高效液相色谱法测定显脉旋覆花药材中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量

陈 丹 李 柯 胡薏冰 史蕾喆 李若存

1.湖南湘潭职业技术学院药学教研组，湖南湘潭411102;2.湖南省中医药研究院;湖南长沙410013;3.中药新药研究与开发湖南省重点实验室，湖南长沙410013

高效液相色谱法测定显脉旋覆花药材中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量

陈 丹1李 柯2，3胡薏冰2，3史蕾喆2，3李若存2，3

1.湖南湘潭职业技术学院药学教研组，湖南湘潭411102;2.湖南省中医药研究院;湖南长沙410013;3.中药新药研究与开发湖南省重点实验室，湖南长沙410013

目的:建立显脉旋覆花药材中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，95%乙醇回流提取。色谱柱C18(Column 200×4.6mm，5μ)，流动相:乙腈－水 (65:35)，检测波长220nm。结果:麝香草酚在0.224～1.344μg范围呈良好的线性关系，r=0.9998;异丁酸百里香酯在0.132～0.792μg范围呈良好的线性关系，r=0.9996;平均回收率:麝香草酚97.94%，RSD为1.28%;异丁酸百里香酯99.09%，RSD为1.34%。重复性试验的RSD分别为麝香草酚1.0%、异丁酸百里香酯1.0%。结论:该方法可靠、便捷，可以作为控制显脉旋覆花药材质量的方法。

显脉旋覆花;云威灵;毛秀才;麝香草酚;异丁酸百里香酯;高效液相色谱法;含量测定

1 仪器、试剂与药材

Perkin Elmer高效液相色谱仪 (美国PE公司);C18(Column 200×4.6mm，5μ)色谱柱 (大连依利特分析仪器有限公司);EC2006色谱数据处理系统 (大连依利特分析仪器有限公司)。UV－2450型紫外可见分光光度计 (日本岛津)。麝香草酚购于中国药品生物制品检定研究院，批号:100508－200902，异丁酸百里香酯自制，GC含量测定纯度达到98%以上。甲醇、乙腈 (色谱纯试剂，天津科密欧化学试剂有限公司)，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯 (均为湖南汇虹试剂有限公司提供)。药材购自云南鸿翔药业有限公司，经湖南省中医药研究院中药研究所生药研究室鉴定为菊科植物显脉旋覆花Inula nervosa Wall的干燥根及根茎。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈－水 (65∶35)为流动相;检测波长为220nm。理论板数按麝香草酚峰计不低于10000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取麝香草酚对照品11.2mg、异丁酸百里香酯对照品6.6mg，置100ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末 (过三号筛)约1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入95%乙醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用95%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 精密吸取对照品混合溶液 (麝香草酚C=0.112mg/ml、异丁酸百里香酯C=0.066mg/ml)2、4、6、8、10、12μl进样，测定其峰面积。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程:麝香草酚Y=2335.9x+17.575，r=0.9998;异丁酸百里香酯Y=1480.3x+6.5107，r=0.9996。结果表明麝香草酚在0.224～1.344μg，异丁酸百里香酯在0.132～0.792μg范围内具有良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取显脉旋覆花药材按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液。精密吸取10μl，连续进样6次，测定其峰面积，计算麝香草酚和异丁酸百里香酯峰面积RSD分别为0.7%和2.2%。

2.6 稳定性试验 取2.5项下的供试品溶液，精密吸取10μl，于0、4、8、12、24小时进样，测定其峰面积。计算，麝香草酚与异丁酸百里香酯RSD分别为1.4%和1.6%，说明24h内供试液稳定性良好。

2.7 重复性试验 取同一批药材制成供试品溶液6份，测定含量。结果麝香草酚与异丁酸百里香酯RSD分别为1.0% 和1.0%，说明方法重复性好。

2.8 回收率试验 精密称取6份已知含量的本品0.3g，每份加入麝香草酚约1mg和异丁酸百里香酯0.3mg，按供试品测定项下测定。麝香草酚平均回收率为97.94%，RSD为1.28%;异丁酸百里香酯平均回收率为99.09%，RSD为1.34%。结果见表1、表2。

2.9 样品含量测定 取5个不同批号显脉旋覆花药材，按供试品溶液的制备方法制备成供试液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，测定，即得。结果见表3、图1、图2。

表1 麝香草酚回收率测定结果表

表2 异丁酸百里香酯回收率测定结果表

表3 样品含量测定(n=3)

图1 麝香草酚与异丁酸百里香酯HPLC色谱图3－麝香草酚 4－异丁酸百里香酯

图2 显脉旋覆花药材HPLC色谱图5－麝香草酚 6－异丁酸百里香酯

3 讨论

3.1 含量测定指标成分的选择 显脉旋覆花的功能为祛风湿、通络止痛、健胃消食。经研究抗炎镇痛主要有效部位为挥发油，我们将其开发成5类中药新药 (云威灵油软胶囊)治疗类风湿性关节炎患者［7－9］。麝香草酚、异丁酸百里香酯二者之和占挥发油总量的70%以上，并且为抗炎镇痛的主要有效成分，所以我们选择了麝香草酚和异丁酸百里香酯作为显脉旋覆花药材含量控制指标，经方法学考察和5个不同批号样品的测定表明该方法可靠、便捷，可以作为控制显脉旋覆花药材的质量方法。

3.2 波长的选择 选择色谱条件时，曾试用274nm的波长进行检测，结果异丁酸百酯含量很低，后经紫外检测，发现220nm波长下麝香草酚与异丁酸百里香酯都有较大的吸收，所以选择220nm做为检测波长。

3.3 麝香草酚和异丁酸百里香酯在药材中的含量 实验结果表明不同批号的显脉旋覆花中麝香草酚和异丁酸百里香酯含量差异较大，可能与生长环境、采收季节有关，所以本研究采用同时测定2个成分的含量作为质量控制方法。显脉旋覆花中麝香草酚和异丁酸百里香酯含量与产地、采收季节的相关性正在研究中。

3.4 药用部位 《云南省中药饮片标准，2005年版》第一册收载的云威灵为显脉旋覆花的干燥根及根茎，《湖南省中药材标准，2009年版》收载的毛秀才为显脉旋覆花的干燥全草，而记载的功能都是祛风除湿、通络止痛、健胃消食。显脉旋覆花的茎与叶与根茎是否有相同的化学成分，需要进一步研究。

［1］朱亚，贺安娜.毛秀才的本草考证及现代研究进展［J］.中国民族医药药杂志，2011，10:36～38.

［2］蒋向辉，佘朝文.侗药毛秀才生物学特性及引种栽培研究［J］.怀化学院学报，2011，30(8):20～22.

［3］胡薏冰，柳克铃，李若存.GC法测定云威灵软胶囊中麝香草酚和异丁酸百里香酯的含量研究［J］.中医药导报，2007，13(7):98～115.

［4］吉力，汪芳，刘元艳，等.高效液相色谱法测定香薷药材中香芹酚和麝香草酚的含量［J］.中国中药杂志，2004，29(11):1031～1032.

［5］林志云，潘利明.高效液相色谱法测定云威灵药材中麝香草酚的含量［J］.广东药学院学报，2008，24(1):9～11.

［6］吉力，仝燕，李先端，等.香薷止泻胶囊的质量标准研究［J］.中国实验方剂学杂志，2004，10(4):1～3.

［7］云南省食品药品监督管理局.云南省中药饮片标准［S］.第一册.昆明:云南美术出版社，2005:24－25，127－128.

［8］湖南省食品药品监督管理局.湖南省中药材标准［S］.长沙:湖南省科技出版社，2010:197.

［9］胡薏冰，柳克铃，李若存.云威灵挥发油中活性物质异丁酸百里香酯对照品的制备［J］.中南药学，2007，5(4):326～327.

Determination of thymol and thymyl isobutyrate in Inula nervosa Wall by HPLC

CHEN Dan1，LI Ke2，3，HU Yi－ bing2，3，SHI Lei－ zhe2，3，LI Ruo － cun2，3
1.Xiangtan Vocational and Technical College，Pharmic Research，Hunan Province Xiangtan 411102，China;2.Hunan Academy of TCM;3.Key Laboratory of Research and Exploiture of Traditional Chinese Medicine in Hunan Province，Changsha 410013，China

Objective:To establish a quantitative method for determining the content of thymol and thymyl isobutyrate in Inula nervosa Wall.Method:The sample was extracted with 95%ethanol，then analyzed on a C18 column using acetonitrile － water(65:35)as mobile phase.The detection wavelength was set at 220nm.Results:The linearities of thymol and thymyl isobutyrate were respectively in the range of 0.224 ～1.344μg(r=0.9998)and 0.132 ～0.792μg(r=0.9996);the average recoveries were 97.94%(RSD 1.28%)and 99.09%(RSD 1.34%);the RSD of repeatability were 1.0%and 1.0%.Conclusion:The method is reliable and rapid for quality control of Inula nervosa wall.

Inula nervosa Wall;Yunweiling;Maoxiucai;thymol;thymyl isobutyrate;HPLC

R927.2

A

1007－8517(2012)21－0045－03

显脉旋覆花是菊科植物显脉旋覆花lnula nervosa Wall.ex DC.的干燥根及根茎，具有祛风除湿、通络止痛、健胃消食的功能，为民间治疗风湿和跌打损伤的常用药物［1］［2］。麝香草酚与异丁酸百里香酯为显脉旋覆花抗炎、镇痛、抑制机体免疫反应的主要有效成分［3］。据报道麝香草酚与异丁酸百里香酯含量测定采用气相色谱法测定，麝香草酚用高效液相色谱法测定［4－6］，未见有高效液相色谱法麝香草酚与异丁酸百里香酯的报道，为有效地控制显脉旋覆花药材的质量，本文建立了用高效液相色谱法测定显脉旋覆花药材中麝香草酚与异丁酸百里香酯的含量，同时，测定了不同批号的显脉旋覆花药材。

陈丹，讲师，研究方向:中药制剂工艺与质量制。E－mail:chend0915@163.com。

李若存，研究员，硕导。E－mail:ruocun2003@yahoo.com.cn。

2012.09.20)