肝硬化病人血小板膜蛋白CD62P表达及临床意义

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(临沂市人民医院，山东 临沂 276003 1 消化科； 2 检验科)

肝硬化是一种常见的慢性肝脏疾病，早期可无症状，后期可出现肝功能减退、门脉高压及多系统受累的表现，如造血系统的损害。本研究采用流式细胞术检测肝硬化病人血小板α-颗粒膜蛋白(CD62P)的表达，探讨CD62P与肝脏功能受损严重程度的关系，现报告如下。

1 对象与方法

1.1 对象

选取我科住院肝硬化病人30例，男25例，女5例；年龄35～68岁。肝硬化诊断均符合1995年第五次全国传染病与寄生虫病学术会议制定的标准。按Child-Pugh分级，A级10例，B级10例，C级10例。所有病例均无心、脑、肾疾病及糖尿病史，亦无急性感染。以我院保健查体中心体检健康者20例作为正常对照组，男10例，女10例；年龄21～50岁。所有研究对象采血前1周均未服影响凝血功能的药物。

1.2 方法

1.2.1CD62P检测 两组均于清晨空腹采集外周静脉血2 mL，经38.4 g/L枸橼酸钠抗凝，加入4 ℃的40 g/L多聚甲醛溶液1 mL，室温固定15 min，800 r/min离心5 min，取上清液即为富含血小板血浆。取50 μL加入藻红蛋白标记的抗CD62P单克隆抗体(CD62P PE，美国Becton-Dickinson公司产品)20 μL，混匀作为测定管；另取富含血小板血浆50 μL加入磷酸盐缓冲液(PBS)40 μL混匀作为对照管。两管均室温下避光作用20 min,立即加4 ℃的40 g/L多聚甲醛溶液1 mL混匀；加PBS液2 mL漂洗，以2 000 r/min离心5 min后弃去上清液，重复上述步骤2次，调整血小板密度为10×109/L。用流式细胞仪(FAC-Sean型，美国Becton-Dickinson公司)检测，获取数据用Cell Quest Plot软件进行分析，得出CD62P阳性血小板百分率。

2 结 果

2.1 两组血小板表面CD62P表达比较

肝硬化组和正常对照组CD62P阳性血小板百分率分别为(12.10±7.52)%和(2.74±1.05)%，肝硬化组显著高于正常对照组(t=6.693，P<0.01)。

2.2 不同分级肝硬化病人血小板表面CD62P表达比较

A、B、C级肝硬化病人CD62P阳性血小板百分率分别为(5.88±2.03)%、(9.20±4.06)%和(20.67±7.61)%，随着肝硬化程度的加重，CD62P表达增高(F=28.370，P<0.01)。

3 讨 论

CD62P又称P选择素，主要存在于静止血小板表面α-颗粒膜上，对血小板活化具有高度敏感性和特异性，是体内血小板活化的特异性指标[1]。本研究结果表明，肝硬化病人CD62P表达明显高于正常对照组，且与Child-Pugh分级相关，说明肝硬化病人血小板高度活化，血小板有不同程度的破坏，肝硬化程度越重，血小板破坏越多。CD62P表达增高是反映血小板活化程度及功能状态的标志之一[2-3]。

肝硬化病人大多脾功能亢进，血小板破坏过多，单核巨噬细胞系统会代偿性分泌血小板,而血小板自身有巨型和畸形的形态变化，产生大体积血小板是为适应机体凝血的需要[4]。杨爱华等[5]认为，肝硬化病人随着肝功能的减退和Child-Pugh评分升高，血小板平均体积明显增大。THOMPSON 等[6]认为，体积越大的血小板含致密体越多，有更高的活性。通过观察肝硬化病人血小板CD62P表达，能全面分析血小板的活化程度以及功能状态，有助于早期发现肝硬化造成的岀血、凝血障碍，有助于判定病情和预后，对临床治疗有重要意义。

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