黄体数量对绵羊胚胎移植成功率的影响

张 浩 付静涛 艾君涛 段素云 曹 靖 李彦侠 李 璟 肖西山

（北京农业职业学院，北京 102442）

胚胎移植是胚胎生物技术的重要组成部分，以引进品种和品种改良为主的绵羊胚胎移植技术研究与应用发展迅速。在国内，绵羊胚胎移植及相关生物技术除了费用高外，移植妊娠率还不太理想，影响其推广及产业化进程[1]。胚胎移植是一个复杂的生理过程，涉及到胚胎、子宫内环境以及黄体之间的一系列复杂的生理、生化指标，其中有些已为人们所掌握，另有不少的问题尚在研究探索之中[2]。目前，尽管胚胎移植技术在绵羊的繁殖、育种中已体现独特的优越性，但由于在胚胎移植的各个技术环节上还存在诸多问题，所以本实验通过对卵巢移植侧上黄体数量对鲜胚和冻胚妊娠率影响的比较研究，为绵羊胚胎移植产业化提供理论和技术参考。

1 材料与方法

1.1 供体母羊的选择及饲养管理

供体母羊为从澳大利亚引进的纯种道塞特、萨福克、杜伯三种绵羊，年龄为1～4岁，健康，无繁殖疾病。

1.2 受体母羊的准备和饲养管理

绵羊的受体品种为小尾寒羊；年龄2～5岁，健康，无繁殖疾病；同期发情前至少1个月进行补饲。

1.3 药品

Progestagen Sponge（孕酮海绵栓）：澳大利亚Intervet Pty.Ltd. 生产，0.5 g/支。

PMSG：天津实验动物中心，1 000 IU/支。

5%亚硒酸钠维生素E注射液：亚硒酸钠10 mg+500 IU维生素E/10 ml/支（东台市动物药厂，上海，批号：020405）。

1.4 受体羊同期发情

采用阴道埋置孕酮海绵栓和注射PMSG对受体羊进行同期发情处理。

在受体羊发情周期的任意一天埋置孕酮海绵栓，第12 d注射PMSG 280 IU并同时取出海绵栓，然后观察发情。

1.5 冷冻胚胎来源

胚胎引自于澳大利亚维多利亚省Hamilton，胚胎全部用乙二醇溶液冷冻。

1.6 胚胎解冻方法

胚胎采用二步法解冻。解冻液1：0.33M蔗糖+0.5M的EG/PBS；解冻液2：0.33M蔗糖/PBS。胚胎从液氮罐中取出，在空气中（室温25℃）停留10 s，在32℃水浴中10 s，将胚胎推出依次放入解冻液1和2中各5～6 min，之后在保存液中洗3～4遍后备移植。

1.7 胚胎移植方法

采用腹腔镜法进行移植。

1.8 统计分析

采用SAS检验。

2 结果

2.1 移植侧卵巢黄体数量不同对绵羊受体鲜胚移植妊娠率的影响

本实验对绵羊受体移植侧卵巢上含有1、2、3个黄体的鲜胚移植妊娠率进行比较，结果各组间差异不显著，但3个黄体的鲜胚移植妊娠率高于2个和1个黄体的鲜胚移植妊娠率，2个黄体的鲜胚移植妊娠率稍高于1个黄体的鲜胚移植妊娠率。详见表1。

表1 绵羊受体移植侧有1、2、3个黄体对鲜胚移植妊娠率的影响

2.2 移植侧卵巢的黄体数量不同对绵羊受体冻胚移植妊娠率的影响

对移植侧卵巢上含有1或2个黄体的409只绵羊受体冻胚移植妊娠率进行比较，结果各组间差异不显著，说明只要黄体质量好，1或2个黄体都可以进行移植，但2个黄体的受体移植妊娠率稍高。详见表2。

表2 绵羊受体移植侧卵巢有1或2个黄体对冻胚移植妊娠率的影响

图1 黄体数量对受体绵羊鲜胚和冻胚移植妊娠率比较

3 讨论

黄体是排卵后的卵泡形成的一个临时性内分泌器官，主要分泌孕酮，维持早期妊娠[3]。黄体分泌的孕酮使胚泡在适当的时候在子宫着床。孕酮还能阻止子宫平滑肌层的收缩，防止流产[4]。当机体内孕酮浓度较高时，可诱导T细胞产生巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF），白血病抑制因子（LIF）及辅助性T细胞（Th）2型细胞因子[5]。孕酮可阻止有丝分裂原刺激的淋巴细胞增殖，延长同种异体移植物的存活时间；降低单核细胞的氧化代谢，减少巨噬细胞对细菌反应中产生的促炎性细胞因子，以维持正常的妊娠环境[6]。

受体绵羊移植侧黄体数量对鲜胚移植妊娠率并非越多越好，一般1～3个较好。3个黄体效果好于2个黄体，1个黄体妊娠率最低，可能与黄体分泌的孕激素含量有关。由于本实验中4个或4个以上黄体的情况很少，移植妊娠率很低，故未进行对比。

绵羊受体移植侧黄体数量1或2个对冻胚移植妊娠率无显著影响（3个以上黄体的受体数量很少，故未做比较），这两种情况都可进行移植。

本研究表明只要黄体质量好，移植侧1～3个黄体都可以进行移植，同时进一步量化了移植侧黄体数量对鲜胚和冻胚移植妊娠率的影响。

[1] 史小林. 人类生殖学[M] . 北京：科学出版社，2001.

[2] BlandauRJ，Brackett B，Brenner RM，et al. The oviduct. In：GreepRO，Koblinsky MA，eds. FrontiersinReproduc-tionandFertility Control[M] . Cambridge，MA：MIT Press，1977.

[3] 朱杰，童先宏. 孕酮与妊娠关系的研究进展[J]. 国际生殖健康/计划生育杂志.2012，31（2）：133-136.

[4] Beagley KW，Cockel CM. Regulation of innate and adaptive immunity by the femal sex hormones oestradiol and progesterone[J].FEMS Immunol Med Microbiol，2003，38（1）：13-22.

[5] Duan L，Yan D，Zeng W，et al. Effect of progesterone treatment due to threatened abortion in early pregnancy for obstetric and perinatal outcomes [J]. Early Hum Dev，2010，86（1）：41-43.

[6] 郭淑华.哺乳动物黄体发生的分子机制[J]. 潍坊学院学报.2009，9（4）：90-93.