PCR法与培养法在检测解脲支原体中的两种方法比较

邱华琴 洪丽梅 林 萍

（解放军第184医院检验科，江西 鹰潭 335000）

PCR法与培养法在检测解脲支原体中的两种方法比较

邱华琴 洪丽梅 林 萍

（解放军第184医院检验科，江西 鹰潭 335000）

目的对PCR法与培养法在检测解脲支原体中的两种方法进行比较。方法选取了2011年1月至2012年6月期间，来自我院诊治的158份样本，并对其进行了PCR法和培养法测试比较，以对两种检测方法的敏感性及特异性进行比较。结果PCR法检出阳性率为70.3%；培养法检出阳性率为43.0%。经配对计数和χ2检验，PCR法的敏感性明显高于培养法（P＜0.05）。结论PCR较培养液法具有更高的敏感性，值得在实验条件较好的医疗机构进行推广应用。

PCR；培养法；解脲支原体

临床常见的慢性前列腺炎、非淋菌性尿道炎、阴道炎、附睾炎、宫颈炎、子宫内膜炎、不育等疾病都和解脲支原体（UU）有着紧密的联系。此外解脲支原体还会从母体垂直传染给胎儿，从而导致婴儿出现脑膜炎、皮下胀肿等疾病[1]。目前，临床上已将解脲支原体作为非淋菌性尿道炎的重要诊断指标之一。检测解脲支原体最传统的方式即是培养法，此外，为了适应临床诊断及研究发展的需求，PCR扩增法也被用于检测解脲支原体。本文选取了2011年1月至2012年6月期间，来自我院诊治的158份标本，并对其进行了PCR法和培养法测试比较，以对两种检测方法的敏感性及特异性进行比较。现报道如下。

1 资料与方法

样本来源是于2011年1月至2012年6月在我院就诊的158例泌尿科、性病专科和妇科患者，其中32例为男性，126例为女性；年龄为16～47岁。经确诊，上述患者具体病情为：12例为性病，55例为阴道炎，69例为盆腔炎，22例为前列腺炎。根据样本采集的相关指导标准，临床医师对每例患者各采集两份样本，分别进行PCR检测和培养检测。

2 试剂来源及仪器：

2.1 试剂

PCR测定试剂为中山大学达安基因股份有限公司提供，培养法所用试剂有珠海迪尔生物工程有限公司提供的支原体（Uu/Mh）分离培养药敏试剂盒。

2.2 仪器

DA7600扩增仪。

2.3 检测方法

PCR方法：首先把标本放进1.5mL的消毒离心管中，加入1mL无菌生理盐水，浸润10min，随后进行彻底的清洗，把棉拭子上的分泌物彻底洗于生理盐水内，将棉拭子挤干，丢弃。将所得溶液以12 000rpm离心5min，将上清液去除，在沉淀中加入50µL DNA提取液充分混匀，100℃恒温处理（10±1）min，12，000rpm离心5min，取2µL上清液加入含（UU）的Taq进行PCR反应。另分别取100µL阴阳性对照质控标准品，与等量提取液充分混合、恒温浴、离心及PCR反应等与上述操作相同。按对应顺序设置阴性质控品，阳性定量参考品以及样本。设置循环条件；：93℃→2min，93℃ 45s→55℃ 60s→10个循环，93℃ 30s→55℃ 45s→30个循环。保存文件，运行。反应结束后通过曲线分析直接得出标本的数值。

解脲支原体培养：将采集的标本拭子插入培养瓶，在靠近液面上方的瓶壁挤压旋转拭子数次，使拭子中样本渗入；若为精液、前列腺液标本，取200μL加入培养基中；若为中段尿，经2000转/分离心10min，取沉渣100μL加入培养基中。充分混匀接种标本中的培养基，取100μL加入检测卡的各孔中（除C-孔）。 各孔滴加2滴无菌矿物油，盖上检测卡盖，置35℃～37℃孵箱培养，在24h和48h分别观察结果。经48h培养，如果培养液颜色没有改变则为阴性，如果培养基颜色从黄色变成红色则为解脲支原体阳性。。

2 结 果

经检验，PCR法检出111例为阳性，47例为阴性，阳性率为70.3%；培养法检出68例为阳性，90例为阴性，阳性率为43.0%。在检测中，有18例样本经培养法检测显示阴性，PCR法检测结果为阳性；另有8例样本经PCR检测显示阴性，但是培养法检测为阳性。经配对计数和χ2检验，PCR法的敏感性明显高于培养法（P＜0.05）。

3 讨 论

解脲支原体检测方法有固体培养法、液体培养法和分子生物荧光定量PCR法，这些方法各有优缺点。固体培养法是直接通过培养分离出该病原体菌落，进行系统鉴定而得出结论，可谓金标准，但实验条件要求较高费时长，不适合常规检查[2]，目前检测该病原体主要是液体培养法和PCR法，液体培养法是利用解脲支原体中的脲酶能分解培养基中的尿素，使PH值上升使酚红指示剂由黄变为红色，而进行判断为解脲支原体阳性，此法操作简单而且可以同时做药敏试验。这点是定量PCR法无法比拟的。PCR法是直接检测病原体的核酸进行判断是否有该病原体存在，为目前比较理想的方法。且其特异性、敏感性、准确性较高而且检测时间短。解脲支原体培养基中包含酚红指示剂及尿素，因解脲支原体中的脲酶会分解尿素，生产NH4和CO2，使培养液趋向碱性，酚红指示剂从而变成为红色[2]。然而，泌尿系统和生殖道其它的微生物内也存在脲酶，可导致假阳性结果，特别是女性的支原体培养标本都是宫颈分泌物其本身就不同程度带有细菌，本文对8例经PCR检测显示阴性但培养法检测为阳性的标本进行了鉴定，造成该情况的原因可能是引起培养物颜色变化的因素未必皆为支原体，变形杆菌、肠杆菌、克雷伯氏菌及酵母菌等污染均可能导致出现假阳性。

综上所述，在对解脲支原体的检测中，PCR检测法具有敏感度及特异性较高、操作方便、检测周期短等优势，最重要的是通过PCR的测定可以给临床医师提供最直观的疗效评叛，然而此法对检测技术要求及实验条件有着较高的要求，如果实验室条件不足，则其检测结果也会受到一定的影响。因此，PCR较培养液法具有更高的敏感性，值得在实验条件较好的医疗机构进行推广应用。

[1] 周才丽,胡燕玲.荧光定量PCR法与培养法在检测解脲支原体中的比较[J].现代诊断与治疗,2011,22(2):107-108.

[2] 王玉珍,芦伟.培养法及PCR法用于解脲支原体检测结果的分析[J].医学创新研究,2006,8(3):108-109.

R446

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1671-8194（2013）16-0195-02