高效液相色谱法测定肾茶胶囊中总黄酮的含量

路更 李芳 王立强 侯志勇 宋伟杰

[摘要] 目的 研究高效液相色谱法测定肾茶胶囊中总黄酮的含量。 方法 通过高效液相色谱法，对线性关系、重复行、精密度、回收率等考察进行考察，并进行多次验证。 结果 芦丁标准品在8.03～48.18μg/mL范围内具有良好的线性关系（r²=0.9995）；该方法精密度良好，RSD<2%；重复性实验结果良好，RSD=0.98；平均回收率在97.0%～103.0%之间，RSD<2%，准确性良好。 结论 高效液相色谱法测定肾茶胶囊中总黄酮的含量精确科学，能很好地检测和控制肾总黄酮的质量。

[关键词] 肾茶胶囊；总黄酮；含量测定

[中图分类号] R917???[文献标识码] B???[文章编号] 2095-0616（2012）21-93-03

Content determinantion of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC

LU?Geng1??LI?Fang1??WANG?Liqiang2??HOU?Zhiyong1??SONG?Weijie1

1.No.211 Hospital of PLA.HeiLongjiang Harbin 150080；2.Huaqiao University of Molecular Medicine Research Institute，Quanzhou 362021，China

[Abstract] Objective To research content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC. Methods A HPLC method is used for observing the linear relationship，repeat line，precision and recovery， and the method is verified. Results The standard rutin is in good linearity in range of 8.03-48.18 mg/mL（r2=0.9995）；This method has good precision（RSD<2%），and also has good repetitive experimental results （RSD=0.98）；The average recoveries are between 97.0% and 103.0%，RSD<2%，which has good accuracy. Conclusion Content determination of total flavonoids in orthosiphon capsules by HPLC is scientific and feasible，which can be in good control and test the flavonoids in orthosiphon capsules.

[Key words] Orthosiphon capsules；Flavonoid；Content determination

肾茶味苦、凉，为唇形科肾茶属植物，主要分布于福建、台湾、海南、广西、广东和云南各省。民间用于治疗急、慢性肾炎、膀胱炎、尿路结石、胆结石、风湿性关节炎等[1-2]。本品为肾茶的干燥茎叶。主要含有黄酮类化合物、甾体皂甙类、蒽醌类甙类、氨基酸、多肽、蛋白质、有机酸、糖类、多糖类、多酚类化合物等。我院对其质量进行了系统研究，现报道如下。

1?材料与方法

1.1?样品和材料

肾茶胶囊：单位自制，批号：20040510，规格：0.3 g/粒。标准品：芦丁（购自中国药品生物制品检定所，批号：10080-200705）。

1.2?实验仪器

天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司，型号BP211D；高效液相色谱仪：日本岛津，型号2010；紫外-可见分光光度仪：日本岛津，型号uv-2100。

1.3?测定方法

1.3.1?对照品溶液的制备?芦丁对照品120℃减压干燥至恒重后，精密称定50 mg，置于25 mL量瓶中，加适量甲醇置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀备用。精密量取溶液10 mL，置于100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每毫升中含无水芦丁0.2 mg）。

1.3.2?标准曲线的制备?精密量取对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分别置于25 mL量瓶中，各加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应的溶液为空白，照分光光度法，在500 nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1.3.3?测定法?取装量差异项下的本品内容物适量，研细，从中称取约0.25 g，精密称定后，置25 mL锥形瓶中，精密称定，加甲醇25 mL超声处理（功率250 W，频率20 kHz）30 min，放冷，精密称定，补足重量，摇匀。精密量取10 mL，置100 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密量取3 mL，置25 mL量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6 mL”起依法测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁的浓度（μg/mL），计算，即得[3-4]。

本品每粒含总黄酮以芦丁（C₂₇H₃₀O₁₆）计，不得少于45.0 mg。

1.3.4?吸收光谱的测定、光谱一致性检测?精密吸取芦丁对照品溶液、供试品溶液各3 mL，分别置于25 mL量瓶中，照分光光度法，在200～750 nm波长范围内测定吸收光谱。结果芦丁对照品与供试品光谱可见光区吸收图谱基本一致，并且在500 nm波长处有最大吸收。

2?结果

2.1?线性关系的考察

精密吸取芦丁对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL（相当于芦丁8.03、16.06、24.09、32.12、40.15、48.18μg/mL），按上述测定法测定吸收度。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程。回归方程为： y=0.0111x+0.0181，r²=0.999 5。表明芦丁在8.03～48.18μg/mL范围内具有良好的线性关系。见表1。

2.2?精密度试验

按“3.3”项下测定法对对照品溶液重复测定6次，计算RSD，结果见表2。试验结果表明，RSD<2%，方法精密度良好，符合测定要求。

2.3?重复性试验

按供试品测定方法测定，对同一批样品（090816）重复测定5次。见表3。

2.4?加样回收率试验

精密称取已知含量的同一批号（批号为090816，含量为250.51 mg/g）的样品125 mg，分别精密加入芦丁对照品各27.5 mg，按正文供试品溶液的制备方法制备及上述光谱条件测定，测定并计算回收率，平均回收率在97.0%～103.0%之间，RSD<2%（n=6），方法准确性良好。见表4。

2.5?含量测定

按上述方法测定各批样品的含量。根据3样品测定结果，暂定本品含总黄酮不得少于45.0 mg/粒。见表5。

3?结论

肾茶为唇形科肾茶属植物，又称猫须草，其主要活性成分有迷迭香酸、熊果酸和肌醇等。傣族医书记载肾茶用以治疗小便热、涩、疼痛、腰痛等泌尿系统疾病，疗效确切。为使肾茶这一民族传统药物更好地用于临床，本课题开发了肾茶有效部位制剂“肾茶胶囊”，并对其药效学、药理学和毒理学进行了系统研究。

通过针对肾茶胶囊中总黄酮的系统研究，包括线性关系考察、精密度考察、回收率考察、重复性考察等，证实本测定方法科学可行，完全能控制和检测肾茶胶囊中总黄酮的质量。

[参考文献]

[1] Hsu CL，Hong BH，Yu YS.Antioxidant and anti-inflammatory effects of orthosiphon aristatus and its bioactive compounds[J].J Agric Food Chem，2010，58（4）：2150-2156.

[2] 喻陆，吴凡.欣肾胶囊延缓大鼠慢性肾功能衰竭实验研究[J].中国中药杂志，2006，31（24）：2058-2060.

[3] Awale S，Tezuka Y，BanskotaAH，et al.Inhibitionof NO production by highly-oxygenated diterpenes oforthosiphon stamineus and their structure-activity relationship[J].Biol Pharm Bull，2003，26（4）：468-473.

[4] Awale S，Tezuka Y，Banskota AH，et al.Highly-oxygenated isopimarane-type diterpenes from orthosiphonstamineus of Indonesia and their nitric oxide inhibitory activity[J].Chem Pharm Bull（Tokyo），2003，51（3）： 268-275.

（收稿日期：2012-06-21）