紫外分光光度法测定参须中人参总皂苷的含量※

2012-12-06万玉华黄春静刘家星冯爱珍何金泽

中国中医药现代远程教育 2012年24期

万玉华戴洁黄春静刘家星冯爱珍刘坤何金泽

（1 霸王（广州）有限公司，广州510440； 2 广州中医药大学，广州510006）

人参（Radix Ginseng）为五加科植物人参（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根，中国药典记载，人参性平，味甘、微苦。归脾、肺、心经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津，安神的功效[1]。根据传统用药经验，人参主根和须根均作为人参入药，随着人参炮制加工方法的发展，市场上逐渐出现人参主根和须根两个不同的用药部位，经验普遍认为人参主根的人参皂甙含量相高于参须，主根的市场价格也高于须根。目前研究人参的药用部位多为其主根，对须根的研究比较少。本研究建立参须中人参总皂苷含量测定的方法，实验结果表明该方法准确、快速，为参须的深入研究及质量控制提供了更加可靠的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器紫外分光光度计（Bluestar-A 北京莱伯泰科仪器有限公司）；旋转蒸发器（RE-52A巩义予华仪器有限责任公司）；分析天平（万分之一， SARTOIUSAG BS110S 北京赛多利斯天平有限公司）；高速匀浆机（A200-18G，上海昂尼仪器仪表有限公司）；恒温水浴锅（HH-S型巩义市予华仪器有限责任公司）；超声波清洗器（KQ3200B 昆山市超声仪器有限公司）；循环水式多用真空泵（SH-B 巩义市仪器有限责任公司）。

1.2 试药参须药材（购买于广州市清平药材批发市场，批号：20100111、20100823、20100824）由广州中医药大学中药学院赖小平教授鉴定为参须药材；人参皂苷 Re对照品（中国食品药品检定研究院，批号：11041201）。香草醛（批号：20100315，天津市百世化工有限公司）；高氯酸（批号：20100904，天津市百世化工有限公司）；冰醋酸（批号：20090320，天津市百世化工有限公司)；乙醇（批号20100806，天津市百世化工有限公司），均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液与供试品溶液的制备对照品溶液的制备：取干燥的人参皂苷Re对照品6mg，精密称定，置5ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得人参皂苷Re对照品储备液。再精密移取储备液2ml至10ml量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得浓度为0.2412mg/ml的人参皂苷Re对照品溶液。

供试品溶液的制备：分别取 20100111批样品约0.05g，0.1g，0.2g，置圆底烧瓶中，加75%乙醇50ml，加热回流1.5h，放冷，滤过，滤渣用乙醇洗涤2～3次，收集滤液，减压浓缩至无醇味，用20ml的蒸馏水溶解，转移至分液漏斗中。加乙醚萃取3次（20ml/10ml/5ml），弃去乙醚层。水层加入水饱和正丁醇萃取 4次（30ml/20ml/15ml/10ml），合并正丁醇萃取液，减压回收正丁醇至干，用甲醇分次洗涤、转移至25ml容量瓶中，甲醇定容。

2.2 测定波长的选择精密吸取人参皂苷 Re对照品溶液 0.6ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸5ml，摇匀即得待测定对照品溶液[4]。同时取供试品溶液0.6ml，按待测对照品溶液的显色方法进行显色制备即得待测定供试品溶液。

照紫外-可见分光光度法（2010版药典附录V A ）[5]测定。结果：人参皂苷与香草醛-高氯酸试剂显色后，于540-560nm处有明显紫外吸收，而且在555nm处有最大吸收，所以选择测定波长为555nm。

图1 测定波长的选择

2.3 线性关系考察精密吸取人参皂苷 Re对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml 、0.8ml，水浴蒸干，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸 5ml，摇匀[2]，于波长555nm处测定各溶液的吸光度。以人参皂苷Re重量(mg)为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。实验结果显示人参皂苷在24.12～193.00μg范围内呈良好的线性关系，相关系数 r为0.9996，回归方程为Y=4.997X+0.002809。

2.4 精密度试验精密吸取浓度为0.2412mg/ml人参皂苷 Re对照品溶液 0.6ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸5ml，摇匀，于555nm处连续测定吸光度5次。结果测定值的RSD为1.8%，提示仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验取 20100111批样品约 0.1g，精密称定，按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备，精密量取 0.3ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸5ml，摇匀，在显色后20min、25min、30min、35min、45min、60min，于 555nm处测定吸光度。结果显示：在60min内测定值的RSD为1.5%，表明溶液在1h内稳定，故本实验确定在显色后1h内测定。

2.6 重复性试验取20100111批样品约0.1g ，取6份，精密称定，按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。分别精密量取供试品溶液各0.3ml，水浴蒸干，加入5%的香草醛醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸5ml，摇匀，于555nm处测定吸光度，计算各份供试品溶液中人参皂苷含量。结果参须中人参总皂苷含量为 81.47mg/g，SD为2.0，RSD为2.5%，提示本试验重复性良好。

2.7 加样回收率试验人参皂苷 Re对照品储备液的制备：精密称取人参皂苷Re对照品0.04004g，置10ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，即得浓度为4.004mg/ml的人参皂苷Re对照品溶液。

取20100111批样品约0.05g，6份，精密称定，再分别精密量取人参皂苷Re对照品储备液1ml，按照供试品制备方法制备，分别精密量取供试品溶液 0.3ml，水浴蒸干，加入5%的香草醛醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸5ml，摇匀，于555nm处测定吸光度，计算每份溶液人参总皂苷含量。结果表明平均加样回收率为102.3%，RSD为2.8%，提示该测定方法准确度高，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.8 测定各批次参须中人参总皂苷的含量分别取批号为20100111，20100823，20100824参须药材约0.1g，精密称定，按“2.1”项中供试品溶液的制备方法制备。分别精密吸取待测溶液0.3ml至刻度试管中，水浴蒸干，加入5%的香草醛醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，在60℃下水浴加热15min，冰水冷却10min，加入冰醋酸5ml，摇匀，于555nm处测定吸光度。人参总皂苷百分含量按干燥品算，依次为 0.81%，1.01%，1.00%，均符合药典人参总皂苷不得低于0.8%的要求，结果见表2。