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人参药性菌质对小鼠Lewis肺癌的作用

2013-02-01贾艾玲邱智东长春中医药大学吉林长春130117

中国老年学杂志 2013年23期
关键词:药性脾脏皂苷

朱 凯 贾艾玲 徐 瑶 邱智东 (长春中医药大学,吉林 长春 130117)

人参药性菌质对小鼠Lewis肺癌的作用

朱 凯 贾艾玲 徐 瑶 邱智东 (长春中医药大学,吉林 长春 130117)

目的 观察人参药性菌质对小鼠Lewis肺癌的抑制作用并初步评价其一般毒性及对免疫功能的影响。方法 将Lewis肺癌小鼠随机分为模型对照组、顺铂组、参一胶囊组、人参药性菌质低、中、高(2、4、8 g/kg)剂量组,每组12只,另取12只健康小鼠做为空白对照组,给药后26 d取小鼠肿瘤、胸腺、脾脏、肝脏等脏器称重,检测脾脏CD4/CD8比值,检测脾脏杀伤性T细胞(CTL)的产生情况。结果 与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组均可抑制肿瘤LLC成瘤(P<0.05或P<0.01);与空白对照组比较,人参药性菌质各组脾脏指数及胸腺指数无明显差异;与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组的CD4和CD8细胞百分比明显升高(P<0.05或P<0.01);与模型对照组比较,人参药性菌质各组CD4/CD8比值降低(P<0.05);与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组CTL数量及IFN-gamma细胞数增多(P<0.05或P<0.01)。结论 人参药性菌质在体内有抗小鼠LLC成瘤的作用,无肝脏、胸腺、脾脏毒性;并且能够调节CD4/CD8比值,增加CTL细胞产生及IFN-γ细胞数,具有增强机体免疫功能的作用。

人参;药性菌质;Lewis肺癌;免疫功能

人参药性菌质是采用“药用真菌新型固体发酵工程”〔1,2〕(简称双向发酵)的方法和原理,在一定条件下由灵芝菌对人参进行整体固体发酵获得的药性菌质,其中富含灵芝多糖及人参稀有皂苷Rh1、Rg3〔3〕。不同于机械地采用对单一人参皂苷提取物向某人参稀有皂苷的生物转化方法〔4~6〕,人参药性菌质具有新合成的物质、真菌菌丝及中药中未被发酵完的药用成分,他们的复合作用协同发挥药效常比真菌或药性基质本身或两者简单相加有更良好的药效。鉴于其中的灵芝多糖、人参稀有皂苷Rh1、Rg3均具有较好的生理活性〔7~9〕,本研究旨在观察人参药性菌质对小鼠Lewis肺癌的抑制作用并初步评价药物的一般毒性及其对免疫功能的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 Lewis肺癌细胞株由厦门大学医学院中心实验室提供。健康C57BL/6小鼠,雌雄各半,4~6周龄,体重(20±2)g,购于中国科学院上海分院史莱克动物中心。参一胶囊购于吉林亚泰制药股份有限公司,国药准字Z20030044。顺铂注射液购于江苏豪森药业股份有限公司,批准文号H20010743。人参药性菌质由实验室自制。Elispot试剂盒购于深圳达科为公司。CD4抗体、CD8抗体购自eBiolegend公司。

1.2 方法

1.2.1 荷瘤动物模型的建立 取传代后14 d的Lewis肺癌瘤源小鼠,脱颈处死,固定于鼠板上,常规消毒,于超净工作台中,从腋部皮下剥取肿瘤组织,剔除纤维包膜和坏死组织,在无菌平皿中剪碎,置组织研磨器中加4℃生理盐水轻轻研磨,过滤,制成瘤细胞悬液,调整细胞浓度为1×107个/m l。C57BL/6小鼠右腋部皮下注射0.2 ml瘤细胞悬液以建立荷Lewis肺癌动物模型。

1.2.2 实验动物分组及给药 将造模成功的72只小鼠按体重随机分为6组:模型组、阳性药顺铂组、参一胶囊组、人参药性菌质2 g/kg组、人参药性菌质4 g/kg组、人参药性菌质8 g/kg组,每组12只。另取12只健康C57BL/6小鼠做为空白对照组。接种瘤细胞次日开始继续灌胃给予相应药物,空白对照组及模型组给予等体积溶媒,阳性药组腹腔注射给药,1次/d,连续14 d,每天观察小鼠饮食及肿瘤生长情况。

1.2.3 观察指标 末次灌胃给药后1 h,小鼠称重,处死,取各组小鼠的肿瘤、肝脏、脾脏、胸腺称重,计算各组小鼠的肿瘤生长抑制率和脏器指数。同时观察动物一般表现、体重变化及用药后动物的胸腺、脾脏及肝脏等脏器系数的改变。检测脾脏的CD4/CD8比值、脾脏杀伤性T细胞的数量(CTL)活性。

2 结果

2.1 各组小鼠肿瘤生长抑制率及脏器指数的比较 与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组均可抑制肿瘤LLC成瘤(P<0.05或P<0.01),人参药性菌质高剂量组效果与顺铂、参一组作用相当(P<0.01);与模型对照组比较,顺铂组肝脏指数降低(P<0.05),参一、人参药性菌质各组肝脏指数无明显差异。与空白对照组比较,顺铂、参一、人参药性菌质各组脾脏指数及胸腺指数无明显差异。见表1,表2。

表1 各组小鼠肿瘤生长抑制率的变化(±s,n=12)

表1 各组小鼠肿瘤生长抑制率的变化(±s,n=12)

与模型对照组比较:1)P<0.05,2)P<0.01;下表同

组别 体重(kg)肿瘤重量(kg)肿瘤生长抑制率(%)17.61±1.05 - -模型对照组 1.12±0.19 0 -顺铂组 17.3±1.26 0.89±0.112) 20.77参一组 17.66±0.88 0.58±0.072) 47.88人参药性菌质低剂量组 17±0.87 0.52±0.061) 53.52人参药性菌质中剂量组 17.85±1.08 0.7±0.061) 37.73人参药性菌质高剂量组 16.5±1.48 0.36±0.052)空白对照组68.14

表2 各组小鼠脏器系数的变化(±s,n=12)

表2 各组小鼠脏器系数的变化(±s,n=12)

728.03±111.95 63.81±17.369202.73±14.99模型对照组 765.68±86.72 93.8±14.47 208.13±28.53顺铂组 649.42±59.911)59.78±12.57 179.98±28.69参一组 703.68±47.98 72.1±15.91 207.69±9.25人参药性菌质低剂量组722.94±58.93 70.94±13.32 189.62±20.38人参药性菌质中剂量组710.38±65.87 82.25±11.38 198.98±11.88人参药性菌质高剂量组组别 肝脏指数 胸腺指数 脾脏指数空白对照组687.46±71.55 65.44±11.51 201.74±24.12

2.2 各组小鼠CD4、CD8百分率及CD4/CD8比值的比较 与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组的CD4和CD8细胞百分比明显升高(P<0.05或P<0.01),人参药性菌质高剂量组效果与顺铂、参一组作用相当(P<0.01);与模型对照组比较,人参药性菌质各组 CD4/CD8比值降低(P<0.05)。见表3。

2.3 各组小鼠脾脏的CTL细胞杀伤活性及IFN-γ细胞数的比较 与模型对照组比较,人参药性菌质各剂量组CTL细胞杀伤活性增加及IFN-γ细胞数增多(P<0.05或P<0.01),人参药性菌质高剂量组效果与顺铂组作用相当(P<0.01)。见表4。

表3 各组小鼠CD4、CD8细胞变化(±s,n=12)

组别 CD4 CD8 CD4/CD8 20.53±4.21 13.5±2.02 1.56±0.23模型对照组 12.12±2.14 6.25±0.73 1.85±0.18顺铂组 21.55±3.572)14.34±2.031)1.61±0.191)参一组 19.83±2.672)11.13±1.912)1.74±0.221)人参药性菌质低剂量组 18.87±3.051)10.58±1.481)1.71±0.201)人参药性菌质中剂量组 17.29±3.111)11.59±1.981)1.49±0.161)人参药性菌质高剂量组 22.12±3.742)14.26±2.162)1.46±0.171)比值空白对照组

表4 各组小鼠CTL杀伤活性及IFN-γ细胞数的变化(±s,n=12)

组别 CTL IFN-γ +1.98±0.00模型对照组 19.26±262.00 4.23±0.00顺铂组 3128.34±3.46 24.25±0.002)参一组 27.51±3.022) 8.75±0.002)人参药性菌质低剂量组 24.88±2.791) 8.82±0.001)人参药性菌质中剂量组 23.55±2.681) 14.26±0.001)人参药性菌质高剂量组 30.27±3.12 22.31±0.002)细胞空白对照组 -

3 讨论

本项研究表明:在给小鼠灌胃期间小鼠饮食情况和一般情况良好,无异常,人参药性菌质对小鼠重要脏器指数无影响,即无肝脏、胸腺、脾脏毒性。人参药性菌质在体内有抗小鼠LLC成瘤的作用,无肝脏、胸腺、脾脏毒性;并且能够调节CD4/CD8比值,增加CTL细胞产生及IFN-γ细胞数,具有增强机体免疫功能的作用。

生物转化和双向固体发酵技术在中药领域的应用是在继承传统中药发酵法的基础上,结合现代生物技术对中药开发利用的结果,能够显著提升传统中药的临床疗效、发现传统中药的临床新价值、显著提高中药材资源的利用率、批量创新中药,从而促进中药的产业化发展。

1 庄 毅.药用真菌新型(双向型)固体发酵工程〔J〕.中国食用菌,2002;21(4):3.

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3 王洪峰,朱 凯,田 健,等.人参双向固体发酵过程中化学成分的变化〔J〕.吉林农业大学学报,2013;35(3):312-6.

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Effect of ginseng medicine property fungal substance on Lew is lung cancer m ice

ZHU Kai,JIA Ai-Ling,XU Yao,et al.
Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,Jilin,China

Objective To observe the inhibition effect of ginsengmedicine property fungal substance on Lewis lung cancer inmice,evaluate general toxicity and effects on immune function.M ethods The Lewis lung cancermice were random ly divided intomodel,cisplatin,Shenyi capsule,ginsengmedicine property fungal substance low,middle,and high(2,4,8 g/kg)dose groups,another 12 healthy mice were as blank control group.After administration of 26 d,mice tumor,thymus,spleen,liver and other organs were weighed,spleen CD4/CD8 ratio and spleen CTL generation situation were detected.Results Compared with thatofmodelgroup,each dose ginsengmedicine property fungal substance inhibited LLC tumor formation(P<0.05 or P<0.01);there were no significant differences in spleen index and thymus index between these groups.Compared with those ofmodel group,the percentage of CD4 and CD8 cellswere significantly increased in ginsengmedicine property fungal substance group,while the ratio of CD4/CD8 was decreased(P<0.05 or P<0.01).Compared with those ofmodel group,the numbers of CTL and IFN-gamma cellswere increased in ginsengmedicine property fungal substance group(P<0.05 or P <0.01).Conclusions Ginsengmedicine property fungal substance in vivo has the anti-tumorigenic effect,no toxicity of liver,and has the ability to regulate the CD4/CD8 ratio,increase CTL cells and IFN-gamma cells,enhance immune function.

Medicine property fungal substance;Lewis lung cancer;Immune function

R285.5

A

1005-9202(2013)23-5882-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2013.23.048

国家科技支撑计划课题(2012BAI29B00,2012BAI29B05);吉林省科技发展计划项目(YYZX201129)

邱智东(1965-),男,教授,主要从事中药学研究。

朱 凯(1980-),男,理学硕士,讲师,主要从事微生物与生化药学研究。

〔2012-06-13收稿 2012-10-10修回〕

(编辑 徐 杰)

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