微粉化对马钱子溶出度的影响

杨 瑛，王宇红，蔡光先，杨 惠，孟 盼，尹玲桃

（1.湖南中医药大学，湖南 长沙410208；2.湖南中医药大学第一附属医院中药药理（心血管）实验室，湖南 长沙410007；3.湖南省中药粉体与创新药物省部共建国家重点实验室培育基地，湖南 长沙410208）

马钱子为马钱科植物马钱Strychons nux-vomica L.或云南马钱Strychnos pierriana A.W.Hill 的干燥成熟种子，属于常用的有毒中药。现代研究表明，马钱子主要作用于中枢神经系统和免疫系统，对中枢神经系统具有兴奋作用，还作用于心血管、呼吸、消化系统，并有较强的抗肿瘤作用[1]。士的宁与马钱子碱为马钱子的主要药理与毒理活性成分。前期试验结果表明，微粉化后马钱子粉的最小起效剂量减小，药理效应增强[2]，其原因有待进一步探讨。邹龙[3]曾对马钱子超微粉体和常规粉体中马钱子碱在重蒸馏水中溶出进行比较。本文则重点考察微粉化处理相对粗粉中士的宁、马钱子碱两种主要成分在模拟体内环境的两种溶出介质中溶出量、溶出速率的影响，为微粉化技术在马钱子中的应用及安全性与有效性评价，提供理论基础与试验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

BFMT-6BI 型贝利粉碎机 （济南倍力粉体技术有限公司产品）；ZRS-8G 智能溶出试验仪 （天津大学无线电厂）；Waters2695 高效液相色谱仪，Waters2998 PDA 检测器，Empowder2 数据处理软件；CP225D 型电子天平（赛多利斯）；FE20 型酸度计（梅特勒）；Winner 3001 干粉激光粒度测定仪 （济南微纳仪器有限公司）；AWL-6000-U 型实验室微量无机型超纯水机。

1.2 药品与试剂

马钱子中药材由湖南春光现代中药有限公司提供，经检验符合《中国药典》2010年版马钱子项下的有关规定。采用同一批制马钱子制备成1 号粉体样品 （粗粉）、2 号粉体样品 （超微粉），批号分别为C20100328、W20100328；士的宁对照品 （批号：110705-200306）；马钱子碱对照品（批号：110706-200505），均购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用。

乙腈为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司），水为实验室自制超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 不同粒径马钱子粉体制备

取制马钱子约1 000 g，40～50 ℃干燥，分为2份，一份用普通粉碎机粉碎成粗粉（全部能通过二号筛），混有能通过四号筛的不超过40%（编为1 号粉体样品），另一份用贝利粉碎机粉碎成D50 为14.02 μm （编为2 号粉体样品）的超微粉。

2.2 HPLC 测定[4]

参照 《中国药典》2010年版一部马钱子项下HPLC 含量测定，色谱条件：C18Inertsil ODS-2 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：A=乙腈，B=0.2%甲酸，采用线性梯度洗脱：0～15 min，8%A；15 ～25 min，8%～10%A；25 ～40 min，10%～70%A；40～45 min，70%～95%A；45～55 min，95%A；55～60 min，95%～8%A。检测波长254 nm。理论板数按士的宁峰计算应不低于5 000。流速1.0 mL/min，柱温：30 ℃，进样量10 μL，洗脱时间60 min。见图1。

图1 马钱子HPLC 图谱

2.3 溶出度试验[5]

2.3.1 不同介质的溶出度测定 参照《中华人民共和国药典》2010年版二部溶出度测定法浆法，以脱气处理的人工胃液、人工肠液900 mL 为介质，转速为100 r/min，温度（37.0±0.5）℃，测定溶出度。精密称定马钱子1 号粗粉和2 号超微粉各5 g，放入装有已恒温介质的溶出杯中，运转仪器，开始计时，分别 在 1、2、3、5、10、15、20、30、40、50、60 min 和240 min 取样5 mL，用0.45 μm 滤膜滤过，取续滤液，每次取样后均向溶出杯中补充相同温度和体积的水。计算不同时间马钱子碱、士的宁的累积释放量。结果见图2～3。

图2 马钱子超微粉与粗粉在人工胃液中（E）及人工肠液中（D）的马钱子碱的体外溶出折线图

图3 马钱子超微粉与粗粉在人工胃液中（F）及人工肠液中（G）的士的宁的体外溶出折线图

2.3.2 溶出度测定结果评价 将马钱子超微粉与其粗粉在人工胃液和人工肠液各时间点马钱子碱和士的宁的累积溶出率分别按零级动力学模型、Weibull分布、Higuchi 分布[6]、Hixson-Crowell[7]分布曲线进行拟合，结果表明，马钱子超微粉与其粗粉在人工胃液和人工肠液中马钱子碱和士的宁的溶出曲线均比较符合Weibull 分布。结果见表1。

根据Weibull 分布用Casiofx.180p 拟合直线，提取溶出度参数T50(药物溶出50%所需时间)、Td(药物溶出63.2%所需时间)、T90(药物溶出90%所需时间)、m(溶出曲线斜率)，溶出度参数超微粉与粗粉比较，P＜0.01。结果见表2～3。

表1 马钱子超微粉与粗粉在不同介质中马钱子碱和士的宁累积溶出度的Weibull 分布函数

表2～3 可知，经T 检验分析，不同粒径马钱子粉中士的宁、马钱子碱的溶出参数间差异有统计学意义（P＜0.01）。其超微粉组与粗粉组间比较，差异有显著统计学意义（P＜0.01）。Weibull 分布中形态参数（T50、Td、m）表明其超微粉的溶出速率大于粗粉组。

3 讨论

本文研究结果表明，马钱子超微粉在人工胃液和人工肠液中溶出效率均高于其粗粉组，马钱子超微粉的溶出度大于其粗粉，且马钱子碱与士的宁的溶出是相平行的。马钱子超微粉中士的宁和马钱子碱溶出参数T50、Td、m 等均显著下降，与粗粉比较，差异有统计学意义(P＜0.01)。结果提示，超微粉体技术能显著提高马钱子中主要化学成分士的宁、马钱子碱的溶出速率，经20 min 后二者溶出度均达到90%以上，说明微粉化未造成马钱子主要有效成分的丢失。

表2 人工肠液中马钱子超微粉与粗粉的溶出度参数 （±s，n=5）

表2 人工肠液中马钱子超微粉与粗粉的溶出度参数 （±s，n=5）

注：与粗粉组比较*P＜0.01。

溶出参数T50(min)Td(min)T90(min)m马钱子碱超微粉 粗粉0.378 8±0.012 9* 19.430 1±0.030 1 1.329 9±0.014 3* 44.534 1±0.012 0 19.502 8±0.031 0* 249.116 0±0.033 0 0.240 0±0.012 4* 0.352 9±0.013 9士的宁超微粉 粗粉0.393 3±0.012 6* 20.837 9±0.011 0 1.313 2±0.011 0* 44.958 0±0.022 9 17.630 0±0.032 2* 229.950 7±0.032 6 0.246 4±0.012 9* 0.380 6±0.013 2

表3 人工胃液中马钱子超微粉与粗粉的溶出度参数 （±s，n=5）

表3 人工胃液中马钱子超微粉与粗粉的溶出度参数 （±s，n=5）

注：与粗粉组比较*P＜0.01。

溶出参数T50(min)Td(min)T90(min)m马钱子碱超微粉 粗粉0.318 3±0.033 6* 20.530 6±0.034 8 1.247 3±0.041 4* 43.314 1±0.013 0 20.596 5±0.020 9* 220.303 0±0.021 6 0.222 6±0.032 6* 0.387 1±0.010 7士的宁超微粉 粗粉0.450 4±0.034 1* 20.761 5±0.025 4 1.408 5±0.015 6* 46.022 6±0.013 0 20.812 3±0.012 9* 241.822 8±0.026 7 0.244 8±0.012 0* 0.370 5±0.013 1

微粉化后马钱子中士的宁与马钱子碱的溶出量与溶出速率大幅度提高，为使用马钱子提供了可参考的试验依据，提示临床应用时应密切关注其安全性。

[1]房 丹，刘 维，刘晓亚，等.马钱子药理学研究进展[J].辽宁中医杂志，2007，34(7)：1 018-1 019.

[2]王宇红，莫韦皓，邓东方，等.不同粒径马钱子粉对类风湿性关节炎模型大鼠的影响及安全性比较研究[J].中草药，2012，43(4)：743-749.

[3]邹 龙，桂 卉，黄世超，等.马钱子超微粉体和常规粉体中马钱子碱的溶出比较[J].中华中医药杂志，2009，24（2）：127-129.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S]北京:中国医药科技出版社，2010：47.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S]北京:中国医药科技出版社，2010：附录XC.

[6]陆 彬.药物新制剂与新技术[M].北京：人民卫生出版社，1998：406-409.

[7]高声传，陈济民.双氯芬酸赖氨酸盐缓释片的制备及初步稳定性研究[J].中国药房，2001，1(6)：340-341.