儿童过敏性紫癜急性期Th17细胞功能和CD4＋CD25＋调节性T细胞水平变化

刘萍，张秋业

（1 青岛市李沧区中心医院儿科，山东 青岛 266041； 2 青岛大学医学院附属医院儿科）

过敏性紫癜（HSP）是儿童时期最常见的一种自身免疫性血管炎性疾病，临床症状表现为紫癜样皮肤损害以及胃肠道、肾脏、关节等多个系统的损害。HSP急性期有明显免疫功能失调，表现为外周血T淋巴细胞亚群功能紊乱，B淋巴细胞呈多克隆活化，抗体分泌增多及相关细胞因子的改变。HSP病因及发病机制十分复杂，其免疫失衡机制尚未阐明。Th17细胞是最近发现的一种以分泌白细胞介素17（IL－17）为主的效应性T细胞，在自身免疫和促炎症反应方面具有重要作用。CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）是一群重要的具有免疫调节和免疫抑制双重作用的CD4＋T细胞，它对效应性T细胞有抑制作用，是机体维持自身免疫耐受的重要组成部分。业已证实，Th17细胞增加和（或）CD4＋CD25＋Treg降低与炎症和各种自身免疫性疾病发病密切相关。本文观察了54例HSP病儿急性期外周血IL－17和CD4＋CD25＋Treg细胞水平变化，以及其与淋巴细胞亚群之间的相关性，以期探讨Th17和CD4＋CD25＋Treg水平变化在儿童 HSP发病机制中的作用。

1 资料和方法

1.1 对象及分组

1.1.1 HSP组 2009年10月—2010年12月，选取青岛大学医学院附属医院儿科诊治的HSP急性发作期病儿54例，男34例，女20例；年龄3～13岁，平均7.5岁。均符合1990年美国风湿病协会制定的诊断标准［1］。根据是否有血尿或（和）蛋白尿分为肾炎组（HSPN组）23例和非肾炎组（NHSPN组）31例。近期未使用免疫抑制性药物。

1.1.2 对照组 为同期青岛大学医学院附属医院儿童保健门诊健康查体儿童30例，男18例，女12例；年龄2～13岁，平均7.2岁。其中20例应用流式细胞术检测CD4＋CD25＋Treg亚群，男18例，女2例；年龄2～11岁，平均年龄5.1岁。既往均无过敏性疾病史，采血前4周内无感染及用药史。

1.2 检测指标及方法

1.2.1 标本采集 清晨6：00－7：00时取空腹肘静脉血2 mL，即刻加入无菌肝素管（肝素20 k U／L）充分抗凝，分装入两支试管，一支试管即刻送检；另一试管以1 200 r／min离心10 min，收集血浆，－30℃冰箱保存。

1.2.2 血浆IL－17水平测定 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）法，按试剂盒说明书操作。试剂盒购自上海迪奥生物制品公司（R＆D分装）。

1.2.3 CD4＋CD25＋Treg和淋巴细胞亚群的检测采用流式细胞术，试剂购自美国Beck man－Coulter公司。

1.3 统计学处理

应用SPSS 17.0及PPMS 1.5［2］统计学软件进行数据处理，结果以±s表示，数据间比较采用t检验，两变量间相关性采用直线相关分析法。

2 结 果

2.1 HSP病儿血浆IL－17水平变化

HSP组血浆IL－17水平为（86.65±13.90）ng／L，对照组为（29.75±21.65）ng／L，两组比较差异有极显著意义（t＝14.66，P＜0.01）。HSPN 组与NHSPN组血浆IL－17水平比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组血浆IL－17和CD4＋CD25＋Treg水平比较（±s）

表1 各组血浆IL－17和CD4＋CD25＋Treg水平比较（±s）

组 别 n IL－17（ρ／ng·L－1）CD4＋CD25＋Treg（χ／%）对 照 组 30 29.75±21.65 3.93±0.42 NHSPN组 31 89.48±11.22 2.22±1.09 HSPN组23 82.45±16.28 2.29±0.95

2.2 HSP病儿外周血CD4＋CD25＋Treg水平变化

HSP组病儿外周血CD4＋CD25＋Treg水平为（2.25±1.02）%，较对照组（3.93±0.42）%明显降低（t＝7.28，P＜0.01）。HSPN组与NHSPN组外周血CD4＋CD25＋Treg水平相比较，差异无显著意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 HSP病儿淋巴细胞亚群水平变化

与对照组比较，HSP组外周血CD4＋细胞比例明显降低，CD19＋细胞比例升高，差异有统计学意义（t＝4.363、7.370，P＜0.05）；CD3＋、CD8＋、CD3－CD56＋和CD3＋HLADR＋比例均无明显改变（t＝－1.30～1.98，P均＞0.05）。HSP组CD4＋CD25＋Treg的水平与CD4＋细胞呈正相关（r＝0.554，P＜0.01），而与CD19＋细胞呈负相关（r＝－0.305，P＜0.05）。而CD4＋CD25＋Treg水平与CD8＋细胞、CD3＋细胞、CD3－CD56＋细胞和CD3＋HLADR＋细胞则无相关性（r＝－0.109～0.287，P＞0.05）。见表2。

表2 HSP病儿外周血T细胞亚群检测（χ／%，±s）

表2 HSP病儿外周血T细胞亚群检测（χ／%，±s）

组别 n CD3＋ CD4＋ CD8＋对照组 20 61.80±7.24 30.94±7.53 25.85±5.17 HSP组 54 53.72±8.54 23.98±7.73 25.13±6.08组别 n CD3－CD56＋ CD19＋ CD3＋HLADR＋对照组 20 14.05±10.89 20.37±5.80 1.09±0.75 HSP组54 9.74± 5.92 33.81±9.42 3.10±1.95

2.4 HSP病儿血浆IL－17水平与CD4＋CD25＋Treg水平相关性

HSP病儿血浆IL－17水平与CD4＋CD25＋Treg细胞水平呈明显负相关（r＝－0.295，P＜0.05）。

3 讨 论

HSP是以小血管炎为主要病变的系统性血管炎，是儿童期最常见的免疫性血管炎，可出现紫癜样皮肤损害以及胃肠道、肾脏、关节等多个系统的损害。迄今为止，该病的病因及发病机制仍未完全阐明。前期大量研究结果表明，HSP病儿存在Th1／Th2亚群功能失调，尤其是Th2亚群功能亢进，表明HSP急性期存在免疫功能紊乱［3］。

Th17细胞是一种不同于Th1、Th2的CD4＋T细胞亚群，其分泌的最重要的效应因子是IL－17。IL－17与受体结合后，通过活化丝裂原活化的蛋白激酶和NF－k B发挥其生物学效应，并上调IL－1β、TNF－α、IFN－γ等炎症细胞因子的基因表达，促进机体炎症进展。Th17细胞还可分泌IL－6及TNF－α等以动员、募集和分化中性粒细胞，介导促炎症反应，在感染性疾病和自身免疫性疾病的病理过程中发挥重要作用。近期大量文献报道，冠心病、过敏性疾病和自身免疫性疾病如类风湿性关节炎病人IL－17表达增加［4－6］。本实验结果显示，HSP病儿血浆IL－17水平明显增高，与对照组比较差异有显著性，与文献［5］结果相符，说明异常增高的IL－17参与了HSP的发病，在HSP的病理过程中起到重要作用。本文结果还显示，HSPN组与NHSPN组血浆IL－17水平差异无显著性，提示急性期有无肾脏损害的HSP病儿外周血IL－17水平变化并无差异。

研究认为，HSP存在的T细胞功能紊乱不仅仅局限于Th2优势明显，调节性T细胞数量减少导致免疫抑制效应不足也可能是导致HSP免疫失衡的重要原因。Treg细胞是一群重要的同时具有免疫调节和免疫抑制双重作用的CD4＋T细胞，其参与了维持外周耐受及抑制自身免疫。Treg细胞既可通过细胞间直接接触、分泌抑制性细胞因子如IL－10、TGF－β等发挥抑制效应，还可下调抗原呈递细胞（APC）上CD80和CD86的表达来影响其抗原呈递能力，并诱导APC分解色氨酸，降低效应性T细胞活性，从而发挥抑制作用。由此可见，Treg细胞对机体免疫应答起着调节与抑制双重作用，使机体免疫系统既清除异物抗原，又不致损伤机体。本研究结果显示，HSP病儿CD4＋CD25＋Treg细胞水平较对照组显著降低，与文献［7］结果一致。HSP病儿CD4＋CD25＋Treg细胞与CD4＋细胞呈正相关，而与CD19＋细胞呈负相关，提示CD4＋CD25＋Treg细胞异常与HSP发病机制中免疫功能紊乱有密切的关系，表明HSP急性期存在Treg细胞免疫调节及对机体的免疫抑制功能不足，从而引发免疫紊乱。

近年来，Th17／Treg的平衡在维持免疫系统稳态中的作用越来越受到重视。Th17细胞和Treg细胞分别对自体免疫和炎症反应起正向和负向调控作用，同时两种细胞的分化也是互为逆反的过程。RORγt及Foxp3分别是Th17及Treg的特异性转录因子。当机体处于稳定状态下或无炎症损伤时，免疫系统产生的TGF－β浓度较高，可上调Foxp3的表达，诱导Treg的产生，从而维持机体的免疫耐受；而当机体发生感染时，炎症递质IL－6则大量产生，协同低浓度的TGF－β诱导RORγt的产生，从而促进Th17细胞的分化，介导前炎症反应［8］。由此可见，Th17／Treg平衡维持机体免疫平衡，一旦受感染、遗传体质影响，两者的平衡打破，便可引起机体全身或局部的免疫异常反应。既往研究已经证实，Th17增加和（或）Treg降低在大量的炎症和自身免疫性疾病如动脉粥样硬化、肾脏移植排斥等反应中发挥重要的作用［9－10］。本文的研究结果显示，儿童HSP急性期血浆IL－17水平显著增高，同时伴有CD4＋CD25＋Treg细胞明显降低，且两者呈明显负相关，表明在HSP急性期Th17细胞功能增强而CD4＋CD25＋Treg细胞免疫抑制效应不足，呈现Th17／Treg失衡状态。Th17／Treg失衡是导致HSP免疫紊乱的重要原因，在HSP发病机制中具有重要作用。如何调整这种平衡或许会为HSP的免疫治疗提供新思路，为临床治疗开辟新的途径。

［1］MILLS J A，MICHEL B A，BLOCH D A，et al.The American College of Rheu matology 1990 criteria for the classification of Henoch－Schonlein pur pura［J］.Art hritis Rheu m，1990，33（8）：1114－1121.

［2］周晓彬.医用统计学软件PPMS 1.5在医学科学研究中的应用价值［J］.青岛大学医学院学报，2011，47（6）：504－506.

［3］董胜英，陈彤，张秋业，等.过敏性紫癜病儿急性期外周血辅助性T淋巴细胞亚群功能的变化［J］.齐鲁医学杂志，2004，19（2）：134－136.

［4］CHENG X，YU X，DING Y J，et al.The Th17／Treg imbalance in patients with acute coronary syndr o me［J］.Clin Immunol，2008，127（1）：89－97.

［5］杨军，李成荣，王国兵，等.Th17细胞与CD4＋CD25＋TREG在儿童过敏性紫癜发病机制中的作用［J］.临床儿科杂志，2009，27（7）：645－648.

［6］YUAN R，MAEDA Y，LI W，et al.Erythr opoietin：a potent inducer of peripheral immuno－infla mmatory modulation in autoimmune EAE［J］.PLoS One，2008，3（4）：1924－1928.

［7］柏翠，宗金宝，张秋业.过敏性紫癜病儿急性期免疫细胞功能变化［J］.齐鲁医学杂志，2010，25（2）：137－139.

［8］PARK H，LI Z X，YANG X O，et al.A distinct lieage of CD4 Tcells regulates tissue inflammation by pr oducing interleukin 17［J］.Nat Immunol，2005，6（11）：1133－1141.

［9］AFZALI B，LOMBARDI G，LECHLER R I，et al.The role of Thelper 17（Th17）and regulatoryTcells（Treg）in human organ transplantation and autoimmune disease［J］.Clin ExpImmunol，2007，148（1）：32－46.

［10］CEDERBOM L，HALL H，IVARS F.CD4＋CD25＋regulatory Tcells down－regulate co－stimulatory molecules on antigenpresenting cells［J］.Eur J Immunol，2000，30（6）：1538－1543.