超声检测老年膀胱癌患者血流分级与术后组织中血管内皮生长因子表达的关系

魏兰萍 任长庆 陈 静 范晓燕 于鹏玉 (空军航空医学研究所附属医院特诊科，北京 00089)

病理图像显示膀胱癌在肿瘤形成过程中新生血管数量多，壁薄，这为癌细胞侵袭、转移提供了重要基础〔1，2〕。超声检测作为术前诊断的重要技术，具有无创，操作简单的特点，而且超声检测可以有效判断血流。血管内皮生长因子(VEGF)是重要的血管形成促进因子，可以激活血管新生，促进肿瘤进展。本文通过超声检测老年膀胱癌患者血流分级，观察其与术后癌组织中VEGF表达关系，探讨术前超声检测价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料 2006年1月至2010年12月我院确诊为膀胱癌并需要进行手术治疗的老年患者96例。其中男50例，女46例，年龄60～79〔平均(68.9±4.9)〕岁。纳入标准均按照WHO泌尿系统疾病肿瘤的诊断标准，并由两位病理主治医师再次确诊。排除标准:①合并其他系统恶性肿瘤患者;②术前进行放化疗患者。

1.2 超声检测方法 使用日立6500及6000超声诊断仪分析膀胱肿瘤血流，选择肿瘤内血流信号最丰富区域，根据检查标准制订血流分级。具体标准:0级:肿瘤内无血流显示;Ⅰ级:肿瘤内1～2处点状或条状血流显示;Ⅱ级:3～4条彩色血流显示;Ⅲ级:5条以上彩色血流显示〔3〕。

1.3 VEGF检测 VEGF浓缩液购自北京中杉金桥生物技术有限公司，依不同配比稀释，选择最合适的稀释比例。应用免疫组织化学SP法:①将5 μm切片脱蜡水化后，用PBS冲洗3次，每次3 min。②用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复及EDTA抗原热修复。③每张切片加1滴过氧化物阻断溶液(试剂A)，以阻断内源性过氧化物酶活性，室温下孵育10 min。④PBS冲洗3次，每次3 min。⑤甩去PBS液，每张切片加1滴非免疫性动物血清(试剂B)，室温下孵育10 min。⑥甩去血清，每张切片加1滴第一抗体，室温下孵育60 min或4℃过夜。⑦PBS冲洗3次，每次3 min。⑧甩去PBS液，每张切片加1滴生物素标记的第二抗体(试剂C)，室温下孵育10 min。⑨PBS冲洗3次，每次3 min。⑩甩去PBS液，每张切片加1滴链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液(试剂D)，室温下孵育10 min。PBS冲洗3次，每次3 min。甩去PBS液，每张切片加2滴新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察3～10 min，阳性显色为棕色。自来水冲洗，苏木素复染，0.1%盐酸分化，PBS冲洗反蓝。切片经梯度酒精脱水干燥，中性树胶封固。VEGF阳性染色均位于细胞质之中，呈棕黄色为阳性细胞，合并计算高倍镜下(×400)随机选择的5个视野中阳性细胞占全部计数肿瘤细胞的百分率。

1.4 统计学分析 应用SAS6.12统计学软件，两组间定量资料采用t检验，多组间定量资料采用方差分析，并应用SNK法进行两两比较，同时进行线性相关分析。

2 结果

2.1 膀胱癌中不同血流分级与VEGF表达阳性率的关系 膀胱癌超声检测血流分级0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级VEGF表达阳性率〔分别为(45.46% ±9.92%)(n=13)、(53.43% ±9.37%)(n=30)、(68.06% ±11.57%)(n=30)、(88.65% ±14.54%)(n=23)〕差别显著(F=11.93，P=0.009 0)。

2.2 膀胱癌不同临床病理特征中血流分级及VEGF表达阳性率差别 有无浸润性、不同级别膀胱癌中血流分级及VEGF表达有显著差别(P＜0.000 1)。见表1。

表1 膀胱癌不同临床病理特征中血流分级及VEGF表达阳性率的差别

2.3 膀胱癌中血流分级与VEGF表达相关性 经线性相关分析，膀胱癌中血流分级与VEGF表达呈正相关性(r=0.41，P=0.021 5)。

3 讨论

现代各种医学影像技术不仅可以宏观显示肿瘤的声像改变，而且可以定量分析肿瘤血流特点。与其他影像学技术相比，超声具有快速方便、操作简单及无辐射的优点，并能提供有关肿瘤血管生长程度、分布、血流性质、数量、血流率、血流动力学参数等信息，被认为是观察肿瘤内血管最方便、最先进的研究技术〔4〕。肿瘤生长依赖于血管生成，而且血管增生程度反映肿瘤生成能力，在一定程度上决定了肿瘤生物学行为〔5〕。当有新生血管长入肿瘤组织，则肿瘤会呈迅速生长，且肿瘤细胞可侵入血管或淋巴管，发生转移〔6〕。VEGF是目前研究最多的促血管生成因子，对肿瘤基质血管形成及肿瘤生物学行为均有重要影响〔7〕，它在胚胎发育，创伤修复等情况下起重要作用，而且相关研究证实检测VEGF与肿瘤预后有重要关系〔8〕。术前检测血流分级可能对判断患者预后有一定价值。超声检查方法简单、实用，能提供血流图像，临床诊断和治疗中可以积极应用〔9〕。膀胱癌的癌组织中血管及血流均很丰富，因此，观察其血流分级，有助于术前深入了解肿瘤发生发展及转移。综上，超声检测血流分级对老年膀胱癌患者具有较高的术前诊断价值，术前检测血流分级可以反映膀胱癌中VEGF表达情况，可能对于术前判断肿瘤预后和指导治疗有重要价值。

1 罗红缨，李 微，谢艳霞.彩色多普勒超声检测膀胱癌血流及其MVD、VEGF表达的关系〔J〕.中国现代医生，2009;47(11):17-9.

2 Yang S，Wu X，Luo C，et al.Expression and clinical significance of hepaCAM and VEGF in urothelial carcinoma〔J〕.World J Urol，2010;28(4):473-8.

3 张瑞虹，赵 杰，李向沛，等.三维彩色超声检测肾透明细胞癌中血流分级与血管密度的关系〔J〕.西南国防医药，2011;21(7):737-8.

4 肖际东，沈守荣，朱文晖，等.彩色多普勒超声检测肝癌血流及其与MVD、VEGF表达的关系〔J〕.中国医学影像技术，2007;23(6):884-6.

5 刘爱东，庞久玲，刘士生.胃癌中基质金属蛋白酶-9和CD105表达关系的研究〔J〕.中国老年学杂志，2009;29(7):886-7.

6 刘爱东.CD105在胃癌中的表达及意义探讨〔J〕.临床合理用药，2011;4(6A):92-3.

7 Donmez G，Sullu Y，Baris S，et al.Vascular endothelial growth factor(VEGF)，matrix metalloproteinase-9(MMP-9)，and thrombospondin-1(TSP-1)expression in urothelial carcinomas〔J〕.Pathol Res Pract，2009;205(12):854-7.

8 Nakanishi R，Oka N，Nakatsuji H，et al.Effect of vascular endothelial growth factor and its receptor inhibitor on proliferation and invasion in bladder cancer〔J〕.Urol Int，2009;83(1):98-106.

9 肖际东，沈守荣，李瑞珍，等.造影增强能量多普勒超声评价肝癌血管生成的临床应用〔J〕.中南大学学报(医学版)，2007;32(5):840-2.