宫颈脱落细胞RASSF1A基因甲基化在宫颈癌中的临床意义

李 琦，胡昌华，张 婧（.武汉市汉阳医院妇产科，湖北武汉 430050；2.襄阳市中心医院妇产科，湖北襄阳 4402）

RAS相关区域家族1A（RASSF1A）可增强丝氨酸－苏氨酸激酶MstI活化，抑制Cyclin D1积聚而促进细胞死亡受体信号传导通路，与肿瘤发生、发展及转归密切相关[1－2]。RASSF1A基因在宫颈癌组织中呈高甲基化状态，可作为宫颈癌分子诊断和预后评估的标志物[3－4]，但仅可用于术后组织标本检测，临床应用受限。本研究采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测宫颈癌患者和健康女性宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化状态，研究宫颈脱落细胞RASSF1A基因甲基化在宫颈癌中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2010年1月至2012年6月经手术治疗的75例初治宫颈癌患者，年龄35～80岁，平均50.5岁，包括鳞状细胞癌56例、腺癌12例、腺鳞癌7例，根据2009年国际妇产科联盟（Figo）宫颈癌分期标准，分为Ⅰ期15例、Ⅱ期35例、Ⅲ期17例、Ⅳ期8例。同期体健健康女性75例纳入对照组，年龄34～80岁，平均50.4岁。年龄分布组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 方法 由临床医生采集宫颈脱落细胞标本，以DNA提取试剂盒（北京天根）提取细胞DNA，经甲基化修饰试剂盒（北京天漠）处理后，进行MSP检测。采用Methyl Primer Express V1.0设计MSP引物，引序列见表1，由大连宝生物工程有限公司合成。MSP反应体系为25μL，反应条件为95℃10min，95℃1min、65℃30s、72℃30s循环35次，72℃10min，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后检测。

表1 RASSF1A基因MSP引物序列（5′→3′）

1.3 统计学处理 采用SPSS11.0软件进行数据分析。计数资料以百分率表示，组间比较采用χ2检验或Fisher精确检验法；显著性检验水准为α＝0.05，P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 RASSF1A基因启动子甲基化检测结果 宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率为64.0%（48／75），健康女性为甲基化率为1.3%（1／75），宫颈癌患者甲基化率高于健康女性（P＜0.05）。

2.2 RASSF1A基因启动子甲基化与病理因素的关系 不同年龄和病理类型宫颈癌患者RASSF1A基因启动子甲基化率比较差异无统计学意义（P＞0.05），但不同组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、Figo分期患者比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化与病理因素的关系

3 讨 论

RASSF1A基因位于3号染色体短臂中的抑癌基因，可抑制Cyclin D1积聚而促进细胞死亡受体信号传导通路，与肿瘤发生、发展及转归密切相关[5]。RASSF1A基因在结肠癌、胃癌等消化系统肿瘤中呈高甲基化状态，甲基化导致基因发生表观遗传学改变，通过阻遏转录因子与启动子结合，抑制或下调RASSF1A表达水平，使其失去对细胞周期的调控作用，最终导致细胞癌变[6－8]。崔华英等[3]研究结果表明，宫颈癌组织RASSF1A基因启动子甲基化率高达73.8%，认为RASSF1A基因启动子甲基化可作为宫颈癌的分子诊断和预后评估的生物标志物。本研究中，宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率为64.0%，高于健康女性，与宫颈癌组织检测结果相比，甲基化率稍低，但宫颈脱落细胞检测可在术前进行，使其具有更好的预测性。

甲基化是表观遗传学最重要的转录前调控机制，可引起染色体及DNA空间构象发生改变，主动或被动阻遏转录因子结合到转录起始点而调控基因表达[9]。基因启动子甲基化与肿瘤发生、病情进展及预后紧密相关，可作为肿瘤的基因水平生物学标志物，比蛋白质类肿瘤标志物具有更高的灵敏度及特异性[10]。本研究中，宫颈癌患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率在不同年龄和病理类型患者间的差异无统计学差异（P＞0.05），但在不同组织学分级、肿瘤最大径、淋巴结转移、器官转移、Figo分期患者间的差异具有统计学意义（P＜0.05），组织学分级高、肿瘤最大径大、有淋巴结转移及器官转移、Figo分期晚的患者宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化率高于组织学分级低、肿瘤最大径小、无淋巴结转移及器官转移、Figo分期早的患者，说明与宫颈癌组织类似，宫颈脱落细胞RASSF1A基因启动子甲基化与宫颈癌患者病情及预后密切相关，可作为分子诊断及病情预后评估的标志物。

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