当前规模化猪场病毒性腹泻的防控策略

2013-01-23朱书梁何少华游秋花曹华斌

中国动物检疫 2013年6期

朱书梁，何少华，游秋花，朱菁，曹华斌

（1.江西农业大学动物科学技术学院，江西南昌 330045；2.福建圣农发展股份有限公司肉鸡事业部，福建南平 351400）

1 病原和流行病学

1.1 病原

1.1.1 猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus，TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）均为冠状病毒，在低温环境可长期存活，对光、乙醚和氯仿等敏感，可被福尔马林、氢氧化钠、含氯或碘消毒剂灭活。猪轮状病毒（RV）属于呼肠孤病毒科轮状病毒属，在环境中广泛存在而且相当稳定，耐乙醚、氯仿和酸碱，但对EDTA等促溶剂及氯化钙、硫氯酸钾、过醋酸、碘、酚等敏感。

1.1.2 猪博卡病毒（PBoV）是细小病毒科细小病毒亚科博卡病毒属成员，为无囊膜单股线状DNA，有5个型[1]。2009年瑞典研究人员从断奶仔猪多系统衰竭综合症的病猪分离到了该病毒。国内翟少伦等建立了检测猪博卡病毒的PCR方法，通过对191份疑似高热病病料的检测，发现PBoV阳性75份，阳性率为39.3%，表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行[2]。

1.1.3 猪肠道杯状病毒（Porcine Enteric Calicivirus，PECV）包括猪诺如病毒（NoV）和猪札如病毒（SaV）。最早于1980年在英国和美国的断奶仔猪及保育猪的腹泻粪便中发现[3]。

1.1.4 猪库布病毒（Porcine Kobu virus）是一种单股正链RNA病毒，属于微小RNA病毒科库布病毒属。最早由日本科学家在Hela细胞中发现，2008年匈牙利科学家最先在猪粪便中分离得到，2009年我国学者也在猪粪便中发现了库布病毒[4]。

1.1.5 猪博卡病毒、猪肠道杯状病毒和猪库布病毒由于发现较晚，尽管在病原学和流行病学等方面已经取得了不少成就，但我们仍然对其了解甚少，有待进一步研究。

1.2 流行病学

1.2.1 此类疾病均表现为急性、高度接触性传染病，以呕吐、水样性腹泻、脱水、体重迅速下降和新生仔猪大量死亡为特征。猪场的病毒性腹泻一般为几种病毒混合感染。

1.2.2 猪病毒性腹泻的季节性较强，主要发生在11月份至下年4月份之间，特别容易在寒冷、潮湿和卫生条件差的地方暴发。其病原在环境中长期存在，本病一旦流行很难彻底消除。

1.2.3 TGEV可感染不同日龄的猪，以2周龄内哺乳仔猪最易感染；PDEV能感染各日龄猪，以仔猪受害最为严重；RTV对各日龄的仔猪及产前3天至产后2周的母猪较易感染，但发病猪一般为13至39日龄的仔猪；

1.2.4 病猪和带毒猪是主要传染源，感染途径主要是消化道感染[5]。

2 症状及病变

2.1 症状

2.1.1 猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻

临床上很难区别这两种病，只是PED症状比TGE要轻一些。TGEV对各日龄猪均高度易感，新生仔猪感染后死亡率可达100%，潜伏期2～3天，中大猪感染后死亡率较低。PEDV潜伏期一周左右，但传播速度极快，数日内可波及全群。对2周龄内仔猪有高度致死性，中大猪群则相对危害程度较低，仅表现为消化道病变，经过2～3周的流行即停止。相对TGEV而言，PEDV的致死率较低。

2.1.2 猪轮状病毒

主要以呕吐、腹泻、脱水死亡为特征。症状轻重取决于发病猪日龄、免疫状态和环境条件，缺乏母源抗体保护的仔猪感染最为严重。多发生于2～6周龄的仔猪，以3周龄高发，随日龄增大而死亡率降低。初产母猪所产的仔猪对RV敏感度较高，潜伏期极短，往往数小时即可发病，出现呕吐、腹泻、排水样或糊状粪便，一般持续3～5天。做好防脱水工作，可降低死亡率[6]。

2.1.3 猪博卡病毒

猪博卡病毒可引发动物呼吸道与肠道感染，出现支气管炎、肺炎和慢性胃肠炎症状，以及引发流产、死胎甚至死亡。

2.1.4 猪肠道杯状病毒

NoV只感染成年猪，无明显临床症状；SaV可感染各年龄段的猪，断奶仔猪感染率最高，并引起腹泻。NoV和SaV不会同时感染同一头猪。

2.2 病变

TGE、PDE和RVI都是胃肠道疾病，主要通过消化道感染，靶细胞是肠绒毛上皮细胞，肠绒毛萎缩脱落，肠淋巴结水肿，导致病猪消化紊乱、脱水和酸中毒。

2.2.1 TGE的危害部位主要是胃和肠道，胃内有凝乳块，胃底部黏膜脱落，肠壁菲薄、半透明、充出血，肠道内容物稀薄如水，多呈黄绿色或灰白色。

2.2.2 PED侵害的主要部位是肠道，肠壁菲薄、半透明状，肠道内容物呈灰黄色液体，较TGE肠道内容物黏稠，肠道有气泡，肠管扩张，肠黏膜脱落。

2.2.3 RVI与PED、TGE的区别在于其病变一般仅限于肠道，在小肠后段表现类似于PED、TGE的病变。胃内也可见凝乳块，出血较少，大肠有类似于小肠的病变。

猪博卡病毒、猪肠道杯状病毒和猪库布病毒引发的病变与以上三种疾病类似，很难区分。

3 疾病诊断

3.1 临床诊断

3.1.1 如果腹泻发生于寒冷季节，且发病急、传染快、拉水样粪便并伴有呕吐，所有猪发病、日龄越小死亡率越高，病变主要在胃肠道，抗生素等治疗无效，基本可确定为病毒性腹泻。

3.1.2 一周龄以下不发病、2～4周龄发病的一般为轮状病毒感染，一周龄内发病死亡的往往是TGE或PED。

3.1.3 如果用显微镜可观察到绒毛萎缩，则可基本确定是病毒性腹泻；用pH试纸检测粪便，TGE和RVI腹泻的粪便呈酸性，细菌性腹泻的粪便一般呈碱性。

3.2 实验室诊断

3.2.1 采集病猪的小肠或粪便，取500 mg进行匀浆处理，匀浆液用1 mL PBS液稀释混匀，-30 ℃反复冻融3次，置-30 ℃冰箱保存备用；

3.2.2 根据GenBank上病毒序列，使用引物设计软件，设计PEDV、TGEV、RV、PRoV、PECV、Kobuvirus的特异性引物，引物由生物公司合成；

3.2.3 提取RNA、DNA，反转录，PCR，检测RT-PCR和PCR的产物；

3.2.4 分析RT-PCR和PCR的产物序列，根据检测的阳性结果即可确定病原[7]。

4 治疗及免疫预防

4.1 治疗

由上述病毒引起的腹泻目前尚无特效的治疗方法。对于正在发病的仔猪，应在预防细菌性继发感染，纠正酸中毒、电解质不平衡，防止母猪奶水质量下降的前提下，可选用高免血清进行肌注。若同时注射猪用干扰素，对病毒性腹泻也有一定的预防和治疗作用。

4.1.1 高免血清的制备

①选取本猪场60 kg以上健康的育肥猪或淘汰的健康老母猪，注射疫苗，如TGE-PDE二联苗，在猪只的后海穴注射，15天后用再次肌肉注射；②再隔15～20天，对猪进行检查，对无任何疾病者，凌晨空腹宰杀，无菌放血。注意器械和容器的消毒；③待血液自然凝固，取血清离心。取上清液分装至500 mL的洁净生理盐水瓶中；④每瓶血清加入160万单位的青霉素钠盐和100万单位的硫酸链霉素，摇匀，压盖密封。置4℃冰箱中保存，待用[8]。

4.1.2 高免血清的使用

肌肉注射：小猪2 mL，中大猪3-5 mL，母猪8 mL。隔5天再注射一次。对于脱水和酸中毒的病猪，灌服或自由饮用口服补液盐是必需的辅助治疗方法。

4.2 免疫预防

免疫程序的制定要考虑猪只年龄、母源抗体水平、疫苗的种类、免疫途径等因素，特别是目前混合感染率逐年升高，一定要注意联合及多重免疫。

4.2.1 目前我国研制的猪传染性胃肠炎与轮状病毒弱毒疫苗，对3日龄仔猪主动免疫效果很好，给母猪分娩前五周至六周和一周各肌注或鼻内接种一次后，则对3日龄哺乳仔猪的被动免疫保护率达95%以上；在每年秋天来临后，对新生仔猪吃乳前肌注疫苗（至少30 分钟后才能吃初乳），仔猪断奶前7～10天，架子猪、育肥猪和公猪肌肉注射疫苗一次即可。

4.2.2 对于流行性腹泻，可应用猪流行性腹泻氢氧化铝灭活苗，对妊娠母猪于产仔前20～30天接种4 mL，25 kg以下的仔猪接种1 mL，25～50 kg育成猪接种2 mL，50 kg以上成猪接种4 mL，接种部位为后海穴，接种后15天产生免疫力。

4.2.3 自家苗是一种针对性极强的包含有病毒、细菌等多种病原体的多联苗，能迅速控制和预防本场主要流行病。所以在不确定是何种病原引起腹泻的情况下，可选用自家苗免疫接种。

自家苗的制备方法：①采病料：取本场患病新死亡的猪只，用解剖刀剖开腹部皮肤，并向两边剥离，充分暴露腹肌，依次剪破腹肌和腹膜，取出小肠。剪下肠系膜淋巴结，同时取肺脏、脾脏、脑等诸多器官；②制作：将采集的病料称重，加适量生理盐水，用消毒好的绞肉机，反复绞碎成浆，双层无菌纱布过滤，滤液再用生理盐水稀释，使病料与液体比为1:15，最后加入甲醛，使甲醛纯品在溶液中含量达到4%。摇均后，置37 ℃条件下灭活。灭活期间，每4～6 h摇动一次，24 h后灭活完毕，取出置于4 ℃下，保存待用；③使用方法：先用自家苗注射一两窝小猪，如果没有发生过敏或注部位发炎等反应，说明自家苗制作成功。使用量：母猪产前4周注射4 mL/头，乳猪7～9日龄肌注1 mL，15～18日龄注射2 mL；小猪（30～35日龄）3 mL/头。

5 综合防治

5.1 强化饲养管理，减少诱因

5.1.1 加强种猪尤其是后备猪的饲养管理。注意畜舍的保温与通风。强化小种猪运输管理。要尽量减少运输中的应激反应，把小种猪隔离观察一段时间再调入生产线，注意栏舍的消毒。

5.1.2 做好畜舍湿度的控制。料槽水不要加得太满；不要把栏舍冲得太湿；临产猪只消毒适当，不要太湿。做好防寒保暖工作。长时间的寒冷应激是病毒性腹泻的主要诱因。可使用屋中屋保温提高猪舍室内温度；防止贼风。

5.1.3 保持种猪合理膘情。膘情合理，健康程度高的种猪群，不仅抗应激抗病能力强，即使发生腹泻，其损失也远远小于亚健康的猪群[9]。

5.2 积极应对病毒性腹泻

5.2.1 发病初期实行隔离消毒措施

5.2.1.1 要高度重视全场的防疫隔离工作，防止病原扩散。（1）加强主干道的卫生清洁和消毒；（2）避免扫把等设备和药物的交叉使用，防止污染；（3）注意死胎和胎衣的收集，特别是因病毒性腹泻流产的胎物；（4）员工要勤换衣物、勤洗澡；（5）规范夜班人员的行为。

5.2.1.2 发病猪只的护理和处置：（1）腹泻粪便直接使用生石灰掩盖后清扫；（2）腹泻栏面要固定扫把清理，扫把每天要用消毒水浸泡1次；（3）确保发病猪舍内温度适合；（4）严格控制栏舍的湿度，可用生石灰等处理；（5）做好抗继发感染工作，针对性添加一些抗生素药物，如阿莫西林、庆大霉素、新霉素、氟哌酸等药物饮水，防止细菌继发感染。

5.2.2 怀孕舍扩散后要根据猪场实际情况考虑粪便返饲

5.2.2.1 粪便返饲流程：（1）一次性收取新鲜的水样腹泻粪样5～10 kg（未采取消毒措施）；（2）简单配制生理盐水：4 kg水中加36 g食盐；（3）将粪便加入生理盐水中搅拌后用3层纱布过滤；（4）滤液加入青链霉素各50 g左右；（5）搅匀静止15～20分钟；（6）饲喂时喷洒在未发病的猪只饲料中，每头母猪200 g左右。

5.2.2.2 返饲后加强种猪群护理：全群加糖盐水连用3天，或使用补液盐+Vc+新霉素连用3天，2～3次/天，5～10 mL/次/头。糖盐水配方：2 kg葡萄糖+0.5 kg食盐+0.25 kg小苏打+100 kg水。补液盐配方：1 kg温开水+3.5 g食盐+2.5 g小苏打+1.5 g氯化钾+20 g葡萄糖。

5.2.2.3 注意事项：（1）返饲结束后，猪舍内外进行全面的消毒。（2）返饲后注意记录怀孕猪群的采食情况和腹泻情况，采食下降或腹泻的种猪应占返饲全群的70%以上，达不到比例的则应对无症状的猪强化返饲一次；（3）返饲注意做好操作人员的防疫隔离，要规范种猪的调动[10]。

5.2.3 产房仔猪大量死亡，综合考虑使用病料或内容物返饲

5.2.3.1 根据种猪发病情况和仔猪死亡情况确定需要返饲的怀孕舍或临产单元，母猪怀孕50～110天后以栋为单位进行返饲，返饲前先尽量让一周内分娩的母猪进入产房。临产单元必要时才进行返饲，在产单元和产后单元原则上不返饲。

5.2.3.2 取腹泻严重仔猪的胃肠内容物捣碎兑换返饲液（必要时可连同胃肠一起捣碎，用纱布过滤），每1 000 mL加入青霉素链霉素各一瓶搅匀后，将得到的溶液加入母猪饲料中投给母猪喂食。每头仔猪内容物（病料）可返饲15～30头种猪。在生产线就地解剖仔猪取病料或胃肠内容物，快速制备滤液，在1 h内完成返饲。