藏药藏降脂胶囊毒理学研究

2012-11-01刘有菊陈秋红

亚太传统医药 2012年2期

红梅，刘有菊，陈秋红

（1.青海省藏医药研究院药物研究所，青海西宁 810003；2.青海高原医学科学研究所中心实验室，青海西宁 810012）

藏降脂胶囊原藏文名为“居日尼阿”［1］（JURINIA，缩写为JRNA）至今已有300余年的临床应用史，是藏医用于清血除脂的代表性药方。《四部医典》（秘诀部）记载“瘦比肥胖好，滋补要适度，一切内科疾病由消化不良而生”。青海省藏医药研究院在原方的基础上，根据《四部医典》所载原方，科学配伍，不断改进和完善，研制成藏降脂胶囊，经长期临床试验证明：藏降脂胶囊组方科学，疗效显著。如今，藏降脂已被认证为青海高新技术产品。为了验证其临床安全性进行了为期3个月的大鼠长期毒性以及为期7d的小鼠急性毒性实验观察，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 实验材料

1.1.1 药品与试剂

藏降脂胶囊由金诃藏药药业生产部提供，成年人（60kg）常规用量0.042g／（kg·d），实验前加蒸馏水制成一定浓度的混悬液，置冰箱备用。

1.1.2 实验动物

KM种小鼠，体重18～22g，清洁级，均由青海省实验动物中心提供，合格证号：青医动字第零零一号；Wistar大白鼠，体重90～120g，由北京维通利华实验动物有限公司提供，合格证号：0202219，雌雄各半，分笼饲养。

1.1.3 仪器

全自动生化分析仪Olympas-au640（日本）、血细胞分析仪KX-21N（日本）、电子天平、离心机、石蜡切片机、显微镜（北航医学图像分析管理系统）等。

1.1.4 统计学分析

各项指标均用组间比较进行显著性t检验，所有剂量资料以均数±标准差表示。

1.2 实验方法

1.2.1 急性毒性实验［2］

取健康昆明种小白鼠60只，随机分为两组，分别为对照组和藏降脂胶囊组。选用拟临床实验的给药途径——灌胃（ig），以小鼠能够耐受的最大浓度0.23g／mL、最大体积0.5mL的药量24h内连续3次给予小鼠，总剂量为17.25 g／kg，相当于临床常规用药剂量的441倍，对照组ig等体积蒸馏水。

观察和测定指标：

（1）行为、外观：毛色、尿色、粪便、活动情况、饮水和饮食量及检测给药前和给药后一周体重等。

（2）抽取对照组和给药组雌雄各4只，处死、解剖，肉眼观察各脏器有无明显病变，取肝、肾脏器，用4%福尔马林固定，经石蜡包埋、显微切片（4～6μm厚）、脱蜡水化、HE染色、梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固后，光学显微镜下进行组织学观察。主要观察各组织有无细胞变性、炎症和肿瘤的发生等病理学改变，并对典型病变予以照相记录。

1.2.2 长期毒性实验［2］

健康大白鼠128只，雌雄各半，随机分为四组，分别为空白对照组，藏降脂小剂量组（1g／kg）、藏降脂中剂量组（2.1g／kg）和藏降脂大剂量组（4.2g／kg）（该剂量相当于临床拟日用药量的25、50、100倍）组，每组32只。ig给药，每天1次，共90d，在给药45d、90d和停药15d后每组各处死10只，腹主动脉采血。

观察和测定指标：

（1）行为、外观、毛色、尿色、粪便、活动情况、饮水和饮食量及检测每周体重等。

（2）给药第45、90天以及停药15天分别采血测定血液学指标，包括血红蛋白（Hgb）、红细胞（RBC）数、白细胞（WBC）数、红细胞压积（HCT）、平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞血红蛋白浓度（MCHC）、淋巴细胞（LYM%）、单核细胞（MXD%）、中性粒细胞（NEUT%）以及血小板（Plt）数；血液生化指标包括谷氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（T-BIL）、总蛋白（TP）、尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、白蛋白（ALB）、葡萄糖（GLU）；取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺眼观察并称重，随后于各剂量组抽取3～4只大鼠所取脏器（雌雄各半），用上述方法，在光镜下进行组织形态学观察。

2 实验结果

2.1 小鼠最大耐受量

2.1.1 肉眼观察

药后2h后发现藏降脂胶囊组4只小鼠均出现活动减少及轻微腹泻现象，粪便呈软便，成形，肛周少量污秽，末次给药48h后转为正常，未见其他明显的异常反应。连续观察7d，小鼠外观、行为、体重增长等均和对照组无明显差异，未出现小鼠死亡情况，各组小鼠解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变，和对照组相比无明显差异。

2.1.2 病理组织光镜观察

肾：各肾脏被膜厚度适中，皮质和髓质界限清楚，肾小球形态如常，未见萎缩或代偿性肥大，近曲小管和远曲小管上皮细胞未见细胞水肿（颗粒变性）、透明变性和坏死，集合管各属支和肾间质均未见炎症反应。

肝：各肝组织，肝小叶结构完整，中央静脉位于小叶中央，周边肝细胞索呈放射状规则排列，肝血窦缩窄，肝细胞未见嗜酸性变；未见区带状坏死、碎屑样坏死和大块坏死；未见磷脂贮积症；未见肝细胞淤胆和胆栓形成。未见肝静脉闭塞；未见肝纤维化和肝硬化；未见药物性血管损伤、肝肿瘤和色素沉着。

对抽取的肝、肾组织的全面观察亦未见明显的病理改变。

2.2 大鼠长期毒性实验

2.2.1 藏降脂胶囊对长毒大鼠行为、外观等影响

通过90d的实验观察表明，藏降脂胶囊各剂量组对大鼠的毛色、尿色、粪便、活动情况、外观、饮水和饮食量均无明显影响，和对照组比较无明显差异。

2.2.2 藏降脂胶囊对长毒大鼠体重的影响

实验结果见表1、表2、表3。结果表明ig藏降脂胶囊1g／kg、2.1g／kg及4.2g／kg对大鼠的体重均未见明显的影响，和对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

表1 给药期间大鼠体重变化情况）

注：给药前以及给药45d期间，各组n＝36；给药45～90d期间，各组n＝26；停药15d各组n＝16。

组别给药期间的大鼠体重（g）给药前第1周第2周第3周第4周71±28.94 241.73±39.7010±34.13 244.08±43.93藏降脂小 115.25±7.39 153.65±14.56 191.95±21.12 221.37±30.72 251.85±40.98藏降脂中 114.92±5.98 154.97±10.22 193.10±20.71 221.58±31.13 248.11±41.46藏降脂大 118.65±7.46 157.56±12.45 187.33±20.60 215.对照组 117.34±9.55 155.20±14.47 192.10±24.05 219.

表2 给药期间大鼠体重变化情况（）

注：给药前以及给药45d期间，各组n＝36；给药45～90d期间，各组n＝26；停药15d，各组n＝16。

组别给药期间的大鼠体重（g）第5周第6周第7周第8周第9周.99±65.45 322.60±75.54.29±72.46 345.60±94.01藏降脂小 274.62±49.97 292.79±62.61 303.99±67.97 312.17±73.16 333.52±77.32藏降脂中 271.08±51.94 293.19±64.12 300.55±64.54 313.16±69.49± 334.22±77.69藏降脂大 262.42±48.83 280.08±55.08 289.70±58.61 307对照组 276.47±59.27 289.30±64.43 307.42±65.23 319

表3 给药期间大鼠体重变化情况（）

注：给药前以及给药45d期间，各组n＝32；给药45～90d期间，各组n＝22；停药15d，各组n＝12。

.74±89.26 354.64±97.70组别给药期间的大鼠体重（g）第10周第11周第12周停药后1周停药.71±100.32 371.05±99.23藏降脂小 332.90±80.83 341.53±90.28 349.60±95.18 359.09±93.39 362.90±79.48藏降脂中 336.17±81.17 341.53±90.28 355.14±93.81 359.92±96.81 356.56±95.39藏降脂大 318.55±77.43 336.43±82.44 342.90±88.37 35015d对照组 344.21±85.47 357.23±92.12 363.73±96.70 369

2.2.3 藏降脂胶囊对长毒大鼠脏器比重的影响

实验结果见表4、表5、表6。结果表明：藏降脂胶囊给药90天后大、中、小各剂量组脏器指标均未见明显改变，和空白对照组比较无显著性差异（P＞0.05）。

表4 给药45d大鼠脏器系数的变化（，n＝10）

7464.54±38.45649.92±40.73 1.88±0.16藏降脂小 1 311.01±28.152952.60±261.38278.39±90.10442.21±50.54659.18±31.96 1.96±0.09藏降脂中 2.1 307.06±25.363067.33±309.55249.04±35.39441.29±57.87664.12±36.51 1.87±0.06藏降脂大 4.2 320.09±19.903012.31±238.35237.01±27.大脑对照组 -- 327.55±35.262845.16±206.22258.08±37.0组别剂量（g／kg）给药45天大鼠脏器系数（mg／100g体重）心肝脾肺肾31436.44±56.12641.23±36.46 1.87±0.25

表5 给药90d大鼠脏器系数的变化（，n＝10）

6424.29±70.35589.20±73.40 1.98±0.11藏降脂小 1 287.72±30.062964.82±527.39227.86±41.52426.71±56.58602.58±62.86 1.91±0.09藏降脂中 2.1 306.16±24.202813.87±190.93242.52±41.74415.66±76.87622.48±61.86 1.96±0.07藏降脂大 4.2 297.05±46.342948.16±334.11212.22±47.大脑对照组 -- 314.83±71.482706.19±382.21203.97±41.7组别剂量（g／kg）给药90天大鼠脏器系数（mg／100g体重）心肝脾肺肾62392.19±78.64656.91±87.63 1.88±0.12

表6 停药15d大鼠脏器系数的变化（，n＝10）

8396.95±75.94565.91±61.84 1.94±0.13藏降脂小 1 240.62±25.212654.40±286.77210.45±46.79398.19±50.78549.11±39.47 1.92±0.17藏降脂中 2.1 276.21±27.772731.52±331.07203.99±22.87439.71±59.88610.61±60.47 1.94±0.14藏降脂大 4.2 279.96±33.692762.60±261.52199.35±31.大脑对照组 -- 264.78±26.482596.59±146.87190.43±29.9组别剂量（g／kg）停药15天大鼠脏器系数（mg／100g体重）心肝脾肺肾27398.43±56.19593.15±44.61 1.92±0.08

2.2.4 藏降脂胶囊对长毒大鼠血液生化指标的影响

结果表明，藏降脂胶囊大剂量组给药45天后对大鼠血清ALT有所下降（P＜0.05）；藏降脂胶囊小剂量组给药45天和给药90天后对大鼠的血清AST均明显有所下降（P＜0.05），停药15天后血清 AST、ALT恢复正常（P＞0.05），见表7至表12，但这些指标的改变并无实际的临床意义，可能是由于动物对药物的不适应引起的暂时性改变。

表7 给药45d大鼠的血液生化指标（）

注：＊表示与对照组比较P＜0.05。

组别剂量（g.kg-1） ALT（U／L） AST（U／L） T-BIL（μmol／L） TP（g／L）170.10±27.55 0.78±0.28 50.58±6.45.36藏降脂小 1 37.22±9.65 151.33±12.36＊ 0.94±0.54 50.41±2.49藏降脂中 2.1 41.10±10.73 164.50±22.50 1.11±0.25 53.20±4.83藏降脂大 4.2 37.20±6.46＊对照组 —— 45.56±10.11 171.89±23.84 0.83±0.61 52.49±5

表8 给药45d大鼠的血液生化指标（）

组别剂量（g.kg-1） UA（μmol／L） ALB（g／L） BUN（mmol／L） GLU（mmol／L）84.44±17.76 23.51±1.62 8.38±0.97 4.64±0.97藏降脂小 1 73.12±13.00 24.49±1.20 8.70±0.80 4.60±0.91藏降脂中 2.1 67.70±29.38 24.29±2.86 8.09±0.91 4.60±0.50藏降脂大 4.2 81.50±53.16 23.30±1.83 9.15±1.84 4.71±1对照组 ——.55

表9 给药90d大鼠的血液生化指标（）

注：＊、表示与对照组比较P＜0.05。

组别剂量（g.kg-1） ALT（U／L） AST（U／L） T-BIL（μmol／L） TP（g／L）±7.118.61藏降脂小 1 42.56±11.65 116.33±9.76＊ 1.47±0.48 43.23±6.17藏降脂中 2.1 44.30±8.51 149.90±28.73 1.69±0.29 46.06±10.28藏降脂大 4.2 41.70±7.89 140.60±17.66 1.37±0.25 46.88对照组 —— 44.00±12.99 148.00±36.79 1.52±0.28 48.04±1

表10 给药90d大鼠的血液生化指标（）

组别剂量（g.kg-1） UA（μmol／L） ALB（g／L） BUN（mmol／L） GLU（mmol／L）93.44±29.99 22.07±3.60 8.78±1.28 3.74±0.87藏降脂小 1 73.12±19.97 20.36±2.16 8.92±0.76 4.21±0.76藏降脂中 2.1 65.40±31.27 20.83±1.79 9.73±1.85 4.32±0.94藏降脂大 4.2 69.40±21.95 21.14±2.55 9.19±0.88 4.46±0对照组 ——.88

表11 停药15d大鼠的血液生化指标（）

组别剂量（g.kg-1） ALT（U／L） AST（U／L） T-BIL（μmol／L） TP（g／L）.72藏降脂小 1 39.11±12.52 127.33±28.78 1.84±0.46 57.37±2.86藏降脂中 2.1 38.10±7.49 141.40±21.17 2.12±0.46 57.26±2.93藏降脂大 4.2 35.50±3.47 145.30±17.39 1.94±0.44 59.05对照组 —— 39.56±6.69 144.33±10.98 1.93±0.57 54.83±14±4.03

表12 停药15d大鼠的血液生化指标（）

组别剂量（g.kg-1） UA（μmol／L） ALB（g／L） BUN（mmol／L） GLU（mmol／L）60.89±36.42 27.40±2.66 9.21±0.97 3.70±1.03藏降脂小 1 55.44±16.23 28.17±2.05 8.68±1.42 3.82±1.03藏降脂中 2.1 49.90±9.35 27.45±2.43 8.95±0.91 3.62±0.51藏降脂大 4.2 69.50±31.75 28.31±2.09 8.56±0.85 3.08±0.72对照组 ——

2.2.5 藏降脂胶囊对长毒大鼠血象的影响

结果表明：藏降脂粉胶囊大剂量组给药45天后对大鼠血清ALT有所下降（P＜0.05）；藏降脂胶囊小剂量组给药45天和给药90天后对大鼠的血清AST明显均有所下降（P＜0.05），停药15天后血清 AST、ALT恢复正常（P＞0.05）。见表13至表18。

表13 给药45d大鼠的血象变化（）

组别剂量（g／kg） WBC（109／L） RBC（1012／L） Hgb（g／L） HCT（%） MXD（%）8 2.21±1.30藏降脂小 1 3.86±1.35 7.89±0.55 158.56±10.76 46.03±2.91 3.31±1.51藏降脂中 2.1 3.88±1.54 7.74±0.61 152.40±11.85 44.09±2.97 2.23±0.71藏降脂大 4.2 4.31±1.29 7.83±0.52 146.90±9.55 43.42±2对照组 —— 4.66±1.21 8.00±0.59 157.89±13.31 46.13±3.7.54 1.50±1.32

表14 给药45d大鼠的血象变化（）

组别剂量（g／kg） NEUT（%） LYM（%） MCHC（g／L） MCH（pg） Plt（109／L）0.58 813.44±142.86藏降脂小 1 13.69±6.12 80.22±5.39 344.22±5.85 20.11±0.72 857.33±129.67藏降脂中 2.1 18.69±6.40 77.01±6.33 345.50±7.46 19.70±0.57 791.40±84.77藏降脂大 4.2 17.36±7.94 77.06±6.00 338.20±6.46 19.93对照组 —— 17.32±10.36 77.90±10.27 342.11±5.35 19.77±±0.81 886.40±73.99

表15 给药90d大鼠的血象变化（）

组别剂量（g／kg） WBC（109／L） RBC（1012／L） Hgb（g／L） HCT（%） MXD（%）3.61±1.38藏降脂小 1 4.47±1.97 8.74±1.31 165.44±21.98 48.19±4.96 2.90±1.46藏降脂中 2.1 4.16±1.78 8.60±0.77 160.40±8.72 45.69±1.85 2.74±1.64藏降脂大 4.2 2.67±0.84 8.03±0.64 162.51±9.08 46.25±2对照组 —— 3.38±1.88 8.60±0.57 159.50±6.45 47.22±1.74.33 4.71±3.93

表16 给药90d大鼠的血象变化（）

组别剂量（g／kg） NEUT（%） LYM（%） MCHC（g／L） MCH（pg） Plt（109／L）.70 890.40±236.34藏降脂小 1 21.52±8.79 73.44±9.56 342.56±9.32 18.97±0.62 811.11±216.69藏降脂中 2.1 14.92±10.03 60.01±30.27 350.90±7.05 18.70±0.81 816.20±293.43藏降脂大 4.2 17.10±8.75 65.14±6.46 331.80±4.59 18.46对照组 —— 15.44±9.53 68.59±10.39 337.70±4.99 18.58±0±0.73 944.20±112.89

表17 停药15d大鼠的血象变化（）

组别剂量（g.kg-1） WBC（109／L） RBC（1012／L） Hgb（g／L） HCT（%） MXD（%）8 3.79±1.98藏降脂小 1 3.84±1.65 8.39±0.49 161.44±7.58 48.18±1.63 3.23±1.01藏降脂中 2.1 3.59±1.90 8.29±0.39 158.80±6.55 47.48±1.59 2.34±1.53藏降脂大 4.2 3.45±1.65 8.34±0.42 159.10±5.80 47.32±1对照组 —— 3.69±1.65 8.46±0.88 159.89±10.59 47.30±2.6.45 3.62±1.53

表18 停药15d大鼠的血象变化（）

组别剂量（g.kg-1） NEUT（%） LYM（%） MCHC（g／L） MCH（pg） Plt（109／L）87 857.33±80.54藏降脂小 1 25.87±5.30 67.66±5.02 335.00±8.17 19.24±0.46 832.33±97.28藏降脂中 2.1 24.03±5.48 68.68±4.97 334.60±7.12 19.18±0.55 782.70±153.73藏降脂大 4.2 17.10±6.41 67.45±5.99 336.20±6.03 19.10对照组 —— 20.57±6.35 72.52±8.58 338.00±4.85 18.99±0.±0.71 840.70±75.72

2.2.6 藏降脂胶囊对长毒大鼠主要器官组织形态学的影响

（1）方法：于给药45天、90天和停药15天对空白对照组及藏降脂胶囊大、中、小剂量组各抽取3～4只大鼠（雌雄各半），分别取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、大脑组织块用10%液体石蜡固定，经石蜡包埋、显微切片（4～6μm厚）、脱蜡水化、HE染色、梯度酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固后，光学显微镜下进行组织学观察。主要观察各组织有无细胞变性、炎症和肿瘤的发生等病理学改变，并对典型病变予以照相记录。

（2）结果：经对全部抽取的48组器官组织的全面观察，结果为：

心：48组心脏的心外膜、心肌膜和心内膜结构完整，心肌细胞无肥大及萎缩，心肌膜内肌原纤维排列整齐，横纹明显，心外膜的间皮细胞、心内膜的内皮细胞和心肌细胞均未见明显的变性、坏死和增生，心脏各层间质均未见炎症细胞浸润。

脾：48组脾脏被膜未增厚，脾小梁未增宽，分布规则及均匀，红髓、边缘区和白髓结构清楚，脾血窦无扩张及淤血，淋巴小结未增多，生发中心大小适中。

肾：48组肾脏被膜厚度适中，皮质和髓质界限清楚，肾小球形态如常，未见萎缩或代偿性肥大，近曲小管和远曲小管上皮细胞未见细胞水肿（颗粒变性）、透明变性和坏死，集合管各属支和肾间质均未见炎症反应。

肾上腺：48个肾上腺被膜完整，皮质和髓质界限分明，球状带、束状带和网状带分层清楚，均未见明显的变性、坏死、增生和炎症细胞浸润。

大脑：48组大脑皮质各层细胞排列整齐，未见神经元萎缩、变性、坏死及软化灶形成，无嗜神经细胞现象；未见星形胶质细胞增生和胶质瘢痕形成；无小胶质细胞结节状增生；未见淋巴细胞围绕血管间隙形成血管套。

肺：48组肺组织中，绝大部分肺组织细支气管及其周围、肺泡内和肺泡间隔未见明显炎症细胞浸润；少部分肺组织肺泡间隔增宽，毛细血管扩张充血，可能因抓取动物时所致；少部分肺组织肺泡间隔增宽，毛细血管扩张充血，间质疏松水肿，细支气管周围及肺泡间隔少量中性粒细胞和淋巴细胞浸润，纤维组织增生。此改变可能与低氧环境有关。

肝：48组肝组织，肝小叶结构完整，中央静脉位于小叶中央，周边肝细胞索呈放射状规则排列，肝血窦无明显缩窄或增宽，肝细胞未见明显的气球样变性和嗜酸性变；未见区带状坏死、碎屑样坏死和大块坏死；未见磷脂贮积症；未见肝细胞淤胆和胆栓形成。未见肝静脉闭塞；未见肝纤维化和肝硬化；未见药物性血管损伤、肝肿瘤和色素沉着。可见轻度小泡状脂肪变性，少量点状坏死，汇管区少量淋巴细胞和或中性粒细胞浸润。

3 讨论

本文观察了藏降脂胶囊最大耐受量为17.25g／kg，是临床剂量的441倍，连续观察7d，小鼠外观、行为、体重增长等均和对照组无明显差异，未出现小鼠死亡情况，各组小鼠解剖经肉眼观察，给药组小鼠心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、肠等脏器亦无明显改变，取肝、肾光镜检查和对照组相比无明显差异。

长期毒性实验以藏降脂每天给按0.42g／kg、0.21 g／kg、和0.1g／kg连续灌胃90天，大鼠生长发育良好，无死亡，实验动物外观、行为活动、体重增长、主要脏器系数、血象、血液生化等指标与空白对照组比较均无显著性差异。藏降脂胶囊大剂量组给药45天后大鼠血清ALT有所下降（P＜0.05）；藏降脂胶囊小剂量组给药45天和给药90天后大鼠血清AST均明显有所下降（P＜0.05），停药15天后血清AST、ALT恢复正常（P＞0.05），但这些指标的改变并无实际的临床意义，可能是由于动物对药物的不适应引起的暂时性改变。对心、肝、脾、肺、肾、肾上腺等主要脏器组织结构肉眼及光镜检查亦无异常发现。

以上毒性实验研究结果提示该药毒性低，在用药周期内是安全的。

［1］帝玛·丹增彭措.医著选集［M］.西宁：青海民族出版社，1994：440.

［2］陈奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2000：118，119.