琳

(新疆维吾尔自治区兽药饲料监察所，新疆乌鲁木齐 830063)

L-赖氨酸硫酸盐（L-Lysine sulphate），其化学名称为左旋-2，6-二氨基己酸单硫酸盐，是一种白色或近白色自由流动的结晶性粉末，几乎无臭，易溶于水和甲酸，难溶于乙醇和乙醚。其用途主要用作饲料添加剂、食品强化剂和制药。

赖氨酸是蛋白质的重要组分之一，是人体8种必需氨基酸之一，是一种优良的食品强化剂。因食物中缺乏赖氨酸，所以又称“第一必需氨基酸”。将赖氨酸添加到饮品、大米、面粉、罐头等食品中可以提高蛋白质的利用率，从而大大强化食品的营养，起到促进生长发育、增加食欲、减少疾病、增强体质的作用，用于罐头中起除臭保鲜的作用。

L-赖氨酸硫酸盐除含有51%的赖氨酸（相当于65%的饲料级L-赖氨酸硫酸盐）外，还含有不少于15%的其它氨基酸，可为动物提供更为全面、均衡的营养，同时这些氨基酸共同作用还可以提高断奶仔猪的消化性能，从而使其消化率提高。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Agilent1200）、METTLER AE240型电子天平（梅特勒公司）。

1.2 试药与试剂

硼酸盐缓冲液（borate buffer）（Agilent公司）、邻苯二甲醛（OPA）（Agilent公司）、9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC）（Agilent公司）、正缬氨酸标准品（Sigma）、L-赖氨酸标准品（Sigma）、L-赖氨酸硫酸盐样品（由新疆梅花氨基酸有限责任公司提供）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱Hypersil AA-ODS 200 mm×2.1 mm，5 μm(Agilent公司)；以流动相A{（1.36±0.025）g三水合乙酸钠+500 ml水+90 μl三乙胺[1%～2%乙酸调节pH值至(7.20±0.05)]+1.5 ml四氢呋喃}和流动相 B{（1.36±0.025）g三水合乙酸钠+100 ml水[1%～2%乙酸调节pH值至(7.20±0.05)]+200 ml甲醇+200 ml乙腈}按表1中的洗脱程序进行梯度洗脱，流速为0.45 ml/min；进样按表2中的进样程序进样；采用紫外检测器，检测波长在0～16 min为338 nm、在16～25 min为262 nm；柱温40 ℃。

表1 洗脱程序

表2 进样程序

2.2 试液制备

2.2.1 样品溶液制备

称取250 mg样品放入100 ml容量瓶中，加1 N盐酸使之溶解后,放入60～70℃水浴或者超声波浴中搅拌30 min，变成悬浊液之后常温冷却，再用1 N盐酸定容至100 ml，摇匀。取5 ml此溶液放入50 ml容量瓶中，准确加入0.1%正缬氨酸溶液5 ml，用柠檬酸钠缓冲液定容至50 ml，摇匀，用0.22 μm微过滤膜过滤之后检测。

2.2.2 对照品标准工作液制备

准确称量250 mg L-赖氨酸标准品放入100 ml容量瓶中，加1 N盐酸，溶解后定容至刻度。分别取1、2、3、4、5 ml此溶液放入50 ml容量瓶中，准确加入0.1%正缬氨酸溶液5 ml，用柠檬酸钠缓冲液定容至50 ml，充分摇匀，用0.22 μm微过滤膜过滤之后上机检测。

2.3 线性关系考察

取对照品标准工作液，按2.1项下色谱条件测定，以含量（x，mg/ml）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标，得回归方程：y=5 058.057 14x+15.242 857,r=0.999 6。L-赖氨酸硫酸盐在0～0.25 mg/ml范围内，其含量与峰面积呈良好的线性关系(见图1)。

图1 对照品标准液校正曲线

2.4 对照品与样品的色谱图

分别取对照品溶液与样品溶液按2.1项下色谱条件测定。对照品与样品的色谱图见图2。图2中样品的色谱图表明，样品的保留时间与对照品的保留时间一致，样品峰的峰形清晰，由此，该方法能够较好地测定饲料添加剂L-赖氨酸硫酸盐的含量。

图2 HPLC色谱图

2.5 回收率试验

2.5.1 对照品溶液制备

准确称量250 mg L-赖氨酸标准品置于100 ml容量瓶中，加1 N盐酸，溶解后定容至刻度。精确量取5 ml此溶液置于50 ml容量瓶中，准确加入0.1%正缬氨酸溶液5 ml，用柠檬酸钠缓冲液定容至50 ml，充分摇匀。

2.5.2 添加样品溶液制备

分别精密称取样品200、250、300 mg置100 ml量瓶中，加1 N盐酸使之溶解后,放入60～70℃水浴或者超声波浴中搅拌30 min，变成悬浊液之后常温冷却，再用1 N盐酸定容至100 ml，摇匀。取5 ml此溶液放入50 ml容量瓶中，准确加入0.1%正缬氨酸溶液5 ml，用柠檬酸钠缓冲液定容至50 ml，摇匀(结果见表3)。由表3的回收率测定结果可见，该方法回收率较高，可以有效地控制饲料添加剂L-赖氨酸硫酸盐的质量。

表3 回收率测定结果(%)

3 结论

本文采用高效液相色谱法，对饲料添加剂L-赖氨酸硫酸盐的含量进行定量测定，样品前处理方法简单；同时，该方法使用正缬氨酸作为内标物用以校正,可完全排除被测样品中其他组分的干扰。该方法的重现性好，结果准确可靠，可有效地检测饲料中饲料添加剂L-赖氨酸硫酸盐的含量，从而更好地控制市场上流通的饲料添加剂L-赖氨酸硫酸盐的质量。