白首乌多糖抗疲劳及耐缺氧、耐高温作用研究

李 青 ,董兆稀, 赵冰清

( 1. 长沙市中心医院药剂科,中国 长沙 410007；2.中国人民大学外国语学院,中国 北京 100872；3.湖南师范大学医学院,中国 长沙 410013)

白首乌(CynanchumauriculatumRoyle ex Wight)系萝摩科(Asclepiadaceae)马利筋亚科(Ascle-pioideae)鹅绒藤属(Cynanchumlinn)植物,又名耳叶牛皮消、飞来鹤(《植物名实图考》)、老牛冻(湖南,四川[1])．在我国资源丰富,山东、江苏等地有人工栽培,其块根药用，具有补肝肾、强筋骨、益精血、健脾消食、解毒疗疮等功效[1-2]．白首乌总苷对预防动脉粥样硬化斑块形成有一定的作用[3-4]．研究表明,白首乌具有养血益肝、固肾益精、乌须黑发和延年益寿的功效[2,5]．现代研究发现白首乌中含有多种有效成分,具有抗肿瘤、保肝护肝降血脂等多方面的药理活性[6-8]．国外的研究也证实了这些药理活性[9-10]．

本实验所用白首乌采自岳麓山,经湖南省药检所方石林教授鉴定为萝摩科植物耳叶牛皮消(CynanchumauriculatumRoyle ex Wight)．

1 材料和试剂

1.1 实验动物

昆明种雄性和雌性小鼠各半(120只,体重(20±2) g),湖南农业大学动物饲养基地提供．

1.2 实验试剂与设备

实验所用试剂与设备的名称、厂商及型号见表1．

表1 实验所用试剂与设备的名称、厂商及型号

1.3 实验数据处理软件

2 实验方法

2.1 多糖的提取分离

2.1.1 前处理 取白首乌饮片,使用植物粉碎机将其粉碎,得到白色白首乌粉末．将所得白首乌粉末装入圆底烧瓶,按料液体积比1∶3加入85%无水乙醇,90 ℃水浴加热1 h,提取2次,过滤,将所得滤渣风干,得到黄色干粉．

2.1.2 提取 称取适量上述白首乌黄色干粉,置于圆底烧瓶中,按料水质量比1∶20加入蒸馏水,在100 ℃的热水浴中冷凝回流浸提2 h．冷却后使用离心机3 000 r/min离心10 min,将所得上清液合并．将上清液倒入圆底烧瓶,于90 ℃温度下使用旋转蒸发仪浓缩．浓缩所得试液加入3倍体积95%乙醇溶液,静置1 h 后,使用离心机3 000 r/min离心10 min,弃去溶液,将沉淀抽滤．抽滤所得沉淀干燥后即得白首乌粗多糖．

2.2 药理实验

2.2.1 动物分组 120只小白鼠,分为三大组,高剂量组,剂量为150 μg/g；中剂量组,剂量为100 μg/g；低剂量组,剂量为50 μg/g．给药方式为灌胃给药．每一大组小白鼠40只,雌雄各半,体重(20±2) g．并将小白鼠随机分为对照组和3个实验组,每组10只,实验组按剂量用生理盐水稀释,白首乌粗多糖按25 μL/g量给药；对照组按等量生理盐水灌胃．此4组连续灌胃8 d,于末次灌胃2 h后进行实验．

2.2.2 负荷游泳实验 小白鼠40只,雌雄各半,随机均分4组,每组10只按高剂量组、中剂量组、低剂量组连续给小鼠灌胃8 d,实验组按剂量用生理盐水稀释白首乌粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；对照组按等量生理盐水灌胃．于完成灌胃的小白鼠尾部束一重物(约2 g)放入一水深20 cm,水温(30±1) ℃的玻璃缸内,以小鼠体力耗竭(小鼠头部沉入水中10 s不能浮出水面)为指标,记录小鼠生存时间．

2.2.3 耐缺氧实验 小白鼠40只,雌雄各半,随机均分4组,每组10只按高剂量组、中剂量组、低剂量组连续给小鼠灌胃8 d.实验组按剂量用生理盐水稀释白首乌粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；对照组按等量生理盐水灌胃．将小鼠放入250 mL的广口瓶内,每瓶1鼠,瓶内装有10 g无水氯化钙,用凡士林涂抹瓶口,盖严密封,立即记时,以呼吸停止(小鼠胸部不起伏)为指标,记录小鼠存活时间．

2.2.4 耐高温实验 小白鼠40只,雌雄各半,随机均分4组,每组10只按高剂量组、中剂量组、低剂量组连续给小鼠灌胃8 d.实验组按剂量用生理盐水稀释白首乌粗多糖,以25 μL/g灌胃,1次/d；对照组按等量生理盐水灌胃将小鼠放入50±1 ℃的恒温箱中的玻璃缸内,以小鼠呼吸停止(小鼠胸部不起伏)为指标,记录小鼠存活时间．

3 实验结果

3.1 负荷游泳实验

将实验所得高中低剂量组与对照组数据进行比较,得出白首乌粗多糖对小白鼠负荷游泳能力的影响结果，见表2．

表2 小白鼠负荷游泳对比实验结果

注:各实验组与对照组比较*P<0.05,差异显著；**P<0.01,差异极显著．

由表2可看出,与对照组相比,实验组小白鼠负荷游泳明显表现活跃,且小白鼠负荷游泳时间随粗多糖剂量增加而延长．高剂量组与对照组的差异达到极显著水平,P<0.01；中剂量组与对照差异显著,P<0.05；低剂量组与对照差异不显著,P>0.05．实验结果说明,3种剂量的白首乌粗多糖均有一定的抗疲劳作用,且中、高剂量组较对照组差异显著．

3.2 耐缺氧实验

将实验所得高中低剂量组与对照组数据进行比较,得出白首乌粗多糖对小白鼠耐缺氧能力的影响结果，见表3．

表3 小白鼠耐缺氧对比实验结果

注:各实验组与对照组比较**P<0.01,差异极显著．

由表3可以看出,实验组小鼠耐缺氧存活时间长于对照组,且存活时间随粗多糖剂量增加而延长；高剂量组与对照组之间差异极显著,P<0.01,中、低剂量组与对照组间的差异均不显著,P>0.05．实验结果说明,白首乌粗多糖可提高小鼠对缺氧的耐受能力,其中高剂量组的存活时间较对照组差异极显著(P<0.01)．

3.3 耐高温实验

将实验所得高中低剂量组与对照组数据进行比较,得出白首乌粗多糖对小白鼠耐高温能力的影响结果，见表4．

表4 小白鼠耐高温对比实验结果

注:各实验组与对照组比较**P<0.01,差异极显著．

由表4可知,实验组小鼠耐高温存活时间长于对照组,且存活时间随粗多糖剂量增加而延长；中、高剂量组与对照组差异极显著,P<0.01；低剂量组与对照差异不显著,P>0.05．实验结果说明,白首乌粗多糖可提高小鼠对高温的耐受能力,且中、高剂量组的存活时间较对照组差异极显著(P<0.01)．

4 结果与讨论

白首乌多糖对小白鼠的实验研究表明:白首乌多糖能明显提高小白鼠耐力,延长耐缺氧、负荷游泳和耐高温时间,且中剂量组、高剂量组与对照组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),其作用与剂量大小有关.高、中、低3个剂量组中,存在剂量效应关系,以高剂量组效果最为明显．结果表明,白首乌粗多糖具有抗疲劳、耐缺氧等作用,显示其对延长小白鼠的寿命有着积极意义．今后的研究中,如果能进行增强小白鼠记忆能力等指标的药理实验研究,在白首乌多糖抗衰老作用研究中必将有新的发现．

参考文献:

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[8] 杨小红,周远明,张 瑜,等.白首乌粗多糖降血脂作用研究[J].时珍国医国药杂志, 2010,21(6):1381-1382．

[9] LEE M K, YEO H, KIM J,etal. Protection of rat hepatocytes exposed tocch in-vitro by Cynandione A, a biacetophenone from Cynanchumwi rdii[J]. J Pharm Pharmacol, 2000,52(3):341-343．

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