肝细胞肝癌中HBX趋化因子受体CXCR4及配体CCR7与MMP9的相关性分析

黄 为 (潜江市卫生局卫生监督局，湖北 潜江 433100)

胡晓立 (潜江市中心医院外一科，湖北 潜江 433100)

肝细胞肝癌中HBX趋化因子受体CXCR4及配体CCR7与MMP9的相关性分析

黄 为 (潜江市卫生局卫生监督局，湖北 潜江 433100)

胡晓立 (潜江市中心医院外一科，湖北 潜江 433100)

目的：观察趋化因子受体CXCR4及配体CCR7与基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase，MMPs)在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达和临床病理学意义。方法：用免疫组织化学法检测HCC组织40例中CXCR、CCR7和MMP9表达，并将上述检测结果结合临床资料进行相关性分析。结果：40例癌组织中20例呈CXCR4高表达，19例呈CCR7高表达，23例MMP9高表达，CXCR、CCR7和MMP9在HCC中，均与HCC病理分级和门静脉癌栓以及复发转移有明显正相关；CXCR、CCR7均与MMP9呈明显正相关。结论：CXCR、CCR7联合 MMP9可以作为评估HCC恶性程度和复发转移的肿瘤标志物。

原发性肝癌；趋化因子受体CXCR4；趋化因子受体配体CCR7；基质金属蛋白酶9；病理分型

肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是常见的恶性肿瘤,其发病率在全世界高居第5位，病死率高[1]。通过有效的肿瘤标志物判断HCC的恶性程度，进行针对性的诊治在近年来越来越受到重视。研究显示，趋化因子受体CXCR4与其配体CCR7构成的生物学轴与多种肿瘤的趋向性侵袭、转移及预后相关。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)9可降解肿瘤细胞基底膜和细胞外基质的蛋白成分，瘤细胞周围基底膜通透性和运动能力发生变化[2]，从而改变肿瘤细胞的转移潜能。然而，CXCR4及其配体CCR7与MMP9的相关性却尚不明确。我们将探究人HCC标本中CXCR4/CCR7和MMP9的表达及临床意义，并进一步分析其相关性，现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1材料

选取2005年9月至2010年10月潜江市中心医院HCC患者肿瘤手术切除标本40例，患者年龄30～72岁，平均年龄52岁，术前均未行任何治疗，病理学诊断均为肝细胞肝癌。

兔抗人CXCLl2、CXCR4、MMP2和MMP9多克隆抗体、羊抗兔二抗均购自武汉三鹰公司， SP试剂盒、DAB显色剂均购自武汉博士德公司。

1.2方法

标本石蜡包埋，0.4μm连续切片。切片常规脱蜡，抗原微波修复，羊血清封闭，CXCLl2(1∶200)、CXCR4(1∶200)、MMP2(1∶100)和MMP9(1∶100)孵育；生物素化标记二抗IgG孵育；链亲和素过氧化物酶标记三抗孵育；DAB显色；苏木精复染。PBs代替一抗作为阴性对照。

由2名病理科医生以随机、双盲原则评定染色结果。以胞膜和胞质内出现淡黄至棕褐色颗粒为阳性，光镜下随机选取5个视野(× 400)，以平均50%以上细胞定位明确、染色明显的组织切片视为高表达组，低于50%为低表达组。

1.3统计学分析

统计学分析数据用SPSSI3.0统计软件包进行非参数秩和检验，χ2检验和Spearman rho相关性分析。Plt;0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1病理组织学观察结果

所有患者血清HBVAg均为阳性。患者临床病理特点见表1，癌旁组织标本作为对照。

表1 CXCR4/CCR7和MMP9的表达及临床意义

2.2CXCR4/CCR7和MMP9在HCC中的表达情况

CXCR4、CCR7和MMP9均表达于癌细胞的细胞膜和细胞质，呈淡黄色至棕黄色，胞核为蓝色。在癌周基质内有时也可见弱染色。在40例HCC标本中，有20例CXCR4染色阳性(50.0%)；临床高病理分级HCC中CXCR4表达明显增加(Plt;0.01)、复发转移和门静脉癌栓发生的病例中，CXCR4表达明显增多(Plt;0.01)。CCR7染色阳性19例(47.5%)，MMP9染色阳性23例(57.5%)，CCR7和MMP9的表达与HCC临床病理联系与CXCR4有相同的趋势，差异有统计学意义(Plt;0.01)。癌旁组织标本均未见CXCR4、CCR7和MMP9的明显表达(见图1～图3、表1)。

图1 CXCR4的表达情况(×200)

图2 CCR7表达情况(×200)

图3 MMP9表达情况(×200)

2.3CXCR4/CCR7与MMP9在HCC中相关性分析

CXCR4蛋白表达和MMP9蛋白表达明显正相关(r=0.556，P=0.000)，见表2。CCR7蛋白表达和MMP9蛋白表达明显正相关(r=0.413，P=0.008)，同CXCR4蛋白表达呈正相关(r=0.951，P=0.000)。

表2 CXCLl2/CXCR4和MMP2/MMP9 相关性分析

3 讨 论

CXCR4是CXC家族趋化因子的重要受体，CCR7是其配体，两者具有高度的特异性和亲和力。有研究证实，CXCR4-CCR7构成的生物轴通过调节恶性肿瘤如乳腺癌、肝癌、胃癌等的血管生成，直接活化肿瘤细胞，引导肿瘤细胞迁移到特定部位，从而在这些肿瘤的生长、转移过程中发挥重要作用。本研究发现，HCC组织中CXCLl2和CXCR4蛋白表达明显高于肝硬化、正常肝组织，提示CXCR4蛋白在HCC恶性转化中起重要作用，参与了肿瘤的发生、发展及转移。本实验中， CXCR4和CCR7表达和HCC的病理分级和门静脉癌栓以及复发转移呈明显正相关，提示趋化因子受体CXCR4及其配体CCR7共同参与肝癌细胞的发展和迁移，同时，CXCR4和CCR7在HCC中显著正相关。可见，CXCR4和CCR7可同时作为评估HCC病理发展程度和转移预后的一种肿瘤标志物。

基质金属蛋白酶可降解很多种细胞外基质(ECM)，是一个蛋白水解酶大家族[3]。基质金属蛋白酶9在肿瘤中，能降解变性胶原、弹性蛋白、肌蛋白等细胞外基质成分，改变肿瘤细胞的运动能力，调节趋化、迁移速率[4]。既往研究发现，MMP9与HCC的病理类型和转移潜能有关，MMP9可以作为反映HCC恶性程度的重要指标[5]，这一结果在本研究中也得到证实。本研究进一步证实，在HCC中， MMP9和门静脉癌栓明显相关。本研究结果还发显示，在CXCR4/CCR7高表达的HCC中，MMP9高表达，且呈显著正相关。

CXCR4/CCR7和MMP9蛋白表达在HCC组织中均与病理类型、门静脉癌栓以及复发转移明显相关，这提示CXCR4/CCR7蛋白可能通过某些通路对MMP9的表达进行调控而导致HCC的发生、发展和转移。然而，具体CXCLl2/CXCR4和MMP9/MMP2之间在HCC中的确切联系及始动因素、调控因素以及与其他细胞因子与信号通路的相关作用等还需要更多的体外实验和裸鼠模型来证实。但是，通过在HCC标本的CXCR4/CCR7和MMP9的表达和相关性分析，仍然为HCC的恶性程度评估提供了有效的标志物组合，也为我们进一步探讨HCC的早期诊断、发展和预后提供了一定的线索。

[1]Schrader J,Gordon-Walker T T,et al.Matrix stiffness modulates proliferation,chemotherapeutic response,and dormancy in hepatocellular carcinoma cells[J].Hepatology，2011，53(4)：1192-1205.

[2]Roderfeld M,Rath T,Lammert F,et al.Innovative immunohistochemistry identifies MMP-9 expressing macrophages at the invasive front of murine HCC[J].World J Hepatol，2010，2(5)：175-179.

[3]Park S Y,Jeong K J,Panupinthu N,et al.Lysophosphatidic acid augments human hepatocellular carcinoma cell invasion through LPA1 receptor and MMP-9 expression[J].Oncogene，2011， 30(11)：1351-1359.

[4]Kim S W,Kim H Y,Song I C,et al.Cytoplasmic trapping of CXCR4 in hepatocellular carcinoma cell lines[J].Cancer Res Treat，2008，40(2)：53-61.

[5]Huang F,Geng X P.Chemokines and hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol，2010，16(15)：1832-1836.

[编辑]一 凡

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2012.03.002

R735.7；R361.3

A

1673-1409(2012)03-R003-03

2012-02-10

黄为(1969-)，男，湖北潜江人，主治医师，主要从事肝胆外科临床工作;通讯作者：胡晓立，E-mail: winterhxl@sina.com。