HPLC测定五淋化石胶囊中延胡索乙素的含量△

邱宏聪，孟夏临

(1.广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022)

广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻：0424008-3C)

*

邱宏聪, Tel:(0771)5883405,E-mail:qiuhongcong@163.com

HPLC测定五淋化石胶囊中延胡索乙素的含量△

邱宏聪1,2*，孟夏临1

(1.广西壮族自治区中医药研究院，广西 南宁 530022；2.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530022)

目的建立五淋化石胶囊中延胡索乙素的含量测定方法。方法采用Kromasil Cl8色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相甲醇-磷酸盐溶液(磷酸二氢钾0.2 g和磷酸氢二钾9.6 g混合溶解于1 L水中)(60∶40)，流速为1.0 mL·min-1，检测波长280 nm。结果延胡索乙素在0.045～0.980 μg线性关系良好，r=0.999 8，平均回收率为98.44%，RSD=1.35%。结论该方法简便、准确，可作为五淋化石胶囊质量控制方法。

五淋化石胶囊；高效液相色谱法；延胡索乙素

五淋化石胶囊由延胡索(醋制)、广金钱草、鸡内金、石韦等11味中药制备而成，具有通淋利湿，化石止痛之功效，用于淋症，癃闭，尿路感染，尿路结石，前列腺炎，膀胱炎，肾盂肾炎，乳糜尿。作者曾进行五淋化石胶囊的质量标准研究，用HPLC测定槲皮素的含量[1]。本实验参考《中国药典》2010年版一部延胡索含量测定方法[2]及相关文献，建立HPLC测定五淋化石胶囊中延胡索乙素含量的方法，可更全面地控制本品质量。

1 仪器与试药

日本岛津公司LC-20A高效液相色谱仪；延胡索乙素对照品(中国食品药品检定研究院，批号：0726-200107，供含量测定用)；五淋化石胶囊(本单位自制，规格：每粒装0.3 g，批号：091001，091002，091003)；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

色谱柱：Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-磷酸盐溶液(磷酸二氢钾0.2 g和磷酸氢二钾9.6 g混合溶解于1 L水中)(60∶40)；流速为1.0 mL·min-1，检测波长为280 nm，进样量为10 μL。理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取胶囊10粒，倾出内容物，研细，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液50 mL，称定重量，冷浸1 h后加热回流1 h，放冷，称定重量，用浓氨试液-甲醇(1∶20)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液20 mL，用乙醚萃取3次(25，20，20 mL)，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.4 专属性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按上述色谱条件测定。结果见图1。延胡索乙素主峰的保留时间约为21 min，阴性样品的色谱图中与延胡索乙素对照品相应保留时间附近无干扰。

A.延胡索乙素对照品 B.供试样品 C.阴性样品 1.延胡索乙素图1 五淋化石胶囊HPLC图

2.5 线性关系考察

精密称取延胡索乙素对照品贮备溶液(0.245 mg·mL-1) 0.5，1，2.5，5，10 mL对照品溶液，分别置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别按上述色谱条件测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=82 766X-4 002，r=0.999 8，表明延胡索乙素在0.045～0.980 μg线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一延胡索乙素对照品溶液，连续测定6次，结果RSD=0.58%。

2.7 稳定性试验

取091001批样品，制备供试品溶液1份，分别在0，1，2、4、8，12 h测定，结果RSD=0.73%，表明样品溶液在12 h内稳定。

2.8 重复性试验

取091001批样品6份，制备供试品溶液6份，按拟定方法测定，结果平均含量为0.12 mg·g-1，RSD=1.60%。

2.9 回收率试验

取091001批6份样品，每份取约1 g，精密称定，分别精密加入延胡索乙素对照品溶液(浓度为2.45 μg·mL-1)50 mL，按供试品溶液制备项下方法处理，测定含量，并计算回收率，结果见表1。

2.10 样品测定

取3批五淋化石胶囊样品(批号：091001，091002，091003)，按上述方法测定延胡索乙素的含量，结果分别为37，38，35 μg/粒。

表1 延胡索乙素回收率试验

注：延胡索乙素对照品加入量均为0.122 5 mg

3 讨论

方中延胡索乙素具有镇静、镇痛的作用[3]，为主要活性成分之一。为更全面地控制本品的质量，本实验建立了HPLC测定延胡索乙素含量的方法。

方中延胡索用量少，延胡索乙素含量相对较低，考察提取溶媒时，发现只用浓氨试液-甲醇不能完全提取[2]。延胡索乙素在氨碱性条件下以游离碱形式存在，在乙醚中有较好的溶解度，因此提取方法采用氨碱性条件下用乙醚萃取。

在流动相选择时采用混合磷酸盐溶液，其分离效果比用三乙胺[4]调节好，因此采用甲醇-磷酸盐溶液(磷酸二氢钾0.2 g和磷酸氢二钾9.6 g混合溶解于1 L水中)(60∶40)作为流动相。

[1] 邱宏聪,覃潇,孟夏临,等.五淋化石胶囊的质量标准研究[J].山东中医杂志,2007,26(8):571-572.

[2] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社,2010：130.

[3] 王宜祥,何忠平.延胡索不同提取液对小鼠镇痛作用的影响[J].中药药理与临床,2005,21(5)：34.

[4] 朱才庆,吴迪,李艳,等.高效液相色谱法测定复方元胡止痛胶囊中延胡索乙素的含量[J].时珍国医国药，2008，(7):1727-1728.

DeterminationofTetrahydropalmatineinWulinHuashiCapsulebyHPLC

QIU Hong-cong1,2，MENG Xia-lin1

(1.GuangxiInstituteofTraditionalMedicalandPharmaceuticalSciences,Nanning530022,China; 2.GuangxiKeyLaboratoryofTradtitonalChineseMedicaineQualityStardands,Nanning530022,China)

Objective:To establish a HPLC method for determination of tetrahydropalmatine in Wulin Huashi Capsules.MethodsKromasil C18(250 mm ×4.6 mm,5 μm)was adopted and mobile phase consisted of methanol-phosphate solution(60∶40). Flow rate was 1.0 mL·min-1. Detection wavelength was 280 nm.ResultsThe linear ranges were 0.045～0.980 μg(r=0.999 8). The reproducibility was 98.44%(RSD=1.35%).ConclusionThe method is simple, accurate, and suitable for the quality control of Wulin Huashi Capsules.

Wulin Huashi Capsule；HPLC；Tetrahydropalmatine

2012-05-25)