HPLC法测定健脾化瘀片中黄芪甲苷的含量

周洪合 张小平

HPLC法测定健脾化瘀片中黄芪甲苷的含量

周洪合①张小平②

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定健脾化瘀片中黄芪甲苷的含量。方法：采用高效液相色谱法，十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相：乙腈-水（35:65）；蒸发光检测器检测。结果：在1.00~10.05 μg范围内黄芪甲苷峰面积与进样量线性关系良好，r=0.9997；样品加样回收率为99.67%（n=6）。RSD为0.43。结论：所建立的方法准确可行，重复性好，可有效控制健脾化瘀片的质量。

健脾化瘀片； 黄芪甲苷； 高效液相色谱法

健脾化瘀片是由人参、黄芪、地黄、玄参、制何首乌、鬼箭羽、天花粉等中药经加工而制成的中药制剂，具有健脾益气、滋肾活血、化瘀清热功能，用于糖尿病、高粘、高脂血症等[1-3]。为控制本制剂的质量，实验以黄芪甲苷为指标，用高效液相色谱法测定其黄芪的含量。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent1100series高效液相色谱仪；Alltech2000型蒸发光散射检测器；SL-250超声波清洗器（220V/50HZ）；AUV120D电子分析天平。

1.2 试药 高效液相色谱用试剂均为色谱纯；对照品由中国药品生物制品检定所提供。健脾化瘀片为自制，批号：20120309、20120312、20120315。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（KromosiIC18，150×4.6 mm 5μm）。流动相：乙腈-水（35∶65）；理论塔板数以黄芪甲苷计算应不低于4000；蒸发光检测器检测：漂移管温度103 ℃，载气为氮气，流量为2.3 L/min。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取样品1 g，研细，精密称定，置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流提取5 h，提取液回收甲醇至干，残渣加水30 ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次30 ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤4次，每次30 ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得[4]。

2.4 阴性对照溶液的制备 取按处方量及制法工艺，同法制成全方缺黄芪的阴性对照，按样品供试液的制备方法制备，作为阴性对照溶液。

2.5 空白对照实验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行分析，记录色谱图，黄芪甲苷与其他组分完全分离，阴性对照溶液图谱在黄芪甲苷峰位置处无吸收峰，符合测定要求。见图1、图2、图3。

图1 黄芪甲苷对照品色谱图

图2 健脾化瘀片样品色谱图

图3 缺黄芪阴性样品色谱图

2.6 线性关系考察 精密称定80 ℃减压干燥至恒重的黄芪甲苷对照品10.05 mg，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液1.0、2.0、4.0、6.0、10.0 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各精密吸取10 μl进样，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件分别测定其峰面积，以峰面积为纵坐标（Y），以黄芪甲苷进样量为横坐标（X），进行线性回归，其回归方程为：Y=919312 X-462607，r=0.9997（n=5）；结果表明黄芪甲苷在1.00~10.05 μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验 每次精密吸取黄芪甲苷对照品溶液10 μl，共5次，进样，计算测得峰面积，RSD＝0.39%，证明仪器有良好的精密度[5]。

2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、24 h进样，测定样品中黄芪甲苷含量，RSD为0.42%，证明样品溶液在24 h内稳定。

2.9 重复性试验 取5份样品（为同一批号）按“2.3”方法操作，进样，记录峰面积，结果黄芪甲苷RSD=1.086%，表明具良好的重复性[6]。

2.10 回收率试验 采用加样回收法，取样品6份（同一批号），精密称定，分别加入黄芪甲苷一定量，按“2.3”方法操作，进样，记录峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 样品加样回收率试验结果

2.11 样品的测定 取样品3批，按“2.3”方法操作，与对照品溶液分别进样，记录峰面积（n=5），并对样品中黄芪甲苷含量进行计算，结果见表2。

表2 样品中黄芪甲苷含量

3 讨论

本文参考《中国药典》2010版一部中黄芪的含量测定方法测定健脾化瘀片中黄芪的含量，测定方法重复性好，结果可靠、准确，且操作简便，可有效控制该制剂的质量。

[1] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京:中国医药科技出版社，2010：283.

[2] 朱克旭，李永宏，刘冰冰.HPLC-ELSD法测定芪心合剂中黄芪甲苷的含量[J].安徽医药，2011，15（11）:1364.

[3] 涂兴明，余赐恩，吴康郁.高效液相色谱-蒸发光散射法测定伤骨健胶囊中黄芪甲苷的含量[J].中药材，2010，33（6）：999

[4] 姚琰，宋金春.HPLC-ELSD法测定复方黄芪心通颗粒中黄芪甲苷的含量[J].中国药师，2009，12（12）：1768

[5] 谭春梅，张文婷，赵维良.高效液相色谱-蒸发光散射法测定归脾丸中黄芪甲苷的含量[J].中国药业，2009，18（19）：31

[6] 王鹏，赵承孝，李青山，张淑秋.高效液相色谱-蒸发光散射测定蒙古黄中黄芪甲苷的含量及其提取工艺的优化[J].中国药物与临床，2010，10（2）：134

Determinasion of Astragaloside in Jianpihuayu Tablets by HPLC

ZHOU Hong-he，ZHANG Xiao-ping.

Objictive：To establish a method tk deternation of astragaloside in Jianpihuayu Tablets by HPLC.Method：High performance liquid chromatography.Octadecyl silane bonded silica gel chromatography column.Mobile phase:acetonitrile-water（35:65）;Evaporation light spread detector.Result：Astragalus A glycoside peak area and injection volume was 1.00~10.05 μg range a good linear relationship and correlateion coefficient was 0.9997.The average recorery of the added sample was 99.67%（n=6），RSD was 0.43%.Conclusion：The method is stable，accurate and precise for the quality control of Jianpihuayu Tablets.

Jianpihuayu Tablets; Astragaloside; HPLC

The Third People’s Hospital of Jinan City，Jinan 250101，China

Medical Innovation of China，2012，9（34）:156-157

10.3969/j.issn.1674-4985.2012.34.104

①济南市第三人民医院 山东 济南 250101

②济南市中医医院

2012-09-13） （本文编辑：连胜利）