鸭疫里默氏杆菌对肉鸭感染性试验

张培晏 陈民香

（1.四川省广元市元坝区动物疫病预防控制中心，广元 628021；2.四川省广元市动物疫病预防控制中心，广元 628017）

1 前言

鸭疫里默氏杆菌[1]是一种无芽孢、不运功、有荚膜的G-小杆菌，主要感染家鸭、鹅、火鸡等[2]，感染后病鸭多表现为眼鼻有分泌物，共济失调等。慢性耐过鸭生长缓慢，主要表现神经性症状，导致残鸭和僵鸭。花边肉鸭是利用广西大麻鸭作母本、快大型品种樱桃谷肉鸭作父本[3]杂交种，具有抗病力及适应性强、肉质风味好、生产性能及商品性能都较佳、制种成本优廉等特性，主要分布于湖北、湖南、广西、四川等地。鸭疫里默氏杆菌（RA）作为主要病原菌之一，给川渝地区花边肉鸭的饲养造成了极大的损害。本课题就RA对不同日龄花边肉鸭的感染情况进行探究，旨在找出花边肉鸭对此菌最易感日龄，为该病疫苗研制及预防花边肉鸭患病提供参考。

2 材料与方法

2.1 基础种子

AF株RA基础毒株。

2.2 实验动物

健康1日龄花边肉鸭84只（SM3樱桃谷肉鸭为父本与本地麻鸭母本杂交1代）和健康家兔1只均购置本地。

2.2.1 主要仪器 超低温冰箱、4℃冰箱、紫外分光光度计、电热恒温培养箱、电子天平、压力蒸汽灭菌器、1次性注射器、酒精灯、接种环、培养皿等。

2.2.2 主要药品与试剂 胰化蛋白胨、酵母抽提物、琼脂粉、氯化钠、AF株RA的标准血清；鸭肝炎蛋黄抗体。

2.3 方法

2.3.1 培养基及试剂的配制 巧克力琼脂平板参照文献[4]配制；0.9%NaCl溶液：NaCl9.0 g，用蒸馏水定容至1.0L，摇动容器直至溶质溶解，灭菌备用。

2.3.2 实验鸭及饲养 健康1日龄花边肉鸭，随机分组，脚蹼烙孔逐羽编号。饲养至攻毒日龄，攻毒时转移至染疫舍中。除1日龄注射精制鸭肝炎蛋黄抗体（自制品）1ml外，实验鸭在试验期间未使用其他药物。

2.3.3 菌悬液的制备 基础种子解冻，超净台内传CLBA，37℃，18h～24 h培养，检验合格后，无菌生理盐水（PS）洗下菌苔，制成菌悬液。

2.3.4 攻毒试验

2.3.4.1 AF株RA对不同日龄花边肉鸭攻毒 随机分组，每组实验鸭11只，见表1。试验组于6、8、10、18、28、43日龄时自健康隔离饲养舍转到染疫舍中攻毒，实验鸭每只注射0.2 ml[5]攻毒菌液，对照组每只接种0.2 ml PS。

2.3.4.2 攻毒后观察 观察期为7 d，每天上下午各1次，逐只观察，记录发病和死亡鸭脚蹼号码。凡出现行走异常、精神沉郁、废食、体重特轻、偏颈、死亡或存活鸭扑杀后见明显病变者判为发病。

2.3.4.3 菌回收实验 无菌取病死鸭或存活扑杀鸭的脑、心血、肝脏病变组织，接种CLBA，37℃培养，24 h后观察菌落形态。若菌落不纯或无单个菌落存在，传代培养，直止得到单个菌落。

2.3.4.4 玻片凝集试验[6]在干净玻片上滴蒸馏水l滴，用接种环挑取待检菌的纯培养物少许与蒸馏水混匀，滴加未稀释的AF株RA阳性血清l滴，将载玻片轻轻摆动或用接种环涂开，观察现象并得出结论。

3 结果

3.1 临床症状

健康鸭6日龄开始发病，10日龄死亡。病鸭表现为缩颈，不愿走动，喙抵地面；排白色或绿色稀粪，部分雏鸭腹部膨胀；喙和蹼发紫、发绀；两肢软弱，跛行或卧地不起，行走打晃、转圈、倒退、前仰后翻，翻倒后仰卧不易翻转；频死期出现神经失调，两肢伸直呈角弓反张状态。

3.2 剖检病变

病死鸭剖解可见全身浆膜有纤维素性渗出物覆盖；气囊增厚；心包有大量黄白色纤维索性渗出物；肝表面有一层黄白色纤维索性假膜，易剥离。同时有的肝脏肿胀、变性、质脆并有出血点；脑膜出血、水肿。

3.3 菌回收实验

菌落直径1～2.0 mm，呈奶油状、透明、圆形、凸起的鲜露珠样。玻片凝集实验：几秒钟后出现清晰的乳白色絮状凝集块，阳性反应。

3.4 发病率及死亡率统计

约10倍LD50菌量，即2.4×109CFU/ml菌液0.2ml攻击不同日龄花边肉鸭，详细结果见表1～表3。

表1 AF株RA对6～43日龄花边肉鸭的感染试验结果

表2 AF株RA对6～43日龄花边肉鸭攻毒后发病情况统计

表3 AF株RA对6-43日龄花边肉鸭攻毒后各天死亡情况

4 分析与讨论

4.1 AF株RA对花边肉鸭易感性

据调查，SI是花边肉鸭的多发病和常发病。RA菌株中，血清1型占50%以上，为主要流行型[7、8]。本试验结果表明AF株RA对6～43日龄花边肉鸭均有很强致病力，除6日龄发病率为72.7%和死亡率为45.5%外，各组发病率和死亡率都达到80%。花边肉鸭14～43日龄，除14日龄组发病率达到63.6%外，其余各组均超过80%，除14日龄死亡率仅为36.3%外，其余各组均达到60%5]。可以看出AF株RA对花边肉鸭有很强的感染力，对其一生均高度易感。

4.2 花边肉鸭对AF株RA的最敏感期

花边肉鸭对AF株RA的最敏感时期是8日龄、18日龄。叶玉梅等[5]报道18～20日龄是AF株RA感染花边肉鸭和樱桃谷肉鸭的最敏感时期。本次试验与其基本一致。从表1看出，8和18日龄发病率和死亡率都为100%和90.9%。从表2和表3看出，18日龄健康鸭攻毒后第2 d发病率达63.6%；第4 d全部发病且死亡率达54.5%。因此，在花边肉鸭的养殖中要高度重视RA日龄时期的环境卫生和之前的疫苗预防及药物预防。

4.3 免疫保护期

AF株RA油乳剂灭活疫苗免疫4日龄花边肉鸭和樱桃谷肉鸭后，疫苗接种疫苗后10 d保护率可达80%左右。4日龄樱桃谷肉鸭接种AF株RA油乳剂灭活疫苗后50 d，达到80%以上的保护效果[5]。根据一般的油乳剂灭活疫苗诱导期通常为7～14 d，我们建议在疫苗预防方面1日龄花边肉鸭用灭活油乳剂苗1免，7日龄加强免疫1次。

5 结论

AF株RA对6～43日龄花边肉鸭均有很强致病力，除6日龄发病率为72.7%和死亡率为45.5%外，各组发病率和死亡率都达到80%。8、18日龄为AF株RA感染花边肉鸭的最敏感日龄。

[1]Higgins D.A.，R.R.Henry，Z.V.Kounev.Duck immune responses to Riemerella anatipestifer vaccines[J].Developmental and Comparative Immunology .2000,（24）：153-167

[2]蔡宝祥主编.家畜传染病学（第四版）[M].北京：中国农业出版社.2007

[3]廖远勤.经济杂交禽（鸡、鸭）特性的观察和分析[J].四川畜牧兽医，2003，6：27-28

[4]J.萨母布鲁克D.W 拉塞尔著 黄培堂.等译.分子克隆实验指南（第三版）[M].2002

[5]叶玉梅.鸡抗RA蛋黄抗体消除油乳剂灭活疫苗免疫空白期的研究.2009

[6]汪铭书，程安春等.血清5型鸭疫里氏杆菌在我国的发现及其病原特性研[J].2002，32（7）：16-20

[7]李继祥，徐刚，王孝友等.重庆地区鸭传染性浆膜炎病原分离鉴定[J].中国家禽，2005，27（13）：8-11

[8]黄承洪，李继祥，黄伟等.重庆和四川地区鸭疫里默氏杆菌流行动态研究.中国预防兽医学报2007，29（1）：67-69