上海市静安区、闸北区人群牙周感染厌氧菌群分布及耐药性研究

常青 何俊霖 俞立英 冯希平 胡付品

（1.复旦大学附属华山医院口腔科，上海 200040；2.上海交通大学附属第九人民医院口腔预防科，上海 200011；3.复旦大学附属华山医院抗生素研究所，上海 200040）

上海市静安区、闸北区人群牙周感染厌氧菌群分布及耐药性研究

常青1何俊霖1俞立英1冯希平2胡付品3

（1.复旦大学附属华山医院口腔科，上海 200040；2.上海交通大学附属第九人民医院口腔预防科，上海 200011；3.复旦大学附属华山医院抗生素研究所，上海 200040）

目的:调查上海市静安区、闸北区牙周脓肿患者的口腔厌氧菌群分布特点及耐药性。方法:选取2008年3月—2010年12月复旦大学附属华山医院口腔科门诊患者中牙周脓肿患者251例，其中135例患者来自静安区（静安区组），116例患者来自闸北区（闸北区组）。取患者脓液进行厌氧菌培养鉴定及体外药敏实验，药敏试验采用琼脂稀释法。结果:静安区组厌氧菌检出率60.0%（81/135），以产黑色素普雷沃菌最多，占50.4%（68/135）；闸北区组厌氧菌检出率51.7%（60/116），以产黑色素普雷沃菌最多，占22.4%（26/116）。药敏试验显示，静安区组厌氧菌株对甲硝唑耐药率为24.5%，而闸北区组为8.3%，2组间有显著差异（P＜0.05）。结论:产黑色素普雷沃菌是牙周脓肿患者厌氧菌群中的优势菌；近年来厌氧菌对甲硝唑耐药性有所增加，且不同地区耐药谱不同。

牙周脓肿； 厌氧菌； 药敏试验

口腔是微生物赖以生存的环境。牙周脓肿是由多种厌氧菌混合感染引起的急性炎性反应性疾病，亦是导致牙周炎恶化的主要因素之一。牙周脓肿的主要治疗方法是脓液引流，辅以必要的抗生素疗法［1］。近年来，由于抗菌药物的滥用，使得厌氧菌耐药性逐年增高，已出现耐甲硝唑菌株［2］。为此，有必要对不同地区牙周脓肿患者厌氧菌群的分布及耐药性进行分析研究，为临床合理应用抗生素提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象与标本来源

选取2008年3月—2010年12月在复旦大学附属华山医院口腔科门诊就诊的牙周脓肿患者251例。251例患者中135例来自静安区（静安区组），其中男性72例，女性63例；年龄30～64岁，平均年龄45岁。其余116例患者来自闸北区（闸北区组），其中男性79例，女性37例；年龄30～78岁，平均年龄62岁。研究对象纳入标准:（1）3个月内未接受过任何牙周病治疗；（2）3个月内未服用抗生素。

1.2 观察指标

记录取样位点临床指标，包括:附着丧失（attachment lose，AL）、牙周袋深度（periodontal depth，PD）、牙龈出血指数（gingival bleeding index，BI）、松动度（loose degree，LD）。

1.3 实验材料

（1）培养基:厌氧琼脂 Wilkins－Chalgren为英国OXOID公司产品；（2）仪器与试剂:标本运输管为意大利COPAN公司产品；厌氧产气袋、厌氧菌鉴定API 20A条均为法国生物梅里埃公司产品；（3）抗菌药物:甲硝唑、头孢美唑、头孢西丁、亚胺培南、克林霉素和氯霉素；（4）质控菌株:脆弱拟杆菌标准菌株。

1.4 标本采集

患者用普通水漱口后，医师用无菌刮匙去除患者龈上菌斑，隔湿，消毒牙周脓肿术区，用无菌刀片于脓肿波动明显的最低位切开，以无菌棉拭子沾取脓血，立即置入输送培养基中送检［3］。

1.5 厌氧菌的培养与鉴定

标本培养基在0.5 h内接种于厌氧血平板中。所有标本均同时接种厌氧和需氧血琼脂平板，37℃孵育48～72 h后观察菌落，分离纯化并做耐氧试验（厌氧环境的气体条件为5%CO2、10%H2、85%N2）。证实为专性厌氧菌后，分离细菌并经涂片、革兰染色镜检和触酶试验后，用API 20A厌氧菌鉴定条鉴定。

1.6 药敏试验

按美国临床实验室标准化委员会标准（National Committee of Clinical Laboratory Standard，NCCLS），采用琼脂对倍稀释法［4］，测定抗菌药物对厌氧菌的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC），受试菌菌液稀释至107CFU/m L后用多点接种仪将厌氧菌接种于含不同抗菌药物浓度的琼脂上（104CFU/点），实验同时设置质控菌株对照和不加抗生素的正常生长对照。37℃厌氧培养48 h后阅读结果。以50%和90%同属厌氧菌株生长受抑制的最低抗生素浓度分别为该药的50%抑菌浓度（MIC50）和90%抑菌浓度（MIC90）。判断标准按美国临床实验室标准化研究所（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）2008年版文件标准。

1.7 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件进行数据分析。数据以n（%）表示，组间比较采用χ2检验或Fisher’s确切概率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 厌氧菌种类

2组人群厌氧菌种类比较见表1。

表1 上海市两个区域牙周脓肿患者口腔厌氧菌种类比较［n（%）］

2.2 药敏试验

2组口腔厌氧菌群抗菌药物药敏试验结果比较见表2和表3。2组厌氧菌对甲硝唑、克林霉素和氯霉素的耐药率差异均有统计学意义（P＜0.05）。

表2 上海市静安区牙周脓肿患者口腔厌氧菌群抗菌药物药敏试验结果

表3 上海市闸北区牙周脓肿患者口腔厌氧菌群抗菌药物药敏试验结果

3 讨 论

牙周脓肿是牙周炎发展到晚期的并发症。Salari等［5］对牙周细菌学的研究发现，牙周袋内有400多种细菌，但只有少数细菌为牙周致病菌，其中伴放线放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、生痰二氧化碳嗜纤维菌、齿蚀拟杆菌、中间普雷沃菌等厌氧菌与慢性牙周炎发生有关。几种细菌通过单独或协同作用，引发牙周组织的破坏［6］。另有学者［7］通过长期研究提出，具核梭杆菌、伴放线放线杆菌及产黑素普雷沃菌等是牙周炎的主要致病菌。密螺旋体和牙龈卟啉单胞菌在牙周脓肿发病过程中也起着重要作用［8］。本研究结果显示，产黑色素普雷沃菌是上海市静安区和闸北区牙周脓肿患者厌氧菌群中的优势菌。其他菌种没有表现出优势性，可能是由采样部位与培养条件的差异所致，国内外学者多取深牙周袋内菌群为研究对象，而本实验选取的研究对象为牙周脓血液。

甲硝唑作为口腔科常用药物，可通过口服或局部粘膜吸收，疗效显著，但近年来随着抗生素的滥用与细菌变异度的提高，其耐药性呈上升趋势。有研究［9］报道，脆弱拟杆菌群对甲硝唑耐药的耐药机制与菌株中含有nim和cfiA有关。nim是编码硝基咪唑还原酶的一类基因，它可以将4/5硝基咪唑转换还原为4/5氨基咪唑，从而抵抗亚硝基类药物的抗菌作用［10］。cfiA是编码金属β－内酰胺酶的基因。另有研究［2］证实，产黑普雷沃菌株中约54.1%对β－内酰胺类药物耐药，接近22%对克林霉素耐药，不到6%的菌株对甲硝唑耐药，后者数值远低于本研究中静安区组结果。

Van Winkeihoff等［11］发现，在荷兰和西班牙牙周病患者中所分离的牙周致病菌存在着耐药性差异。西班牙人群中，较高数量的具核梭杆菌菌株对青霉素、阿莫西林和甲硝唑耐药，中间普雷沃菌对四环素和阿莫西林耐药较多。伴放线放线杆菌对阿莫西林和阿奇霉素耐药较多。该研究提示，耐药菌株的分布存在着人种和地域差异。本研究中，静安区组和闸北区组的厌氧菌株对甲硝唑耐药率有显著差异，亦说明不同地区和不同医院由于人群年龄结构比例、文化差异、用药习惯的原因，导致厌氧菌耐药谱不同，所以临床经验用药时须根据本地区和本实验室的药敏谱选药。

本研究药敏结果显示，所有厌氧菌对亚胺培南100%敏感；对氯霉素、头孢西丁和头孢美唑的敏感率亦较高，这几类均属强效抗生素，但因不良反应多或药费偏高，在口腔科较少应用。

［1］曹采方，吴亚菲，吴织芬，等.牙周病学第2版［M］北京:人民卫生出版社，2003:146－148.

［2］Maestre JR，Bascones A，Sánchez P，et al.Odontogenic bacteria in periodontal disease and resistance patterns to common antibiotics used as treatment and prophylaxis in odontology in Spain［J］.Rev Esp Quimioter，2007，20（1）:61－67.

［3］路明，袁还东，张效本.80例牙周脓肿细菌培养和药敏试验［J］.现代口腔医学杂志，2005，19（6）:657－657.

［4］NCCLS.Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria［S］.Approved Standard－Fifth Edition，2001，21（2）:M11－A5.

［5］Salari NH，Kadkhoda Z.Rate of cultivable subgingival periodonto pathogenic bacteria in chronic periodontitis［J］.J Oral Sci，2004，46（3）:157－161.

［6］Bruce LP，Bryan SM，Newell WJ.Periodontal diseases［C］.Seminar，2005，366（19）:1809－1820.

［7］Binnaz L，Guven K.Salivary detection of periodontopathic bacteria and periodontal health status in dental students［J］.Anaerobe，2009，15（3）:82－86.

［8］Kim TS，Kang NW，Lee SB，et al.Differences in subgingival microflora of Korean and German periodontal patients［J］.Arch Oral Biol，2009，54（3）:223－229.

［9］Katsandri A，Papaparas J，Pantazatou A，et al.Two cases of infections due to multidrug－resistant Bacteroides fragilis group strains［J］.J Clin Microbiol，2006，44（9）:3465－3467.

［10］Carlier JP，Sellier N，Ranger MN，et al.Metabolism of a 5－nitroimidazole in susceptible and resistant isogenic strains of Bacteroides fragilis［J］.Antimicrob Agents Chemother，1997，41（12）:1495－1499.

［11］Van Winkeihoff AJ，Herrera D，Oteo A，et al.Antimicrobial profiles of periodontal pathogens isolated from periodontitis patients in The Netherlands and Spain［J］.J Clin Periodontol，2005，32（8）:893－898.

Isolation and Identification of Anaerobes in Periodontal Abscess in Different Regions of Shanghai

CHANG

Qing1HE Junlin1YU Liying1FENG Xiping2HU Fupin31.Department of Stomatology，Huashan Hospital，Fudan University，Shanghai 200040，China；2.Department of Prophylactodontics，Ninth People’s Hospital，Shanghai Jiaotong University，Shanghai Oral Medicine Laboratory，Shanghai 200011，China；3.Institute of Antibiotics，Huashan Hospital，Fudan University，Shanghai 200040，China

Objective:To investigate the distribution of anaerobes in periodontal abscess in different regions of Shanghai and their susceptibility to antibiotics.Methods:A total of 251 samples of pus from patients with periodontal abscess（135 cases were from Jin’an district and 116 cases were from Zhabei district）during March 2008 to December 2010 were cultured with anaerobic bags，and anaerobes were then identified.Their sensitivity to antibiotics was tested by agar dilution method.Results:Anaerobes have been detected in 60.0%（81/135）of Jin’an samples and 50.4%（68/135）of Zhabei samples，and most of them were P.melaninogenica（50.4%in Jin’an and 22.4%in Zhabei）.Strains resistant to metronidazole accounted for 24.5%in Jin’an samples，significantly higher than that（8.3%）in Zhabei samples（P＜0.05）.Conclusions:P.melaninogenica was the predominant species in patients with periodontal abscess.Anaerobes became more resisitant to metronidazole.

Periodontal abscess； Anaerobe； Microbial sensitivity tests

R780.2

A

上海市重点学科建设项目（编号:S30206）；上海市科学技术委员会项目（编号:08DZ2271100）

俞立英，E－mail:wuyu1984＠hotmail.com