对苦杏仁燀炒炮制意义的商榷

陈俊怡，贾天柱，2＊

（1.辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连116600；2.辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连116600）

苦杏仁为蔷薇科植物山杏（Prunus armeniaca L.var.ansu Maxim.）、西伯利亚杏（Prunus Sibirica L.）、东北杏（Prunus mandshurica Koehne）、杏（Prunus armeniaca L.）的干燥成熟种子［1］，具有降气止咳、平喘、润肠通便的作用。苦杏仁炮制方法历史悠久，初见于汉代《金匮要略》去皮尖炒；《雷公炮炙论》有“沸汤浸少时去皮膜”，此应为燀法的开始。《外台秘要》有“麸炒”等记载［2］。《中国药典》从1963年版开始收载苦杏仁的燀法炮制，到1977年版只收生苦杏仁，从1985年版至2010版药典一部苦杏仁的炮制均为燀苦杏仁和燀炒苦杏仁。苦杏仁主要成分为脂肪油和苦杏仁苷，在适宜条件下，如水浸、受潮等条件下，苦杏仁苷会被共存的苦杏仁苷酶水解，产生氢氰酸，大量氢氰酸可麻痹呼吸导致中毒，甚至死亡，所以苦杏仁不能过量使用。临床应用时，苦杏仁必须炮制，以达到杀酶保苷的目的［3］。其炮制方法有干热法和湿热法，如炒法、燀法、燀炒法、蒸法等。所有炮制方法都以最大限度地破坏酶的活性、最大限度地保留苦杏仁苷的含量为考察指标。无论哪一种炮制方法，只要是加热，都能很好地达到杀酶保苷的作用。燀后再炒，多带有焦斑，使白苦杏仁变得黑黢黢，不但表观难看，还会造成能源、资源的浪费。但也有人认为苦杏仁燀后再炒能更好地杀酶，并降低毒性。那么燀后再炒的实际炮制效果到底如何，杀酶保苷作用能否更强，以及能否明显降低其毒性，我们对此进行了相关研究。

1 仪器、试药与动物

1.1 仪器

铁研船；岛津LC－10Tvp高效液相色谱仪、SPD－10AVP紫外检测器（日本岛津）、N2000色谱工作站；KQ－250型超声清洗器（昆山市仪器有限公司）；Sarto－rius Dp225D型电子天平；101型恒温电热鼓风干燥箱（北京市永光明医疗仪器厂）；微波炉（格兰仕 G80F20CN2L－B8）；LXJ－84－01型离心机（北京医疗仪器修理厂）；注射器，灌胃针。

1.2 试剂

苦味酸钠试纸，氢氧化钠溶液，硫酸亚铁溶液，稀盐酸，三氯化铁试液。分析纯甲醇，色谱纯甲醇，磷酸（天津科密欧试剂开发中心）。苦杏仁苷对照品购自上海源叶生物有限公司，经HPLC法测定纯度＞98.5%。药材：苦杏仁购于安国药材市场，对照药典由性状和苦杏仁苷含量鉴定为蔷薇科植物杏（Prunus armeniaca L.）的干燥成熟种子。

1.3 动物

昆明种小鼠（18～22g）购自大连医科大学实验动物中心，合格证号SCKK（辽）2008－0002。

2 方法与结果

2.1 炮制品制备

生苦杏仁：取原药材，除去杂质、残留的核壳及褐色油粒；炒苦杏仁：取净苦杏仁50g，投入以温度计测量锅底温度为130℃～140℃的铁锅内，炒7min至有爆鸣声，除去种皮表面呈微黄色，断面淡黄色，有香气时，取出放凉。燀苦杏仁：取净苦杏仁50g，置500mL沸水中，加热煮约5min，至膨胀，种皮易脱落时，捞出，置冷水稍浸，立即取出，搓去种皮，干燥，筛去种皮［4］。燀炒苦杏仁：取干燥的燀苦杏仁50g，置锅内，125℃～135℃炒约5min至表面微黄色，有香气时，取出放凉。蒸苦杏仁：取净苦杏仁50g，置蒸锅内，厚度掌握在2cm以下，流通蒸汽加热45min，取出，去皮，干燥。以上炮制品均平行制备3份。

2.2 苦杏仁酶活性检验

苦味酸钠试验：分别取以上5种炮制品，粉碎（粉末过2号筛），取0.5g，置试管中，加水数滴使之湿润，在试管口悬挂一条苦味酸钠试纸，管口用软木塞塞紧，将试管置40℃～50℃水浴中加热，数分钟后，若样品中仍残留苦杏仁苷酶，则苦杏仁苷水解释放出氧氰酸，与苦味酸钠作用，使试纸由橙黄色变成砖红色。普鲁士蓝试验：分别取以上6种炮制品，粉碎（粉末过2号筛），取0.8g，置试管中，加水湿润，立即用氢氧化钠溶液湿润的试纸将管口包紧，置40℃～50℃水浴中加热，在滤纸上加硫酸亚铁溶液1滴、稀盐酸1滴、三氯化铁试液1滴，观察30min内滤纸是否显蓝色。结果见表1。

表1 各炮制品苦杏仁酶活性检验结果

苦味酸钠试验和普鲁士蓝试验均是定性鉴别苦杏仁苷酶解产生的氢氰酸，变色时间的长短和变色程度反应了氢氰酸的释放速度和释放量。氢氰酸的释放速度和释放量与酶的含量正相关。定性鉴别结果显示，生品中酶的活性最强，最先变色；而在优选条件下的各炮制品，均能将苦杏仁酶较完全灭活。

2.3 苦杏仁各炮制品苦杏仁苷含量比较

HPLC色谱条件：色谱柱为agilentCT－18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈－1%磷酸水溶液（20∶80），流速为1.0mL／min；柱温为30℃；检测波长为210nm；进样体积为10μL。

2.3.1 对照品溶液的制备和标准曲线的绘制

精密称取苦杏仁苷对照品24.01mg，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度。再分别吸取0.2、0.5、0.8、1.0、1.2、1.5mL置10mL量瓶中，加甲醇至刻度。分别吸取上述6份对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，分析测定峰面积。以各样品的浓度（X，mg／mL）对峰面积（Y，mAu）进行线性回归，得回归方Y＝7465479X－126436，r＝0.9997，线性范围0.048～0.36mg／mL，线性关系良好。

2.3.2 供试品溶液的制备

分别取以上5种炮制品，粉碎（粉末过2号筛），精密称定约0.25g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇40mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇不足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，过0.45μm微孔滤膜，即得。

2.3.3 方法学考察

精密度试验：取同一供试品溶液，重复进样6次，同上色谱条件测得苦杏仁苷峰面积RSD＝1.2%，表明精密度良好。稳定性试验：取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10h时进样，同上色谱条件测得苦杏仁苷峰面积RSD＝1.2%，表明供试品溶液在10h内稳定。重复性试验：取同一批次药材，按“2.1”和“2.3.2”项下方法制备6份供试品溶液分别进样，同上色谱条件测得苦杏仁苷峰面积RSD＝1.7%，结果表明本方法重现性良好。加样回收率试验：精密称取6份已测知含量的供试品各约0.5g，每份添加苦杏仁苷对照品适量，按“2.3.2”项下方法制备并分别进样，同上色谱条件测得苦杏仁苷平均回收率为99.3%，RSD＝1.9%，结果表明本方法准确率高。

2.3.4 含量测定

抽取各供试品溶液10μL注入液相色谱仪，记录峰面积，计算苦杏仁苷含量，结果见表2。

表2 各炮制品苦杏仁苷百分含量

2.4 炮制方法对苦杏仁储藏的影响比较

在各炮制品密封储存60天后再次按“2.3.2”项下方法制备并分别注入液相色谱仪，测定含量，结果见表3。

表3 储存后各炮制品苦杏仁苷百分含量

2.5 急性毒性比较

2.5.1 供试品制备［6］

分别取上述5种炮制品粗粉（过二号筛）各50g，分别精密称定，备用。量取500mL水置锅内加热至沸，加入苦杏仁粗粉，迅速加热至沸，保持微沸，煎煮提取30min，稍冷后3层纱布滤过，各药渣再加水400mL，同上煎煮提取30min，稍冷后3层纱布滤过，轻轻挤压滤布，使滤液滤尽，合并滤液，减压浓缩至约20mL，浓缩液3 000r／min离心15min，倾尽上清液，移入25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为急性毒性用药（每1mL相当于苦杏仁炮制品2g）。

2.5.2 急性毒性试验方法

预试验给予小鼠生苦杏仁后下水煎液，灌胃前禁食不禁水12h，3只小鼠全死的剂量为48g／kg，3只全不死的剂量8g／kg。根据预试验结果以35g／kg为最大给药量，0.7为稀释系数，分为三个剂量组，每组小鼠雌雄各6只，体重18～22g，每只小鼠0.02mL／g，给药后观察7天，记录其中毒状况及死亡率。以生苦杏仁给药量作为参考，给予小鼠炒苦杏仁、燀苦杏仁、燀炒苦杏仁、蒸苦杏仁溶液，以35g／kg为最大给药剂量，以0.7为稀释等级系数，给药方法、观察指标同生苦杏仁水煎液。

2.5.3 结果

小鼠给药后出现少动、呼吸急促等症状，1h左右出现震颤，卧而不动，约4h出现呼吸极弱，最后抽搐挣扎而死亡。多数死亡小鼠中毒症状及时间相似，死亡小鼠解剖各组织均无明显病理改变。急性毒性LD50和95%的可信度区间利用统计软件SPSS根据Bliss法计算，结果见表4。组间LD50两两比较，燀苦杏仁与燀炒苦杏仁组t检验（P＜0.01），无统计学差异，提示燀苦杏仁和燀炒苦杏仁组急性毒性无明显区别。

表4 各炮制品急性毒性LD50和95%的可信度区

3 讨论

本文“2.1”采用的各炮制方法，均经过查阅文献和实际试验探索，根据对酶的灭活与有效成分含量的保留优选工艺参数所得到的。由于本文主要研究苦杏仁炮制中燀后炒的意义，其优选过程不再列出。在前期的文献查阅中，有报道［7］说燀苦杏仁在较长时间的储存后，苦杏仁苷含量会有明显下降，而燀炒品则不会。因此进行了炮制方法对苦杏仁储藏的影响研究。结果证明，采用优选的工艺参数分别炮制的燀品与燀炒品，在干燥通风处储存60天后，燀品苦杏仁苷含量的下降程度仅略大于燀炒品。这是燀炒品重复加热，酶破坏彻底所致，但无显著差异，而且其它炮制品如果严格掌握炮制温度和时间的话也完全可以达到。

通过急性毒性试验，发现各炮制品急性毒性与供试液中苦杏仁苷含量呈正相关。炒苦杏仁、燀苦杏仁、燀炒苦杏仁的苦杏仁苷含量差异较小，其对小鼠的半数致死量LD50也没有显著性差异。燀炒品毒性与其他炮制品比较，毒性略低，但也不显著。其降低原因显然是因为重复加热使苦杏仁苷降低所致。苦杏仁中是否还有除苦杏仁苷外的毒性物质，还有待进一步研究。

苦杏仁炮制的主要目的就是杀酶保苷，在杀酶的同时，最大程度地保留苦杏仁苷。无论用干热法还是用湿热法，均可达此目的。根据研究结果，燀炒苦杏仁使苦杏仁苷降低较多，工艺较繁琐，造成资源和能源上的浪费，且外形不美观，因此建议炮制苦杏仁不采用燀炒法。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国药典［S］.北京：人民卫生出版社，2010：187.

［2］朱卫星.中药苦杏仁炮制的研究概况［J］.中国药业，2007，18（24）：1907－1908.

［3］侯嵘峤.苦杏仁的炮制原理［J］.沈阳药科大学学报，1997，14（2）：130.

［4］叶定江，张世臣.中药炮制学［M］.北京：人民卫生出版社，1999：583.

［5］李勉.苦杏仁不同炮制品苦杏仁苷含量测定［J］.河南大学学报：医学版，2006，25（4）：44.

［6］李贵海.不同炮制对苦杏仁毒性及止咳平喘作用的影响［J］.中国中药杂志，2007，32（12）：1247－1250.

［7］阎敏，廖建萍.贮存条件对苦杏仁质量的影响［J］.中国药物与临床，2009，20（1）：72－74.