单核细胞趋化蛋白-1及其受体与子痫前期发病关系

张金春,左建新,彭伟,叶元华

(青岛大学医学院附属医院产科,山东青岛 266003)

单核细胞趋化蛋白-1及其受体与子痫前期发病关系

张金春,左建新,彭伟,叶元华

(青岛大学医学院附属医院产科,山东青岛 266003)

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体(CCR2)与子痫前期发病的关系。方法选择在我院住院分娩的子痫前期孕妇60例,其中重度子痫前期30例,轻度子痫前期30例,以同期分娩的正常晚期妊娠孕妇30例为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测两组孕妇血清MCP-1浓度,采用实时PCR技术检测两组孕妇胎盘组织中MCP-1及CCR2 m RNA表达水平。结果子痫前期组孕妇血清MCP-1浓度显著高于对照组(t＝3.4,P＜0.05),轻度子痫前期组与重度子痫前期组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。子痫前期组孕妇胎盘组织中CCR2 m RNA的表达显著高于对照组(t＝6.1,P＜0.05),轻度子痫前期组与重度子痫前期组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。子痫前期组孕妇胎盘组织中MCP-1 m RNA的表达与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。结论孕妇血清中MCP-1及胎盘组织CCR2 m RNA的表达与子痫前期发病密切相关,但与疾病严重程度无明显关系。

先兆子痫;趋化因子CCL2;受体,CCR2

子痫前期是孕妇妊娠期所特有的疾病,是导致妊娠妇女和围生儿患病率及死亡率增高的主要原因之一。目前多数学者认为,子痫前期的主要发病机制是胎盘浅着床和血管内皮受损[1-2]。单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)是1989年首先在人胶质细胞瘤单核细胞中发现和提纯的重要趋化因子。研究结果表明,MCP-1可通过与其受体CCR2结合,介导炎症免疫反应的发生,导致血管内皮损伤,参与子痫前期的发生、发展[3]。目前,对于MCP-1及其受体在子痫前期发病机制中的作用尚未明确。本研究通过测定MCP-1及其受体在子痫前期孕妇血清及胎盘组织中的表达情况,探讨其与子痫前期发病的关系。现将结果报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择在我院住院分娩的子痫前期孕妇60例,其中重度子痫前期30例,轻度子痫前期30例,轻度及重度子痫前期诊断标准参照第7版《妇产科学》。以同期分娩的正常晚期妊娠孕妇30例为对照组。两组孕妇年龄及孕周比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。见表1。两组妊娠均为单胎,既往无全身炎症、原发性高血压、冠心病、糖尿病及慢性肾炎等病史。本研究经医院伦理委员会批准,所有孕妇均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集 于分娩前24 h空腹采集两组孕妇肘静脉血5 m L,分离血清后于－80℃冰箱保存。胎盘娩出后即刻,在无菌状态下于胎盘的母体面中间避开梗死及钙化区取胎盘组织约2 cm×2 cm× 2 cm大小,用无菌生理盐水充分漂洗后,再用无菌纱布吸掉水分,置于1.5 m L无菌EP管中－80℃冰箱保存,以待RNA的提取。

表1 两组孕妇年龄及孕周比较(±s)

___组别_________n年龄(岁)孕周(周)对照组30 28.7±2.2 39.2±1.1子痫前期组60 32.4±4.5 36.1±2.2轻度30 32.2±5.5 36.8±2.1 ___重度_________30___________________________________________ 32.3±2.6 34.6±2.3

1.2.2 血清MCP-1浓度检测 采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法,试剂购自青岛威思科德商贸有限公司,所有标本同批测定,批内变异＜6%。

1.2.3 胎盘组织MCP-1及CCR2 m RNA的表达检测 采用实时PCR技术。取胎盘组织约100 mg,经充分研磨后采用Trizol-氯仿一步法提取胎盘组织的总RNA,取3μg总RNA进行逆转录反应,合成cDNA。试剂盒由日本TAKARA公司提供,严格按试剂盒说明书进行操作。PCR引物序列见表2。建立20μL PCR反应体系:primixe酶10μL,上下游引物各2μL,超纯水5μL,cDNA产物1μL。MCP-1扩增反应条件:95℃预变性3 min;94℃变性30 s,57℃退火45 s,72℃延伸1 min,共35个循环;最后72℃延伸10 min。CCR2扩增条件除退火温度为62℃外,余均相同。GAPDH扩增反应条件:98℃10 s,58℃30 s,72℃20 s,72℃延伸10 min,共35个循环。以20 g/L琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物,取目标产物2μL电泳30 min,电泳结果用计算机扫描分析,以MCP-1或CCR2扩增条带实际灰度值与GAPDH的实际灰度值的比值表示MCP-1或CCR2 mRNA的相对表达水平。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 两组孕妇血清及胎盘组织中MCP-1和CCR2表达比较

子痫前期组血清MCP-1浓度与对照组比较,差异有统计学意义(t＝3.4,P＜0.05);轻度子痫前期组与重度子痫前期组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。

子痫前期组胎盘组织中MCP-1 m RNA的表达与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)。子痫前期组胎盘组织中CCR2 m RNA的表达水平显著高于对照组(t＝6.1,P＜0.05);轻度子痫前期组与重度子痫前期组相比较,差异无显著意义(P＞0.05)。见表3及图1、2。

2.2 子痫前期孕妇血清与胎盘组织中MCP-1表达的相关性

子痫前期孕妇血清MCP-1表达水平与其胎盘组织MCP-1 m RNA表达水平无相关性(r＝0.077, P＞0.05)。

3 讨 论

MCP-1基因启动子上有与NF-k B结合位点,结合后可激活MCP-1基因的转录。MCP-1的特异性受体CCR2属7次跨膜α螺旋受体,在多种细胞上表达,包括单核细胞、自然杀伤细胞、树突状细胞等。MCP-1可由多种细胞分泌,属炎症反应的始发因子,其与CCR2结合后,受体与G蛋白相互作用,激活细胞内第二信使,产生酶或功能蛋白,进而发挥相应的生物学效应,招募单核-巨噬细胞到特定部位,介导炎症反应的发生[4-5]。

3.1 MCP-1在子痫前期孕妇血清中的表达及意义

MCP-1在炎症、动脉硬化、妊娠免疫失衡、高血压、脑脊髓炎、肿瘤等病理过程中发挥重要的作用。但关于MCP-1与孕妇子痫前期发病的关系尚未明确。已有研究显示,MCP-1在子痫前期孕妇血清中表达明显升高,MCP-1可能在子痫前期孕妇中引起了全身过度的炎症反应,并且参与免疫细胞Th1与Th2的转变,母胎界面趋化因子MCP-1在可控制状态下参与了滋养细胞的入侵,推测一旦MCP-1表达升高,将导致滋养层入侵障碍引起胎盘低氧,释放炎性因子,导致子痫前期的发病[6-7]。MOLVAREC等[8-9]采用基因悬浮芯片技术检测子痫前期孕妇与正常足月孕妇血清中MCP-1的表达情况,发现子痫前期孕妇高表达MCP-1,指出子痫前期发病可能与过度的全身炎症反应密切相关。本研究结果显示,子痫前期孕妇血清中MCP-1表达明显高于正常孕妇。推测MCP-1募集单核-巨噬细胞,进而引发全身其他炎性递质及细胞因子的释放,导致全身炎症免疫反应的发生,损伤血管内皮,引起子痫前期发病。本研究子痫前期孕妇血清中MCP-1的表达与疾病的轻重程度之间暂未显示有明显关系,需进一步研究探讨。

表3 两组孕妇血清及胎盘组织中MCP-1和CCR2表达比较(±s)

与对照组比较,∗t＝3.4、6.1,P＜0.05。

组别n__血清MCP-1 (ρ/ng·L－1)_MCP-1 mRNA CCR2 m RNA对照组30 186.9±77.8 3.0±2.3 2.3±0.5子痫前期组60 263.5±85.0∗2.8±2.8 3.1±0.6∗轻度30 247.3±114.5 3.2±3.1 2.9±0.4 __重度______30__279.7±34.2_____________________________ 2.4±2.5 3.2±0.4

3.2 CCR2 m RNA在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及意义

MAYA等[10]建立CCR2模型小鼠,采用一定浓度CCR2拮抗剂可抑制单核-巨噬细胞聚集,进而抑制血管炎症反应,减轻血管内皮损伤。苏林丘等[11]采用实时PCR技术检测冠心病病人单核细胞CCR2受体表达,结果显示其与正常对照组比较差异具有统计学意义,而且随病情进展而表达升高, CCR2表达升高招募大量单核-巨噬细胞,损伤血管内皮。子痫前期孕妇存在过度的炎症反应及血管内皮受损[8,12]。本文的研究结果显示,子痫前期孕妇胎盘组织CCR2 mRNA表达水平明显高于正常孕妇, CCR2主要由炎症细胞分泌产生,推测在子痫前期发病时CCR2招募大量单核-巨噬细胞到达胎盘局部,导致炎性递质及细胞因子释放,引起孕妇胎盘组织的炎症免疫反应,对胎盘组织及血管造成一定的损伤。

3.3 MCP-1 m RNA在子痫前期孕妇胎盘组织中的表达及意义

目前对子痫前期胎盘组织中MCP-1 m RNA研究报道较少。JONG等[13]采用实时PCR技术和Western blot分析研究结果显示,子痫前期孕妇胎盘衍生的间充质干细胞MCP-1 m RNA的表达与正常孕妇胎盘组织比较无显著差异。本研究显示,子痫前期孕妇胎盘组织中MCP-1 m RNA表达与对照组比较无显著差异,而且胎盘组织MCP-1 m RNA表达与血清MCP-1浓度无相关性,证明子痫前期孕妇血清中MCP-1的产生与胎盘组织MCP-1基因的表达无明显关系,考虑MCP-1的产生并不来源于胎盘组织,但孕妇血清中MCP-1可进入胎盘组织招募单核细胞聚集,引起胎盘组织炎症反应,同时导致胎盘组织中CCR2 mRNA表达增高。MCP-1与胎盘组织中的特异性受体CCR2结合,导致炎症反应,损伤血管内皮,引起子痫前期发病。

综上所述,子痫前期病人血清中MCP-1和胎盘组织中CCR2表达升高,可能通过炎症免疫机制引起子痫前期发病,但是其与子痫前期严重程度的相关性需进一步研究。

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(本文编辑 马伟平)

RELATIONSHIP BETWEEN MCP-1,ITS RECEPTOR AND PREECLAMPSIA

ZHANG Jinchun,ZUO Jianxin,PENG Wei, YE Yuanhua (Department of Obstetrics,The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266003, China)

ObjectiveTo study the association of monocyte chemotactic protein-l(MCP-1)and its receptor(CCR2)with preeclampsia.MethodsSixty women with preeclampsia(30 severe and 30 mild)who gave birth in our hospital were selected, and 30 late pregnant women who gave birth in the same time period were served as controls.ELISA was used to measure the levels of serum MCP-1.The expressions of MCP-1 massager RNA(m RNA)and CCR2 m RNA in placenta tissue were determined by RTPCR.ResultsIn preeclampsia group,the serum concentration of MCP-1 was significantly higher than the control(t＝3.4,P＜0.05),No significant difference was found in the expression of MCP-1 between severe and mild preeclampsia group(P＞0.05).CCR2 m RNA expression in placenta in preeclampsia group was significantly higher than the control(t＝6.1,P＜0.05),bur that between severe and mild preeclampsia group was not statistically significant(P＞0.05).No significant difference was found in the expressions of MCP-1 m RNA in placenta between preeclampsia and control group(P＞0.05).ConclusionThe expression levels of MCP-1 in serum and CCR2 m RNA in placenta were closely related to the occurrence of preeclampsia,but not with the severity of the illness.

pre-eclampsia;chemokine CCL2;receptors,CCR2

R714.25

A

1008-0341(2013)04-0331-04

10.11712/qlyx201304016

2012-12-18;

2013-04-22

张金春(1985-),女,硕士研究生。

叶元华(1963-),男,博士,主任医师,硕士生导师。