三七及其制剂采用高效液相色谱法测定皂苷类方法学概述

2013-01-31苏家辉

中国药物经济学 2013年6期

苏家辉

苏家辉

三七是常用的中药之一，由于三七及其制剂中的化学成分复杂性，采用高效液相色谱法（HPLC）测定皂苷类的分析研究越来越多。本文结合近年实验室的相关研究，对该技术的特点、存在的问题进行简单的分析，并展望中药采用HPLC法的方法学研究的发展方向。相信该法会对三七的分析研究提供越来越重要的技术支持。

三七；HPLC法；皂苷类；方法学

三七又名田七，李时珍称其为“金不换”，是常用的中药之一，为五加科植物的干燥根[1]，拉丁学名：PanaxNotoginseng（Burk.）F.H.Chen。具有止血、活血、定痛的功效，临床常用于跌打损伤、胸痹绞痛、癥瘕积聚、闭经、痛经、疮痈肿痛等。《本草纲目拾遗》中记载：“人参补气第一，三七补血第一，味同而功亦等，故称人参三七，为中药中之最珍贵者”。“云南白药”和“片仔癀”都是以三七为主制成的，为驰名中外的中成药。

三七的主要药用成分包括皂苷、黄酮、氨基酸、多糖、脂肪酸等多种生物活性物质[2-3]。三七中的皂苷类被认为是其主要的生理活性成分之一。有研究表明，三七中皂苷类的含量，尤其是人参皂苷Rg1和Rb1的含量高于人参和西洋参[4]。目前常见的测定方法有HPLC、闭塞法、薄层扫描法等。现对HPLC测定三七皂苷类含量的方法学研究，总结如下。

1 HPLC分析方法研究

色谱柱：常见的三七及其成药分析HPLC色谱柱的常见填充剂有十八基硅烷键合硅胶（C18），其具有寿命长、效果稳定、价格适宜的特点，为最常用的HPLC色谱柱[5]。谭春梅[5]等以Shimadzu C18（75mm×2.0mm，2.2μm）为色谱柱检测三七胶囊中的五种皂苷的含量，且方法简单、快速。徐鹏[6]等采用VenusilXBP C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱以HPLC-ELSD法测定血塞通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd，结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd呈现良好的线性关系。

流动相：分离三七中皂苷类物质，由于其成分多，极性分布较大。因此，应采用梯度洗脱。常见的流动相种类有乙腈-水[9-10]。按照三七类注射液现行的国家标准，应选择乙腈-水，因其简单方便，被广泛应用。除水以外，常见的水相还有醋酸铵-氨水溶液[7]、醋酸铵溶液[8]、水等。

检测方法：目前常见的检测方法包括紫外检测和蒸发光散射检测。蒸发光散射检测由于灵敏度高、溶剂对其影响小，为近年通用的质量检测方法[9-10]。又因为三七皂苷仅仅尾端吸收紫外线，导致相应灵敏度不高，还存在极限漂移等情况，因此，部分研究选择了蒸发光散射检测，但是该检测方法线性范围窄，其测定重现性不如紫外检测方法。所以，目前最常用的方法仍为紫外检测方法，该方法具有检测简便、成熟、稳定、线性范围广等特点。

2 HPLC法测定三七皂苷类物质存在的问题及解决方法

2.1 成本过高为提高三七总皂苷的可控程度，需在研究中增加对照品，但三七皂苷类物质的对照品价格较为昂贵，使分析成本幅度大大提高，不适合做为日常生产的检验。为解决对照品的问题，可选择相对因子校正法[11]、对照提取物法[12]等。

相对因子校正法是将结构相似、相应稳定的同类化合物选择其中分离度好、性质稳定的成分作为对照品。对照物提取法是将不同实验室中的对照品和标定提取物的各个组分的含量。测定后可将标定好的对照提取物为对照，按照标定的含量值折算各个组分的量。

2.2 结果不够客观由于三七皂苷的HPLC图谱随着色谱柱和仪器的不同，其图谱各指纹峰保留时间不能完全重现。而且其变异无一定的规律，需要进行各个峰的手动校正。因此，其试验结果不够客观[13]。针对上述问题，有研究将纹峰的保留时间非线性漂移结果予以保留，不进行手动校正，以保证结果的客观性。

3 展望

三七及其制剂的皂苷类成分的HPLC检测是目前研究的热点之一，但是在方法学方面的研究仍存在着一些问题。建议今后的相关研究中能重视HPLC方法学上的考虑，选择C18色谱柱和相对质量稳定的HPLC仪器，对梯度和柱纹进行网格搜索；结合成本和客观角度出发选择更为合适的对照法进行测定。

HPLC具有较好的分离性能、较高的分析效率、较广的适用范围、选择性好、灵敏度高。而且，该方法能够通过使用整体材料填充、改变固定的相粒径、升高系统温度，可大大缩短分析时间[14]。相信随着仪器和色谱柱等其它技术的不断升级与完善，HPLC法在中药鉴定和中药成分研究中发挥越来越重要的作用，为中药现代化、国际化中提供越来越重要的技术支撑[15]。

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[3] 李琦,叶蕴华,邢其毅.三七水溶性化学成分及其药理研究新进展[J].高等学校化学学报,1996,17(12)：1886-1892.

[4] 魏均娴,杜元冲.三七——现代科学研究及应用[M].昆明：云南科技出版社,1996：12-16.

[5] 谭春梅,方翠芬,陈碧莲.超快速液相色谱法测定三七胶囊中5种皂苷含量[J].医药导报,2013(01)：81-84.

[6] 徐鹏,冯素香,赵迪,等.HPLC-ELSD法测定血塞通注射液中三七皂苷R-1、人参皂苷Rg-1、Re、Rb-1、Rd[J].中成药,2013(03)：521-524.

[7] 肖盛元,罗国安,王义明,等.LC/MS鉴定中药三七及其复方制剂[J].药学学报,2004,39(2)：127-131.

[8] 顾光华,周蕾,赵贵文.高效液相色谱法测定人参单体皂甙的研究——醋酸铵对人参皂甙分离的色谱改性[J].色谱,1994,12(1)：40-42.

[9] 甄健存,陈志刚,常增荣,等.血栓通注射液质量评价研究[J].中国药学杂志,2001,36(12)：847-850.

[10] 唐露,李希,冯建安,等.HPLC-ELSD法测定舒络颗粒中黄芪甲苷、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量[J].实用中医药杂志,2012,28(11)：964-967.

[11] 王超群,贾秀虹,陈季,等.中药三七“一测多评”质量控制方法的系统研究[J].中国中药杂志,2012(22)：3438-3445.

[12] 陈慧贞,李云飞,钟敬华,等.脑得生片物质基础的HPLCDAD-MS-n分析[J].浙江大学学报(医学版),2012(01)：32-42.