石斛口服液制备工艺研究

徐应淑，周旭美，鄢韬

（遵义医学院药学院，贵州遵义563003）

金钗石斛为兰科石斛属多年生附生草本植物[1]，是我国传统名贵中药，研究表明其有抗衰老、抗肿瘤和增强机体免疫力等作用[2]。金钗石斛的药用成分主要是多糖类物质[3]，是石斛中具有免疫增强作用和抗炎作用的活性成分[4]，结合文献[5-6]中多糖含量的提取及测定方法，本课题选用贵州道地药材赤水金钗石斛为原料以提取液中多糖的含量为指标，考察提取料液比、温度、时间、次数等因素，找出最佳制备工艺，为金钗石斛的进一步开发和利用提供参考。

1 材料

1.1 试药

金钗石斛：购自贵州赤水；D-无水葡萄糖对照品：中国药品生物制品检定所，批号：110833-200503；石油醚：天津市化学试剂一厂；苯酚：上海化学试剂厂；无水乙醇：重庆川东化工有限公司化学试剂厂；乙醚：天津市大茂化学试剂厂；浓硫酸：遵义市师范学院化学试剂厂；正丁醇：天津市致远化学试剂有限公司；氯仿：成都市化工试剂厂；均为分析纯。

1.2 仪器

TU-1900 双光束紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司；旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；电子分析天平：塞多利斯科学仪器有限公司。

2 方法与结果

2.1 葡萄糖对照品溶液的制备

精密称取葡萄糖对照品0.100 0 g，置100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，精密量取1 mL 置于100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容，摇匀，即得浓度为10 μg/mL的葡萄糖对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取金钗石斛药材粉末35.00 g，置圆烧瓶中，加石油醚（60 ℃～90 ℃）500 mL，加热回流提取l h，过滤，挥干溶剂，滤渣用体积分数为80%的乙醇500 mL 回流提取1 h。趁热过滤，挥干溶剂，滤渣加入蒸馏水500 mL 回流提取2 次，每次1 h，趁热过滤，减压浓缩至150 mL，用活性炭脱色，过滤，加入无水乙醇使溶液含醇体积分数为 ，静置，过滤，得金钗石斛粗多糖。将粗多糖溶液经Sevage 法脱蛋白。再次醇沉，沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，得多糖为白色粉末，取10 mg 用双蒸水稀释至100 mL 成供试品溶液。

2.3 测定波长的选择

根据2010 版《中国药典》一部附录VA 分光光度法在波长490 nm 处测对照品及供试品的吸光度，结果表明照品及供试品在此波长处都有最大吸收。

2.4 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mL，加蒸馏水使成2.0 mL，各加苯酚试剂1.0 mL，加入硫酸5.0 mL，置沸水浴中加热15 min，冷却至室温。另以蒸馏水作为空白对照，在波长490 nm 处测吸光度。以吸光度（A）为纵坐标，检测浓度（C）为横坐标，得标准曲线，回归方程为A＝0.006 7C+0.032（r＝0.995 8）。结果表明，葡萄糖检测浓度在1 μg/mL～10 μg/mL 范围内与吸光度呈良好线性关系。

2.5 稳定性试验

精密量取供试品0.2 mL，按标准曲线2.5 步骤操作，将同一份反应液间隔一定时间测定吸光度值。实验结果表明：样品在24 h 内稳定性良好，RSD=1.76%。

2.6 精密度实验

精密量取供试品0.2 mL，按标准曲线2.2.5 步骤操作，重复测定5 次，测定吸光度值。结果表明：精密度良好，RSD=1.84%。

2.7 重复性实验

精密量取供试品0.2 mL，5 份，按标准曲线2.5 步骤操作，测定吸光度值。结果表明重复性良好，RSD=1.65%。

3 赤水金钗石斛口服液制备工艺研究

3.1 提取工艺优化

根据单因数预实验结果及参考文献选定影响石斛多糖提取率的4 个因素：料液比（A）、提取时间（B）、提取温度（C）、提取次数（D），以石斛多糖提取率为指标，选用L9（34）正交进行试验，优选出最佳提取工艺流程。结果见表1。

通过以上结果得出正交试验优选出的方案：即赤水金钗石斛在料液比为1 ∶10（g/mL），浴加热80 ℃，提取3 h，提取3 次，提取液浓缩至10 mL，测定赤水金钗石斛多糖的含量，得到赤水金钗石斛多糖的平均含量为4.32%，RSD=0.35%（n=3），显示该方法稳定可行。

3.2 口服液的制备工艺考察

取赤水金钗石斛粉末40 g，根据最佳提取工艺条件，加400 mL 水，控制温度80 ℃，提取3 次，每次3 h滤过，合并滤液，浓缩得样品浸膏，平均分成4 份，分别加水至1 000 mL，混匀，分别煮沸0、10、20、30 min，放冷后冷藏48 h，离心滤过，灌装，灭菌。结果未热处理的出现浑浊，10 min 热处理的有少量沉淀，20、30 min 热处理的澄清。通过对灭菌后制剂中多糖含量进行测定，结果变化不大，说明多糖受温度影响不明显，热处理冷藏法可以提高制剂的澄明度。考虑到省时节能，降低成本，采用热处理20 min 配液较为合理。

表1 正交设计结果Table 1 Orthogonal experimental resnlts

4 结论

综上，金钗石斛口服液的制备工艺为：以水为溶剂，料液比为1 ∶10（g/mL），浴加热80 ℃，3 h，提取3次，浓缩得浸膏，加100 mL 蒸馏水，煮沸20 min 后放冷冷藏48 h，离心滤过，灌装，灭菌即得。取20 个处方量的同批次药材，分别按所选工艺进行试验，制得口服液样品，分别考察多糖含量及澄明度，均符合质量标准要求，说明该口服液制备工艺稳定、可行。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].2010年版.北京:中国医药科技出版社,2010:85-86

[2] 管志斌,李再林.珍稀名贵中药一金钗石斛[J].中国野生植物资源2002,21(4):36-37

[3] CHEN Xiao-Mei,XIAO Sheng-yuan,GUO Shun-xing.Dendrobium candidum and Dendrobium nobile comparison of chemical composition [J].Chinese Academy of medical Sciences Sinica,2006,28 (4):524

[4] Zhao yapping Y,Son Yong-OKYO,Kim S,et al.Antioxidant and antihyperglycemic at-tivity of polysaccharide isolated from DendrobiumchrysotoxumLindl.[J].JBiechem MolBiol,2007,40(5):670-677

[5] 舒莹,郭顺星,陈晓梅,等.金钗石斛化学成分的研究[J].中国药学杂志,2004,39(6):421-422

[6] 杨艳,徐应淑.川黔地区金钗石斛多糖的含量测定[J].中国药房2010,27(21)2552-2554