类风湿关节炎及系统性红斑狼疮患者血液免疫指标的分析与比较

谢健敏 莫石兰 叶珮玑

广东省佛山市顺德区第一人民检验科，广东佛山 528300

类风湿关节炎及系统性红斑狼疮患者血液免疫指标的分析与比较

谢健敏 莫石兰 叶珮玑

广东省佛山市顺德区第一人民检验科，广东佛山 528300

目的分析和比较类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）及系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）患者血液中的免疫指标，从而实现对这两种自身免疫性疾病的准确诊断。方法分别选择RA患者46例为RA组、SLE患者40例为SLE组、健康体检者30例为对照组，用间接免疫荧光法检测血清抗核抗体（ANA），免疫印迹法检测可提取核抗原（ENA）多肽抗体及ds-DNA，分析各种抗体在不同患者组和对照组的阳性率。结果在RA患者组中，ANA阳性率为37.0%，抗ds-DNA抗体阳性率为13.0%，抗ENA多肽抗体阳性率为19.6%，三种抗体联合检测阳性率为50.0%；SLE患者组中，阳性率相应分别为92.5%、70.0%、87.5%以及95.0%。结论自身免疫性疾病患者体内存在多种自身抗体，ANA、抗ds-DNA、抗ENA多肽抗体联合检测可以相互补充，提高检出率，有利于自身免疫性疾病的诊断，避免误诊和漏诊。

类风湿关节炎；系统性红斑狼疮；血液免疫指标；抗核抗体；抗ds-DNA；抗ENA多肽抗体

自身免疫性疾病（autoimmune disease）是指由机体自身产生的抗体或致敏淋巴细胞破坏、损伤自身正常的组织和细胞成分，导致组织损害和器官功能障碍的原发性免疫性疾病[1]。类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以多发性和对称性增生性滑膜炎为主要表现的慢性全身性自身免疫性疾病，该病发病年龄为25～55岁，也可见于儿童，女性发病率比男性高3～5倍，绝大多数患者血浆中有类风湿因子（rheumatoid factor，RF）及其免疫复合物存在；系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）也是一种比较常见的全身性自身免疫病，由抗核抗体（antinuclear antibodies，ANA）为主的多种自身抗体引起，多见于年轻女性，男女之比接近1∶10[2]。本研究通过分析和比较RA及SLE患者血液中的免疫指标，主要包括ANA、抗双链DNA抗体（double-stranded DNA，抗ds-DNA抗体）以及抗ENA多肽抗体谱（extractable nuclear antigen， ENA，可提取核抗原），从而实现对这两种自身免疫性疾病的准确诊断，避免漏诊误诊，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2009年1月～2011年12月来我院接受治疗的RA患者和SLE患者共86例。RA组46例，其中男10例，女36例，年龄17～61岁，平均年龄51.4岁，均符合1987年美国风湿病学会修订的关于RA的诊断标准；SLE组40例，其中男5例，女35例，年龄20～64岁，平均（52.6±3.5）岁，均符合1982年美国风湿病学会制订的关于SLE的诊断标准；对照组：选取在我院进行体检的健康者30例，其中男8例，女22例，年龄21～60岁，平均（54.1±5.4）岁，均没有自身免疫性疾病和其他传染病，年龄、性别等一般治疗资料与RA组和SLE组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 血样采集

在清晨9点左右采血，患者及健康体检者均需空腹，采集肘静脉血4mL（非抗凝血），离心机5 000 r/min，离心5min，取上清，-30℃冷冻保存，待测。

1.3 检测方法

ANA检测采用德国欧蒙公司试剂盒，以鼠肝和鼠肾为底物的间接免疫荧光法，同时以核质丰富的Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物提高ANA检测的阳性率，操作步骤严格按照试剂说明书进行。

检测ENA多肽抗体和抗ds-DNA抗体采用免疫印迹法，使用德国IMTEC试剂盒，严格按照说明书操作，先用孵育缓冲液以1∶101稀释血清，在每槽中加入1 mL孵育缓冲液浸条膜1min后吸干液体，每槽中加入1mL稀释血清样本，于室温中在摇床上轻微晃动孵育30 min，然后取出反应槽，吸干，每槽加入1.5 mL稀释洗涤液，在摇床上轻微晃动洗涤3次，每次5min，吸干，每槽加入1 mL液，室温下在摇床上轻微晃动孵育30min，同前再洗涤4次后加入显色剂A 0.5mL+显色剂B 0.5mL，作用5～10min，待阳性带显色清晰后加入0.5mL终止液，2min后弃去液体，洗涤，将薄膜上的显色带与阳性标准带对照即可判断出阳性自身抗体。

1.4 统计学方法

采用POMS医用统计程序库对实验数据进行统计学处理，计数资料以率表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ANA检测结果

ANA阳性检测结果主要表现为4种核型：均质型、颗粒型斑点型、核仁型、核膜型（核周型）[3]。RA患者组中，ANA阳性17例，占37.0%，其中均质型最多，有10例（58.8%），斑点型次之，有5例（29.4%）；SLE患者组中，ANA阳性37例，占92.5%，其中斑点型最多，25例（67.6%），核膜型次之，7例（18.9%）。见表1。

表1 ANA检测结果分析[n（%）]

2.2 抗ds-DNA抗体检测结果

抗ds-DNA抗体检测结果，RA组中，6例（13.0%）表现为阳性，40例（87.0%）为阴性；SLE组中，28例（70.0%）表现为阳性，12例（30.0%）为阴性。见表2。

表2 抗ds-DNA抗体检测结果分析[n（%）]

2.3 ENA多肽抗体谱检测结果

ENA多肽抗体谱检测结果为，RA组9例表现为阳性，占19.6%，抗-Sm、抗-RNP、抗-Ro、抗-La阳性率分别为0、 10.9%、8.7%、13.0%；SLE组35例表现为阳性，占87.5%，抗-Sm、抗-RNP、抗-Ro、抗-La阳性率分别为22.5%、37.5%、30.0%、12.5%。见表3。

表3 ENA多肽抗体谱检测结果分析[n（%）]

2.4 三种抗体联合检测结果

RA组ANA、抗ds-DNA抗体、ENA多肽抗体三种抗体的联合检测阳性率为50.0%（23/46），SLE组三种抗体联合检测阳性率为95.0%（38/40），均明显高于三种抗体单独检测时表现出的阳性率，差异均有统计学意义（P＜0.05）。健康对照组三种抗体的检测阳性率均为0。见表4。

表4 三种抗体联合检测结果分析[n（%）]

3 讨论

ANA又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白（DNP），与DNA、ENA和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称[4]。ANA在多种自身免疫病中均呈现不同程度的阳性率，在本研究中，RA组和SLE组均检测出了ANA阳性，阳性率分别为37.0%和92.5%，因此ANA检测可以成为自身免疫性疾病的初筛指标，尤其是在SLE的诊断中有较重要的意义，但不能够作为诊断RA或者SLE的特异性指标。ANA阳性检测结果主要表现为4种核型：均质型、斑点型、核仁型、核膜型（核周型），RA患者以均质型最多，占58.8%，斑点型次之，占29.4%；SLE患者以斑点型最多，占67.6%，核膜型次之，占18.9%。由此可见，RA主要对应均质性，SLE主要针对斑点型，且这两种核型不会同时均较高比例的出现在同一种疾病中。

高浓度的抗ds-DNA抗体几乎仅见于SLE，因此抗ds-DNA抗体是诊断SLE的一项重要指标，是SLE的高度特异性抗体[5]。且抗ds-DNA抗体与疾病活动程度，特别是SLE密切相关，因此可以用来作为SLE的诊断和疗效观察的指标[6]。本研究中，抗ds-DNA在RA患者组和SLE患者组的阳性率分别为13.0%和70.0%，健康对照组为检出阳性，因此是特异性很高的诊断指标。但抗ds-DNA抗体检测阴性不能排除SLE，可能是由于血液中存在较多的游离DNA抗原，与对应抗体结合，导致抗ds-DNA抗体降至阴性。

抗ENA抗体是能够特异性识别ENA的一种自身抗体，主要包括抗-Sm抗体、抗-Ro抗体、抗-RNP抗体、抗-La抗体等。不同的自身免疫性疾病产生的抗ENA多肽抗体谱不同，且各种抗体的检测阳性率也不相同[7-8]。本研究中，RA患者中，未检测出抗-Sm抗体，且抗-RNP抗体、抗-Ro抗体、抗-La抗体的阳性率分别为10.9%、8.7%、13.0%；SLE患者中，抗-Sm、抗-RNP、抗-Ro、抗-La阳性率分别为22.5%、37.5%、30.0%、12.5%。由此可见，在不同的自身免疫性疾病中ENA抗体谱呈现不同的组合，有些抗体仅出现于某种疾病中，成为诊断该病的重要指标，如抗-Sm抗体进出现在SLE中，是该病检测的特异性指标。

本文中，三种抗体联合检测，RA患者组和SLE患者组的检测阳性率分别为52.2%和95.0%，均明显高于三种抗体单独检测时表现出的阳性率（P＜0.05），提示多种抗体联合检测可以相互补充，提高检出率，有利于自身免疫性疾病的诊断。综上所述，临床上应该采用多项指标联合检测用于自身免疫性疾病的诊断，从而避免漏诊和误诊。

[1]胡坚．原发性免疫缺陷病与自身免疫现象[J].实用儿科临床杂志，2007，23（21）：1605-1607.

[2]Chloraki-Bobota A，Megalakaki C，Repousis P，et al.Prevalence of autoantibodies（ANA，anti ds-DNA，ENA，IMF）and rheumatic syndromes in patients with lymphoproliferative diseases[J].JBUON，2006，11（4）：485-489.

[3]陈兴国，张小利，刘春燕，等.系统性红斑狼疮患者血清抗dsDNA抗体的表达水平变化及临床意义分析[J].放射免疫学杂志，2008，16（1）：6-8.

[4]邹自英，李素华，陈莉.13种自身抗体检测对SLE的诊断价值及临床意义[J].细胞与分子免疫学杂志，2007，23（5）：443-446.

[5]马悦，邓春艳，徐国莉.抗核小体抗体在系统性红斑狼疮诊治中的应用价值[J].中国实验诊断学，2008，12（1）：135-136.

[6]潘扬，华江.抗SmDI抗体在系统性红斑狼疮诊断中的应用研究[J].临床检验杂志，2008，26（1）：23-24.

[7]Hoxha A，Ruffatti A，Grypiotis P，et al.Antinudear，anti-dsDNA and anti-ENA antibodies in patients affected with rheumatoid arrhritis or ankylesing spondylitis during treatmentwith infliximab[J].Renmatismo，2006，58（2）：121-126.

[8]邹世勇.不同非甾体抗炎药治疗类风湿关节炎的临床疗效及对心血管的影响研究[J].中国医药科学，2012，2（10）：68.

Analysis and comparison of serum immune index in patients with rheumatoid arthritis or system ic lupus erythematosus

XIE Jianmin MO Shilan YE Peiji
Department of Clinical Laboratory,the First Hospital of Shunde District in Foshan City,Guangdong Province,Foshan 528300,China

ObjectiveTo analyze and compare the serum immune index of rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus and to achieve an accurate diagnosis of these two kinds of autoimmune diseases.Methods46 cases of RA patients were selected as RA group and 40 cases of SLE patients were selected as SLE group,30 cases of healthy persons as the control group,indirect immunofluorescence assay was used to detect the serum ANA,Western blotwas used to detect the ENA polypeptide antibody and ds-DNA,the positive rate of variety of antibodies in RA group,SLE group and control group.ResultsIn RA group,the positive rate of ANA was 37.0%,the positive rate of anti ds-DNA antibody was 13.0%, the positive rate of anti-ENA peptide antibody was 19.6%,positive rate by joint detection was 50.0%.In SLE group,the positive rate were 92.5%,70.0%,87.5%and 95.0%correspondingly.ConclusionPatientswith autoimmune disease always have variousauto antibodies,jointdetection of ANA,antids-DNA and anti-ENA polypeptide antibody can improve the detection rate,they have the advantage of diagnosis of autoimmune diseases,also can avoid misdiagnosis andmissed diagnosis.

Rheumatoid arthritis;Systemic lupus erythematosus;Blood immune indicators;ANA;Anti-ds-DNA;Anti-ENA polypeptide antibody

R593.2

A

1673-7210（2012）11（b）-0043-03

2012-07-04 本文编辑：李继翔）