XE-5000血液分析仪检测有核红细胞的评价

慕悦意， 李筱梅， 李 勇， 夏永辉， 田 鹏， 杨佳彧， 张华梅， 曹 增

(中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院，天津 300020)

XE-5000血液分析仪检测有核红细胞的评价

慕悦意， 李筱梅， 李 勇， 夏永辉， 田 鹏， 杨佳彧， 张华梅， 曹 增

(中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所血液病医院，天津 300020)

目的 探讨Sysmex XE-5000血液分析仪(简称XE-5000)自动计数外周血有核红细胞(NRBC)的方法学特点，评价其临床应用价值。方法 评析XE-5000重复性、线性范围、携带污染率，并对391份静脉血标本做常规测定，评价其对NRBC的报警、定量测定，并与手工涂片法进行对照。结果 XE-5000测定NRBC的重复性较好，线性范围较广，携带污染率较小。当NRBC比例＞5．0% 时，则引起白细胞计数和淋巴百分比计数假性增多。以显微镜复检为金标准，XE-5000与显微镜计数法计数外周血中NRBC数量有极好的相关性(r=0．997)，其NRBC报警的敏感性为100．0%，特异性为85．4%。结论 XE-5000可灵敏、准确、精密地自动计数外周血中NRBC，适合临床检测NRBC。

有核红细胞;血液分析仪;评价

血液中出现有核红细胞(NRBC)是由于骨髓幼稚的红系细胞释放入外周血所致，健康成年人血液中无NRBC，但在新生儿或幼儿血液中可见，成人外周血中一旦出现NRBC，则为病理状态，常见于一些溶血性贫血、恶性肿瘤、骨髓纤维化等多种疾病。因此，准确计数血液中NRBC具有重要的临床意义［1］。多年来，计数NRBC最经典的方法是瑞氏染色血涂片人工在光学显微镜下计数。显微镜法计数细胞数相对较少，其计数的准确和精密度受技术人员的主观因素影响大，Sysmex XE-5000血液分析仪(简称XE-5000)使用聚次甲基荧光染液对NRBC和白细胞(WBC)进行核酸染色，经半导体激光流式细胞检测，使得NRBC计数作为常规检测项目成为可能。本研究通过对XE-5000计数NRBC同显微镜法计数NRBC结果进行比较，评价自动化血液分析仪性能及其临床应用价值。

材料和方法

一、标本来源

随机选择2010年10月至2011年4月在中国医学科学院血液病医院门诊患者391例，其中男274例，女117例，平均年龄36岁(14～65岁)。全部病例均经临床和实验室检查后符合相应的诊断标准［2］，其中急性白血病85例，慢性白血病58例，缺铁性贫血52例，巨幼性贫血27例，骨髓增生异常综合征32例，多发性骨髓瘤37例，正常人100名。

二、仪器与试剂

全部标本用Sysmex HST-2流水线(XE-5000 2台，SP-1000推片机1台)检测，配套试剂、全血质控物及校准物均由Sysmex公司提供。瑞-姬氏染液由贝索生物技术公司提供。Olympus CI-I20双目显微镜(Olympus，日本)。

三、质量控制

XE-5000安装、调试完毕后，按照仪器操作程序，用配套的全血校准物将全血细胞参数校准。仪器采用Sysmex公司提供的高、中、低3种配套e-CHECK质控品进行室内质控，在每次检测标本前清洗并打印本底数据，试验前、中、后均测试质控品监测，结果均在其靶值允许的范围内。标本均抽血2 mL置乙二胺四乙酸二钾(EDTA-K2)真空抗凝管中，混匀，室温放置，所有检测均在4 h内完成。

四、方法学评价

1．精密度 批内精密度用新鲜全血标本(高、中、低值)连续测定20次，计算均值 (个)、标准差(s)、变异系数(CV)［3］。

2．线性 以1例 NRBC数值较高(53．0×109/L)的血标本用生理盐水稀释为90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10% 的浓度，用XE-5000测定各稀释标本2次取其均值为测定值，各稀释度理论值为X，实测值为Y，做出两者相关性。

3．携带污染率 先测一定数量标本，待测定数达到稳定后。从血液分析仪已检测出NRBC值的同一批标本中选择高值连续测定3次(H1、H2、H3)，随后立即取1份低值标本连续测定3次(L1、L2、L3)。按公式计算:携带污染率=(L1－L3)/(H3 － L3)×100%［3］。

4．血标本检测 所有标本按临床标本的检测流程和方法进行全血细胞分析检测，WBC分类计数参照美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)规定的方法，由2名富有经验的主管技师采用双盲法独立对患者血涂片进行复检，每片计数200个WBC，同时计数所见的NRBC。取均值与XE-5000检测结果进行比较［4］。

五、统计学方法

所有数据用Microsoft Excel 2003软件进行统计学分析，比较2种方法的相关性采用线性回归分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

结 果

一、方法学评价

1．精密度 XE-5000测高、中、低值 NRBC标本的均值、s、CV 分别为 6．0、1．2、3．7，21．7、6．5、3．0 和51．6、13．5、2．6，批内 CV 均 ＜5%。可见该项检测结果具有良好精密度和重复性。

2．线性 以1例 NRBC数值较高(53．0×109/L)的血标本用生理盐水稀释，两者的相关性为 Y=0．989X －0．034，相关系数(r)=0．996，P ＜0．001。

3．携带污染率 测得携带污染率为0．36%，该方法携带污染率较小，在可接受范围内。

二、NRBC对WBC计数和分类的影响

应用标准操作程序进行NRBC的检测，XE-5000能同时计数不同通道的WBC，包括去除Diff通道和Baso通道的WBC计数。从表1可以看出当XE-5000测定NRBC比例＞5%时WBC计数与去除NRBCWBC计数差异有统计学意义(P＜0．001)，同时人工分类淋巴细胞与XE-5000的淋巴细胞分类差异亦有统计学意义(P＜0．001)。

三、仪器NRBC报警与显微镜镜检情况比较

对仪器法和显微镜法所计数的NRBC百分率进行相关性分析，XE-5000分析测定值为X，显微镜法测定值为 Y，两者相关性 Y=1．147 X+0．175，r=0．997，P ＜0．001。以显微镜计数NRBC为“金标准”，显微镜计数 NRBC比例≥2%而XE-5000检测到NRBC视为真阳性;显微镜计数NRBC≥2%而XE-5000未检测到NRBC视为假阴性;显微镜计数NRBC比例＜2%而XE-5000检测到NRBC视为假阳性;显微镜计数NRBC比例＜2%而XE-5000未检测到NRBC视为真阴性。结果见表2。

XE-5000测定NRBC的敏感性为100．0%，特异性为85．4%，说明仪器性能优越。但假阳性比例比较高，大多数都集中在NRBC比例＜2%的区间内。

表1 XE-5000计数NRBC对仪器计数WBC及淋巴细胞分类的影响

表2 XE-5000与手工染色涂片镜检计数NRBC比较

讨 论

血液分析仪自动计数外周血中NRBC是近年来发展起来的一项新技术，已广泛应用于临床。Sysmex HST-302是世界上最先进血液分析仪流水线之一。XE-5000具有灵活的5种检测模式和真正随机进样分析，同时设置了体液检测和外周血干细胞检测模式，可以满足临床不同标本检测要求。应用WBC Baso和WBC Diff检测通道、半导体激光流式细胞原理结合细胞化学荧光染色技术对血液进行检测。XE-5000利用荧光染色对细胞核进行染色，测定其侧向荧光强度(反映细胞核的大小)和前向散射光强度(反映细胞体积的大小)，将其与WBC、RBC以及血小板区别开，通过流式技术对NRBC进行计数，为临床实验室简便、快速的筛查NRBC提供了可能。

XE-5000计数NRBC在不同数量的标本中有较好的重复性，高、中、低值的CV值都在理想的范围之内，与国内报道低值标本NRBC数值较小，CV值稍大，大约15%左右不太一致，可能与我们选择的标本不同有关。在(0～53)×109/L范围内计数NRBC具有良好的线性，与理论值高度相关(r=0．996)。Walters等［5］报道 XE-2100 计数NRBC在(0～50)×109/L范围内具有良好的线性，与本研究相似。携带污染率结果为0．36%，表明在测定过程中，高值标本对低值标本几乎无影响［6］。以上表明 XE-5000计数 NRBC基本可满足临床病例检测的需要。

一般血液分析仪在计数WBC时均将NRBC计在WBC之内，故 NRBC增多时可显著影响WBC计数，使WBC呈假性升高。XE-5000可自动计数NRBC，并将其从WBC中去除NRBC，报告真正的WBC数，使其在存在NRBC的情况下计数出准确的WBC数量。我们的研究中可以看出，随着NRBC比例增高对WBC计数影响逐渐显著，NRBC数量较少时对WBC计数影响不大，当NRBC比例＞5．0% 时则引起WBC假性增多，应报告减去 NRBC的 WBC更为准确［7］。同时，我们还发现在NRBC比例＞5．0% 的病例中，XE-5000筛查法较显微镜法人工镜检的淋巴细胞比例增高，外周血中出现的幼红细胞多为晚幼红细胞，晚幼红细胞形态特征与外周血中小淋巴细胞非常相似。推测在筛查法中仪器将NRBC归类于淋巴细胞，而且NRBC比例越高这种现象越明显，此时应以人工镜检为准［8］。

XE-5000仪器计数法与显微镜目测计数法测定NRBC结果相关性良好(r=0．997)。在我们的研究中可以看到XE-5000筛查功能敏感性为100．0%，特异性为85．4%，仪器法检测NRBC具有较高的敏感性，但假阳性率太高，其原因可能是仪器设置的提示阈值较低以增加提示的敏感性，减少漏掉幼红细胞的机会，说明此法有过筛价值但无确诊意义［9］。有些标本XE-5000计数阳性而显微镜计数为0，此种现象均见于仪器计数NRBC比例较低(0．0% ～2．0%)的情况，其原因除仪器辨别细胞误差外，还可能是仪器计数的细胞数量远远大于人工镜检，发现NRBC的概率相对高［10］。而对低含量的标本显微镜镜检仅分类200个WBC，加之血涂片上细胞分布的误差，有可能出现漏检。

总之，外周血中NRBC是多种疾病过程中可出现的一种病理状态，计数NRBC有较为广泛的临床意义。XE-5000能较快地计数NRBC，且有较高的敏感性和特异性，为临床诊疗工作提供了更多的方便，但不能完全替代血涂片镜检，对于提示检测结果异常的标本应进一步查找病因，以免漏诊。

［1］ 张之南，杨天楹，郝玉书．血液病学［M］．北京:人民卫生出版社，2003:1670-1675．

［2］ 张之南，沈 悌．血液病诊断及疗效标准［M］．第3版．北京:科学出版社，1999:103-175．

［3］National Committee for Clinical Laboratory Standards Reference leukocyte differential count(proportional)and evaluation of instrument methods［S］．H20，NCCLS，1992．

［4］De Keijzer MH，van Der MeerW．Automated counting of nucleated red blood cells in blood samples of newborns［J］．Clin Lab Haematol，2002，24(6):343-345．

［5］Walters J，Garrity P．Performance evaluation of the Sysmex XE-2100 hematology analyzer［J］．Lalb Hemat，2000，6:83-92．

［6］GulatiG，Behling E，KocherW，etal．An evaluation of the performance of Sysmex XE-2100 in enumerating nucleated red cells in peripheral blood［J］．Arch Pathol Lab Med，2007，131(7):1077-1083．

［7］Wang FS，Itose Y，Tsuji T，et al．Development and clinical application of nucleated red blood cell counting and staging on the automated haematology analyser XE-2100［J］．Clin Lab Haematol，2003，25(1):17-23．

［8］李建英．血细胞分析自动计数外周血有核红细胞的应用研究［J］．中华检验医学杂志，2005，28(6):606-609．

［9］Kratz A，Maloum K，O’Malley C，et al．Enumeration of nucleated red blood cells with the ADVIA 2120 hematology system:an internationalmulticenter clinical trial［J］．Lab Hematol，2006，12(2):63-70．

［10］王 欣，滕 娟，郝少丽．血细胞分析仪计数幼稚红细胞的准确性评价［J］．中华检验医学杂志，2007，30(9):1056-1057．

Evaluation on nucleated red blood cell detection by XE-5000 automated hematology analyzer

MU Yueyi，LI

Xiaomei，LI Yong，XIA Yonghui，TIAN Peng，YANG Jiayu，ZHANG Huamei，CAO Zeng． (Blood Disease Hospital，Institute of Hematology，Chinese Academy ofMedical Science and Peking Union Medical College，Tianjin 300020，China)

Objective To evaluate the clinical application significance and methodology characteristic of Sysmex XE-5000 automated hematology analyzer(XE-5000)to count nucleated red blood cell(NRBC)．M ethods The repeatability，linear range and carryover rate of XE-5000 were evaluated．A total of 391 blood samples weremeasured，and the alarm and quantitative determination of XE-5000 for NRBC were evaluated．The results were compared with manualmicroscopy．Results The XE-5000 results showed good repeatability，linear range and low carryover rate．When NRBC% ＞5．0%，it caused false increasing of leucocyte and lymphocyte．The results ofmanualmicroscopy were as a gold standard．The correlation was good between the XE-5000 andmanualmicroscopy(r=0．997)．The sensitivity for NRBC was 100．0%，and the specificity was 85．4%．Conclusions NRBC counting by XE-5000 is sensitive，accurate and reliable，which is suitable for the clinical detection of NRBC in peripheral blood．

Nucleated red blood cell;Hematology analyzer;Evaluation

2011-07-05)

(本文编辑:范基农)

1673-8640(2012)08-0667-04

R446．11

A

天津市自然科学基金基础项目(08JCYBJC06500)

慕悦意，男，1983年生，学士，技师，主要从事临床检验工作。

曹 增，联系电话:022-27405803。