HPLC测定可达灵片中脱氢延胡索碱的含量
2012-12-26彭艳红李嫦玲刘新义
彭艳红,李嫦玲,刘新义
(1.益阳市第一中医医院,湖南 益阳 413000;2.中南大学湘雅二医院,湖南 长沙 410011)
HPLC测定可达灵片中脱氢延胡索碱的含量
彭艳红1,李嫦玲1,刘新义2
(1.益阳市第一中医医院,湖南 益阳 413000;2.中南大学湘雅二医院,湖南 长沙 410011)
目的 建立高效液相色谱法测定可达灵片中脱氢延胡索碱含量的方法。方法 采用Aglient 1200高效液相色谱仪;Diamonsil C18柱 (250mm×4.6mm,5μm); 流动相为 0.05moL/L 磷酸盐溶液-乙腈 (68∶32), 流速为1.0 ml/min;检测波长为340 nm。结果 脱氢延胡索碱在0.1~1μg进样量内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9997),平均回收率为99.3%,RSD为1.0%。结论 本方法简便、可靠、重复性好,可用于可达灵片的质量控制。
可达灵片;脱氢延胡索碱;高效液相色谱法
可达灵片为延胡索的中药制剂,主要药理成分为脱氢延胡索碱与延胡索乙素,临床上用于冠心病、心绞痛和急性心肌梗死等疾病的治疗[1]。现代药理研究结果表明脱氢延胡索碱可明显扩张冠状动脉、增加冠脉血流,从而改善心肌缺血状态;而延胡索乙素具有镇痛、镇静作用[2-3]。目前报道可达灵片中脱氢延胡索碱的含量测定方法仅见纸色谱法,存在重复性差、精密度低等缺点[4]。为了更好的控制该制剂质量,本文选择脱氢延胡索碱为指标,采用高效液相色谱法(HPLC)对其进行含量测定。
1 仪器与试药
1.1 仪器
Aglient 1200高效液相色谱仪 (美国安捷伦科技有限公司,配备G1313A自动进样器和G1315B二极管阵列检测器,G1311A四元梯度泵,G1316A柱温箱,Aglient色谱工作站);FC204型电子分析天平(西安精大检测设备有限公司);HH-24电热恒温水浴锅(湖南东大科学仪器设备有限公司)。
1.2 试药
可达灵片(浙江康恩贝制药股份有限公司生产,批号:20111215,20111217,20111219,20111221,20111223);脱氢延胡索碱对照品(中南大学药学院天然药化实验室自制,湖南省食品药品检验研究院标化,纯度99.2%);甲醇、乙腈为色谱纯,乙醇、磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺等试剂均为分析纯,水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[5-6]
色谱柱:Diamonsil C18柱 (250mm×4.6mm,5μm);流动相:0.05moL/L 磷酸盐溶液(0.05moL/L磷酸二氢钾溶液用0.05moL/L磷酸调节pH 3.0)-乙腈(68∶32),流速:1.0 mL/min,检测波长:340 nm;柱温:25 ℃;进样量:10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品20片,精密称定,研细,精密称取药粉约1 g,置100 mL棕色量瓶中,加0.1moL/L盐酸甲醇溶液至相应刻度,称重,回流提取1 h,取出,冷却后称重,再用0.1moL/L盐酸甲醇溶液补足损失的溶剂,摇匀,用0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。
2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取脱氢延胡索碱对照品10.2mg置100 mL棕色量瓶中,加甲醇溶解,定容至刻度,即得。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 按处方配比称取除延胡索以外的药用辅料,按制备工艺制成缺延胡索的阴性样品,同法制备缺延胡索的阴性样品溶液。
2.2.4 系统适应性试验 分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μL,注入高效液相色谱仪,按“2.1色谱条件”进行分析。按上述色谱条件进样测定,记录色谱图,结果脱氢延胡索碱 (t=7.35min)与其他组分别达到了基线分离,峰形对称,且阴性无干扰,专属性良好,见图1。
2.3 色谱条件[5-6]
色谱柱:Diamonsil C18柱 (250mm×4.6mm,5μm);流动相:0.05moL/L 磷酸盐溶液(0.05moL/L磷酸二氢钾溶液用0.05moL/L磷酸调节pH 3.0)-乙腈(68∶32),流速:1.0 mL/min,检测波长:340 nm;柱温:25 ℃;进样量:10 μL。在此色谱条件下,记录供试品溶液和对照品溶液色谱图(见图1),以脱氢延胡索碱计算理论板数应不低于3000,分离度大于1.5,峰形对称。
图1 脱氢延胡索碱对照品及可达灵片样品HPLC图谱
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL,分别置 10 mL 棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,进样10 μL,注入液相色谱仪,记录脱氢延胡索碱峰面积。以进样量(X)对峰面积(Y)作图,得到标准曲线。回归方程为:
表明脱氢延胡索碱在进样量0.1~1 μg范围内的线性关系良好。
2.4.2 精密度试验 精密吸取稀释2倍的对照品溶液10 μL,连续进样6次。结果脱氢延胡索碱峰面积的RSD为0.8%(n=6),表明该仪器的精密度良好。
2.4.3 稳定性试验 取同一份供试品溶液,于室温放置 2、4、8、12、16、18 h 后进样,测定脱氢延胡索碱峰面积,RSD为1.3%,结果表明供试品溶液在18 h内基本稳定。
2.4.4 重复性试验 取同一批号(20111219)可达灵片药粉5份,按“2.1”项下方法制备供试品溶液,进样,测定脱氢延胡索碱峰面积,并计算样品平均含量为4.82mg/g,RSD为1.7%(n=5),表明该方法重复性较好。
2.4.5 回收率试验 取同一批号(20111219)已知含量的可达灵片(脱氢延胡索碱含量为4.82mg/g)粉末约0.25 g,精密称定,平行5份,置50 mL棕色量瓶中,各份分别精密加入对照品溶液(脱氢延胡索碱浓度为0.102mg/mL)10 mL,继续添加0.1moL/L盐酸甲醇溶液至相应刻度,其余同“2.2.1供试品溶液的制备”,进样,测定脱氢延胡索碱峰面积,计算回收率,结果如表1。脱氢延胡索碱平均回收率为99.3%和 RSD 为 1.0%(n=5)。
表1 加样回收率试验 (n=5)
2.5 样品的含量测定
精密称取5批可达灵片样品粉末约1 g(每批平行两份),按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液,以上述色谱条件进行含量测定,结果见表2,批间平均含量为2.45mg/片。
表2 样品含量测定 (n=5)
3 讨论
在实验过程中,笔者曾比较过用乙醇、50%乙醇、甲醇、50%甲醇和0.1moL/L盐酸甲醇溶液等5种溶剂进行样品的回流提取,结果发现以0.1mol/L盐酸甲醇溶液提取脱氢延胡索碱的含量最高,故选择该溶液作为提取溶剂。
脱氢延胡索碱为生物碱成分,笔者曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水-三乙胺、甲醇-乙腈-磷酸水系列流动相,结果该成分均存在严重的拖尾现象。本研究参照文献报道[5,7],采用乙腈-0.05moL/L磷酸盐溶液 (0.05moL/L磷酸二氢钾溶液用0.05moL/L磷酸调节 pH 3.0)(32∶68)作为流动相,结果脱氢延胡索碱峰型对称,分离度高,保留时间短,且样品也比较稳定,因此被采用。
试验结果表明,本研究建立的HPLC测定脱氢延胡索碱含量,具有样品处理简单,测定结果可靠,可用于可达灵片的质量控制。
[1]王五保,吉信宾,徐玉欣,等.可达灵片治疗不稳定性心绞痛42例临床观察[J].河南职工医学晚学报,2011,23(4):417-418.
[2]刘骏鸿.可达灵片治疗冠心病心绞痛疗效观察[J].现代中西医结合杂志,2005,14(24):3246.
[3]李绍敏.可达灵片治疗冠心病心绞痛疗效分析[J].浙江中西医结合杂志,2001,11(4):226-227.
[4]包丽霞,包家范.纸色谱法测定可达灵片脱氢延胡索碱含量[J].实用中医药杂志,1999,15(12):64.
[5]姜舜尧.高效液相色谱法测定元胡止痛片中脱氢延胡索碱的含量[J].中国中药杂志,2000,25(8):479-481.
[6]商小金,钱俊青,郭 辉.响应面法优化延胡索生物碱乙醇提取工艺研究[J].林业化学与工业,2010,30(2):32-36.
[7]陈峰阳,叶益萍,李晓誉,等.HPLC测定元胡药材中脱氢延胡索碱的含量[J].中国现代应用药学杂志,2009,26(1):58-60.
Determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC
PENG Yan-hong1,LI Chang-ling1,LIU Xin-yi2
(1.First Traditional Chinese Medicine Hospital of Yiyang,Hunan 413000,China;2.Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,Hunan 410013,China)
Kedaling Tablets; dehydrocorydaline;HPLC
R284.2
B
10.3969/j.issn.1674-070X.2012.09.009.037.03
〔Absrract〕Objective To establish a method for the determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC.Methods Aglient 1200 HPLC with Diamonsil C18column(4.6mm×250mm, 5μm)was used,the mobile phase was 0.05moL/L phosphates-acetonitrile(68:32)(v/v),the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 340 nm.Results Dehydrocorydaline showed a good linear relationship with peak area integral value within 0.1~1.0 μg(r=0.9997).The average recovery was 99.3%,and RSD was 1.0%.Conclusion The method was simple, reliable and reproducible for the quality control of Kedaling Tablets.
2012-06-12
彭艳红(1970-),女,湖南益阳人,副主任药师,主要从事药事管理与中药的研究与检验。
(本文编辑 杨 瑛)