北方地区蛹虫草人工栽培技术研究初探1）

2013-01-26张卓然张珊珊曾健勇张国财

中国林副特产 2013年1期

张卓然，张珊珊，曾健勇，张国财

（东北林业大学林学院，哈尔滨 150040）

蛹虫草（Cordyceps militaris）又名北虫草、北冬虫夏草。属于子囊菌亚门（Ascomycotina），麦角菌科（Clavicipitaceae），虫草属（Cordyceps）。其主要化学成分和药理作用与冬虫夏草相似［1－2］，对哮喘及支气管疾病、抗肿瘤、免疫调节、增强肾衰竭病人的肾功能等方面都有很好的治疗效果［3－5］，是冬虫夏草最理想的代用品［6］。而蛹虫草在全世界的天然资源量较少，天然资源远不能满足大众需求。近年来，蛹虫草的人工栽培技术发展迅速［7］。目前，蛹虫草研究人员已在蛹虫草人工栽培、化学成分、药理、开发应用等方面做了广泛的研究，取得了一些成果［8］。然而在我国北方地区人工栽培蛹虫草未见报道。因此，本文通过对蛹虫草现有人工栽培方法的筛选，结合适宜北方培养的蛹虫草生长特性观察，得出适于北方地区栽培的原种菌丝培养、栽培种制作及罐装培养的条件。

1 生长特性

蛹虫草（Cordyceps militaris）形态特征：子座单生或数个一起从寄生蛹体的头部或节部长出，颜色为橘黄或橘红色，全长2～8cm，蛹体颜色为紫色，长约1.5～2cm［9］。在虫草的不同生长发育阶段都有最适温度、最低温度和最高温度的界限［10－11］。菌丝生长温度6～30℃，低于6℃极少生长，高于30℃停止生长，甚至死亡。最适生长温度为18～22℃［12－14］。

2 母种选择

蛹虫草（Cordyceps militaris）菌种：来自黑龙江省绥化市望奎县北虫草生产基地。

3 原种的制作

3.1 培养基配方

土豆200g／L，葡萄糖20g／L，蛋白胨3g／L，KH2PO42g／L，MgSO41g／L，VB10.05g／L，柠檬酸三铵1g／L，琼脂20g／L。

3.2 制作方法

马铃薯去皮洗净，切成1cm见方小块，沸水熬煮20min，过滤取汁。滤液中加入葡萄糖﹑琼脂等其他辅料，继续加热搅拌至药品完全溶解后用试管分装，每支试管装至容量的五分之一处即可，胶塞封口，121℃高压蒸汽灭菌20min，取出后斜置冷却。

在无菌环境下将母种接至斜面培养基中，避光，19℃条件下培养。至菌丝长满斜面给予散色光照，转色完成后可做原种，用于接种。

4 液体发酵

4.1 培养基制作及接种：

培养基成分：土豆200g／L，葡萄糖20g／L，蛋白胨3g／L，KH2PO42g／L，MgSO41g／L，VB10.05g／L，柠檬酸三铵1g／L。

培养基的制作过程同3.2（辅料中无琼脂），装瓶，每个锥形瓶内培养基为100mL，接种时在超净工作台内按无菌操作的要求。选用离最外围菌苔2～3cm的母种，从试管斜面中切取0.5cm×0.5cm左右的菌丝块1块，在酒精灯火焰区内快速放到锥形瓶液体培养基中。

4.2 培养过程

接种后置于22℃恒温培养箱中先避光静置培养1d，初步观察液体培养基有无污染及菌丝块是否萌发，再移至恒温摇床上振荡培养，将转速调到120r／min左右，在19℃下经5d震荡培养后可以看到直径0.5～2.0mm的菌丝球均匀布满透明的橙黄色的营养液。

5 栽培方法

5.1 培养基配方

小麦30g／罐，液体培养基50mL／罐。液体培养基成分：土豆200g／L，葡萄糖20g／L，蛋白胨10g／L，KH2PO42g／L，MgSO41g／L，VB10.05g／L，柠檬酸三铵1g。

5.2 接种

液体菌种处理：液体发酵所得的液体菌种应用无菌水稀释至其自身的4～5倍，摇匀，用于接种。

培养基灭菌：将用罐头瓶装好的小麦培养基置于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌40～60min。取出冷却后，移入接种室。灭菌后的培养基以上下表面湿度基本一致，麦粒之间具有一定的空隙，不粘稠成糊状，麦粒多开裂为优。

消毒：接种工具、菌种外壁、操作人员双手等，用75%酒精擦拭或浸沾消毒。接种前用优质气雾消毒剂或常规方法对接种室密闭消毒30min，即可穿戴消毒衣服进入接种室接种。

接种：当培养基冷却到30℃以下时，在超净工作台的无菌环境下接种。每瓶接种液体菌种5mL。接种时应从菌球和清液交界处吸取液体菌种，可避免各瓶接种量不均的情况。另外为了菌丝加快生长，迅速占领料面，可适当的增加接种量，并尽可能地将菌种均匀洒布料面。

5.3 培养过程

接种后栽培瓶应直立放置、避光培养1～2d，待菌丝萌发、定植后再上架培养，否则菌液及培养基会倒向一侧，导致出草不齐。发菌前期温度为22℃，空气相对湿度65%左右，避光培养；当培养基料面布满菌丝后，将温度提高到25℃，持续15～20d，菌丝就可吃透培养料，完成营养生长。当培养基料面菌丝浓密，菌丝穿透并长满培养基，气生菌丝表面出现一些小隆起时，表明菌丝生理成熟，此时需要增加光照，促进转色。转色温度控制在22℃为宜，空气相对75%左右，给予一定的散色光或用日光灯照射采光，保持良好的通气条件，继续培养5～7d，菌丝体由白色逐渐转为黄色或橘黄色。转色完成后原基形成前，用木片或其他能形成平面的器具刮去培养基表面的气生菌丝［15］。当菌丝转为橘黄色后，加大光照强度，转色时一般给予1H／d以上的光照刺激，同时进行昼夜温差刺激10℃左右，可将白天温度控制在20～22℃，晚上控制在10～12℃，相对湿度为75%，保持良好的通气条件，以刺激子实体原基的分化。一般10d左右培养基表面出现原基突起并转为橘黄色。出草是由小米粒状原基逐渐长为成熟草的过程。此期间是提高产量的关键期，应加强通风，补充新鲜空气，室内每天通风1次，前期1h／次，后期出草量大，呼吸增强，通风时间延长；保持室内温度在23℃；空气相对湿度提高至85%～90%。由于蛹虫草具有较强的趋光性，在子实体形成后，应根据生长情况，调整培养瓶与光源的相对方向，或调整室内光源方向，以保证子实体的正常生长形态，提高产量。