重庆某猪场猪圆环病毒与附红细胞体混合感染的诊治
2012-11-23丁孟建黄坤英杨晓伟
丁孟建,黄坤英,杨晓伟
(1.西南大学荣昌校区动物医学系,重庆 荣昌402460;2.重庆市荣昌县河包镇人民政府,重庆 荣昌402460)
2011年4月中旬,重庆大足县某千头猪场猪群发病,开始表现2头猪胸、背及腰部皮肤炎症,疑似螨虫感染或蚊虫叮咬,口服伊维菌素无效,15日内病情蔓延至全群,大剂量使用磺胺药物后病情更加严重,相继死亡母猪5头,育肥猪14头,另有30多头病危。据养殖户介绍:该场免疫疫苗有猪瘟细胞苗、O型口蹄疫疫苗、伪狂犬基因缺失苗和蓝耳灭活苗,未免疫PCV2苗。笔者亲身经历,对该病诊断情况报告如下,以期对临床猪病防治有帮助。
1 材料与方法
1.1 材料 出诊到养殖场前腔静脉采取1头病危母猪和2头发病育肥猪血液,各加入2mL血液至抗凝管和4mL血液至凝血管中,4℃保存备检。
检测试剂:瑞氏染色液为西南大学荣昌校区动物医学系微生物教研室配制;DNA提取试剂盒、Taq酶、PCR缓冲液(含 Mg2+)、dNTP、引物P1和P2为上海生工生物工程技术服务有限公司产品。
试验仪器:Mastercycler PCR仪,购自Eppen-dorf公司;凝胶分析成像系统(Touching 2002),购自上海天呈科技有限公司。
引物合成:参考文献1于上海英骏生物技术有限公司合成以PCV-2的ORF1为目的基因的上游引物:P1:5′-CGAGAAAGCGAAAGGAACAGA-3′;下游引物:P2:5′-GGTAACCATCCCACCACTT-3′,预计PCR扩增产物长度为371bp。
1.2 方法 按常规方法进行临床检查和尸体剖检,记录眼观病变。
显微镜检查:将采集的3头猪的抗凝血分别进行瑞氏染色,显微镜下观察细胞形态。
DNA提取:将采集的病猪的全血5 000r/min离心8min,分离血清。按DNA提取试剂盒使用说明书提取血清DNA,-20℃保存待测。
PCR检测:PCR反应体系为25μL,DNA模板添加量为0.3μL。PCR反应程序为:94℃预变性3 min,94℃变性30s,55℃退火30s,72℃延伸30s,35个循环,最后72℃延伸10min。PCR产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳于凝胶分析成像系统中观察结果。
2 结果
2.1 临床症状 发病育肥猪突然减食或废食,消瘦。体温高达40℃~41.5℃,并稽留不退,一般持续3~7d。鼻、耳、四肢、胸腹部及股内外侧等处呈紫红色,腰背处可见绿豆大至黄豆大隆起于皮肤表面的红紫色丘状斑点。母猪皮肤苍白或黄染,尿液似浓茶样,暗红色。眼睑周围红肿,被大量眼分泌物粘连。
2.2 病理变化 全身淋巴显著肿大、苍白,特别是肺门、腹股沟等处淋巴结肿大2~3倍,肠系膜淋巴呈绳索状肿大;全身脂肪黄染,肝肿大呈土黄色、质脆,胆囊肿大,内充满绿色黏稠胆汁;胸膜和心包积液、色浅黄,血液稀薄,不易凝固;肾肿大,表面有出血点,挤压肾盂从输尿管中流出5~10mL乳白色细砂样混有少量黏液的颗粒。
2.3 涂片观察 血液涂片用瑞氏染色,镜检发现3份病料中2份(1份母猪、1份育肥猪)红细胞表面呈锯齿状,附着大量似星芒状的蓝色小体,嗜酸性粒细胞增多(图1)。
2.4 PCR结果 所取3份样品中2份(育肥猪)出现与预期大小(371bp)一致的目的条带,为阳性(图2),另外1份(生产母猪)为阴性。
3 分析讨论
3.1 根据临床症状、剖检、血液涂片和PCR检测结果阳性,可知本次疫情生产母猪是附红细胞体感染,育肥猪是由圆环病毒与附红细胞体混合感染引起的。猪附红细胞体与圆环病毒病在临床中较为常见,在上海、浙江、江苏、广东、广西、云南、宁夏等地均有该病发生,可引起哺乳动物(猪、牛、羊、兔、犬、狐)和家禽(鸭)发病[2-4]。2011年4月~9月,本诊断中心共确诊猪病63例,其中猪附红细胞体病12例,圆环病毒病16例,分别占诊断猪病中的19.0%和25.4%,同比其他季节发病增加,这可能与夏、秋季天气炎热、吸血昆虫滋生及母猪分娩等应激有关。因此,控制该病关键在于夏、秋两季,做好灭蚊、灭蝇、防暑、减少应激及PCV-2病疫苗免疫接种等饲养管理工作。
3.2 临床中猪圆环病毒病引起的皮炎、肾炎综合征应及时与猪体表寄生虫或蚊虫叮咬引起的皮炎相区分,做到提早诊断,隔离病猪。圆环病毒病引起的皮炎主要表现在猪背部、腰部、胸部、前后肢内侧、腹部出现隆起于皮肤表面的红紫色丘状斑点,无痒感,体温升高,食欲降低,全身消瘦;体表寄生虫或蚊虫叮咬引起的皮炎表现为患部瘙痒、檫圈,局部脱毛,无明显的体温升高、食欲降低和消瘦症状,口服伊维菌素或灭/驱蚊多能治愈。
3.3 磺胺类药物对附红细胞体及血液原虫等具有较好治疗效果,也可控制继发感染,按理是治疗该病较理想的药物,但由于该药长期使用易导致肾脏或输尿管尿酸盐沉积,对肾影响较大。当附红细胞体与圆环病毒混合感染时,由于圆环病毒可引起皮炎、肾炎综合征,此时若再用磺胺类药物,笔者认为不是很科学,易导致病情加重。本病例,我们使用土霉素、维生素K1、维生素K3、黄芪多糖拌料全群口服;发病严重的猪肌肉注射附血康(20%土霉素)、维生素K1、维生素K3、维生素B12、ATP和肌苷,一个疗程后病情得到有效控制。
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