液相色谱-串联质谱法测定饮料中16种邻苯二甲酸酯

刘 杰，郁宏燕，鲍立杰，罗 焱

(昆山市流通领域食品质量检测中心，江苏 昆山 215300)

液相色谱-串联质谱法测定饮料中16种邻苯二甲酸酯

刘 杰，郁宏燕，鲍立杰，罗 焱

(昆山市流通领域食品质量检测中心，江苏 昆山 215300)

建立同时检测饮料中16种邻苯二甲酸酯的液相色谱-质谱联用检测方法。用甲醇提取饮料中的邻苯二甲酸酯，采用Aglilent Eclipse plus C18柱(2.1mm×150mm，3.5μm)，以0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液作为流动相，梯度洗脱，质谱检测器检测，多反应监测定量。方法检出限为0.005～0.051mg/kg，回收率为89.1%～105.1%，相对标准偏差为0.8%～4.1%，可以满足饮料中邻苯二甲酸酯的检测要求。

邻苯二甲酸酯；液相色谱-质谱；饮料

2011年5月，从台湾饮料业开始的“塑化剂风波”引起了社会各界的广泛关注，不法分子用塑化剂生产食品添加剂“起云剂”，造成下游食品受到污染。截止2011年6月7日台湾地区已公布受塑化剂污染企业279家，产品948种。卫生部2011年第16号公告更是将塑化剂的主要成分邻苯二甲酸酯(PAEs)列入《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单(第六批)》。邻苯二甲酸酯类具有种类多、难以降解、生物富集性强的特点，对人体、生物体及植物均有较大的毒性，该类污染物对人类的危害主要表现在致癌、致畸性以及免疫抑制性，尤以人体生殖功能异常最为引人注目[1-6]。

据文献报道，邻苯二甲酸酯的检测方法主要有光谱法[7]、气相色谱法[8]、液相色谱法[9-11]、气质联用法[12-15]、液质联用法等[16-17]。国内文献以气质联用法居多，并且很少有同时测定十多种邻苯二甲酸酯的文献报道。目前为止，食品方面的国家检测标准也仅有气质联用法一种[18]。本研究拟采用液高效相色谱(high performance liquid chromatography)质谱(mass spectrometer)联用法测定饮料中的邻苯二甲酸酯，以期为其方法的建立提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

饮料 市售。

标准物质：苯二甲酸二异丁酯(DIBP)、邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯(DMEP)、邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯(BMPP)、邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯(DEEP)、邻苯二甲酸二戊酯(DPP-1)、邻苯二甲酸二己酯(D H X P)、邻苯二甲酸丁基苄基酯(BBP)、邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯(DBEP)、邻苯二甲酸二环己酯(DCHP)、邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)、邻苯二甲酸二苯酯(DPP-2)、邻苯二甲酸二正辛酯(DNOP)、邻苯二甲酸二壬酯(DNP)，16种标准品均为Dr.Ehrenstorfer品牌，纯度均大于99.5%。甲醇(HPLC级)、乙酸铵(GR)。

1.2 仪器与设备

1290-6410B液相色谱-质谱联用 美国Agilent公司； Direct-Q 纯水仪 美国密理博公司。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

色谱柱：Aglilent Eclipse plus C18(2.1mm×150mm，3.5μm)；流动相：0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液；柱温：3 0℃；进样量：5 μL。

1.3.2 质谱条件

操作模式：ESI正离子模式；干燥气流量：10L/min；干燥气温度：350℃；毛细管电压：4000V；喷雾压力：30psi。

1.3.3 样品处理

准确称取样品5g(精确至0.01g)于25mL容量瓶中，加入约10mL甲醇，超声波振荡30min，平衡至室温后用甲醇定容。用离心管离心后，取上清液待测。注意，本实验所接触的所有实验器具均要求为玻璃材质，并要求做全程溶剂空白实验。

1.3.4 标准曲线绘制

准确称取1.1节中所述16种标准品各10mg(精确至0.01mg)，用甲醇配成1000mg/L的标准储备液，于4℃条件下密封保存。

将标准储备液用甲醇稀释成0.05、0.50、1.00、2.00、5.00mg/L的标准使用液，通过液相色谱-质谱联用仪测定，以多反应监测(multiple reaction monitoring，MRM)子离子峰面积对质量浓度做标准定量曲线。

1.3.5 定性和定量

样液经液相色谱-质谱联用仪测定，通过保留时间及多反应监测MRM子离子相对丰度定性，标准曲线外标法定量。

2 结果与分析

2.1 色谱和质谱条件的优化

2.1.1 色谱条件优化

经实验可知，使用0.1%甲酸的甲醇溶液＋0.1%甲酸溶液体系，采用梯度洗脱的方式可以将16种邻苯二甲酸酯较好的分离(梯度见表1)。

表1 HPLC流动相梯度洗脱条件Table 1 Mobile phase gradient program for HPLC analysi

2.1.2 质谱条件优化

将16种PAEs标准使用液进行质谱全扫描，找到母离子，然后优化传输电压和碰撞能量，最后分6个时间段进行多反应监测，质谱优化条件参数见表2，多反应监测MRM离子流图见图1。本方法采用的分6个时间段进行MRM多反应监测，能最大程度的提高仪器灵敏度和准确度，从而实现16种PAEs的同时测定，优于其他文献报道[16]。

表2 质谱优化条件Table 2 Optimized mass spectrometric parameters for 16 PAEs

图1 多反应监测离子流图Fig.1 MRM Ion current chromatograms of 16 PAEs

表3 线性关系和检出限Table 3 Linear ranges and detection limits for 16 PAEs

2.2 标准曲线、线性范围和检出限

按1.3.4节的方法制作标准曲线，得到线性方程和相关系数，结果表明在相应的线性范围内，线性关系良好(表3)。取经预先测定不含PAEs的饮料，添加低浓度PAEs后，以3倍信噪比计算检出限，10倍信噪比计算定量限，结果见表3。

2.3 回收率与精密度

表4 回收率和精密度Table 4 Average recovery rates and precision RSD for 6 replication determinations

为了验证方法的准确度和精密度，对饮料样品进行了高、中、低3个不同水平的标准添加回收实验，每一水平分别做6份平行实验，计算平均回收率和相对标准偏差(relative standard deviation，RSD)，以回收率表示准确度，相对标准偏差表示精密度。结果表明(表4)，回收率为89.1%～105.1%，相对标准偏差为0.8%～4.1%，方法回收率和精密度良好，能满足检测的要求。经实验比对，本方法回收率、重复性等实验结果均优于同等条件的国标气质联用法。

2.4 样品测定

随机购买10批次的国产饮料，采用本实验建立的方法进行检测。经检测，除有3批次饮料检出0.33～0.89mg/kg的DEHP之外(低于GB 9685—2008《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》最大迁移量要求，可能与包装迁移有关)，其他均低于方法检出限，经与GB/T 21911—2008《食品中邻苯二甲酸酯的测定》检测结果对比，检测结果一致。

每次进样完后，需长时间自动清洗进样针以降低残留。实验发现，采用50%的甲醇溶液自动清洗进样针5s以上便能满足要求。

3 结 论

针对邻苯二甲酸酯的检测，国内文献以气质联用法居多，并且很少有同时测定十多种邻苯二甲酸酯的文献报道。目前为止，食品方面的国家检测标准也仅有气质联用法一种，本实验建立了同时检测饮料中16种邻苯二甲酸酯的液相色谱-质谱联用法。方法检测限为0.005～0.051mg/kg，回收率为89.1%～105.1%，相对标准偏差为0.8%～4.1%，可以满足饮料中邻苯二甲酸酯的检测要求。经试验比对，本方法回收率、重复性等实验结果均优于同等条件的国标气质联用法。

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Determination of 16 Phthalate Esters in Drinks by HPLC-ESI-MS/MS

LIU Jie，YU Hong-yan，BAO Li-jie，LUO Yan
(Circulating Food Quality Supervision and Inspection Center of Kunshan, Kunshan 215300, China)

An HPLC-ESI-MS/MS method was developed for the simultaneous determination of 16 phthalate esters (PAEs)in drinks. Methanol was used to extract PAEs in drinks. The separation was performed on an Aglilent Eclipse plus C18 (2.1 mm ×150 mm, 3.5 μm) column with a gradient mobile phase mixture composed of water containing 0.1% fomic acid and methanol containing 0.1% fomic acid. A tandem mass detector was used for the detection and quantification of PAEs in the multiple reaction monitoring (MRM) mode. The results showed that the limit of detection of the developed method was in a range of 0.005－0.051 mg/kg. The average recovery rates of 16 PAEs across three spike levels were 89.1%－105.1% with relative standard deviation (RSD) of 0.8%－4.1%. This method could meet the requirements for the determination of PAEs in drinks.

PAEs；HPLC-ESI-MS/MS；drinks

TS207.3

A

1002-6630(2012)18-0211-05

2011-07-11

刘杰(1986—)，男，助理工程师，本科，主要从事食品检验分析研究。E-mail：liujiejienjut@163.com