维药小檗叶中小檗碱的HPLC测定法
2012-10-24新疆农业大学食品科学与药学学院830052张小梅
新疆农业大学食品科学与药学学院（830052）张小梅
新疆伊犁哈萨克自治州食品药品检验所（835000）库瓦尼西•帕孜力江
维药小檗叶为小檗科植物落叶灌木黑果小檗(Berberis heteropoda Schrenk.)、红果小檗（Berberis nummularia Bge）和伊犁小檗（Berberis iliensis M.Po）的干燥叶。其中含有小檗碱、有机酸、维生素C等多种成分。盐酸小檗碱被认为是小檗的药效成分之一。维吾尔民族常用于治疗口舌生疮、干裂、咽喉炎、肺结核等疾病。本实验参照文献方法，建立了HPLC法用于测定小檗叶中的主要成分小檗碱，为小檗叶质量标准的制定提供一定的参考和依据。通过方法学考察发现该法简便、稳定、可靠，可对本品进行质量控制。
1 仪器和试药
日本岛津公司全自动液相色谱仪（SPD－20A紫外检测器，CBM－20A系统控制器，LC-20 AT四元单泵，SIL-20A自动进样器）；Mettler XS205型十万分之一，XS204型万分之一分析天平；KQ-500DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。盐酸小檗碱对照品购于中国药品生物制品检定所（批号：110713-200609），水（艾柯超纯水），乙腈（色谱纯），其余试剂均为分析纯。小檗叶采于新疆伊犁河谷（批号：20110501，20110527，20110616，20111022）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Shimadzu C18色谱柱（250 mm×4.6 mm）；流动相：乙腈0.1%磷酸（50:50）（每100 ml加十二烷基硫酸钠0.1g）；检测波长：265 nm；体积流量：1.0 ml/min；进样量：10 µl；柱温：30℃；理论板数按盐酸小檗碱对照品计算不低于6000。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品10mg，加流动相制成每1ml含4µg的溶液，即得。
2.3 供试品溶液制备 将干燥小檗叶粉碎（过三号筛），精密称取2g置50ml量瓶中，加流动相约49ml，摇匀，超声提取40分钟，放冷，加流动相至刻度，摇匀，用0.45µm微孔过滤器过滤，即得。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察 精密称取105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，用流动相溶解定容后分别稀释成含盐酸小檗碱1.00，2.00，4.00，6.00，10.00，16.00 µg/ml标准溶液，各进样10 µl，按色谱条件测定，以对照品溶液的进样浓度（X）对峰面积积分值（Y）回归得直线方程：y=41828.59x+3359.72，r=0.9999。表明盐酸小檗碱在1.00～16.00µg /ml范围呈良好的线性关系。
附表 不同季节小檗叶粉样品中小檗碱的含量
2.4.2 精密度试验 分别精密吸取对照品溶液10 µl，重复进样5次，盐酸小檗碱峰面积积分值的RSD为0.2%，表明仪器进样精密度良好。
2.4.3 稳定性试验 取供试品溶液分别在4小时，8小时，16小时，24小时，48小时，72小时进样10 µl，测定盐酸小檗碱峰面积，计算得盐酸小檗碱的平均质量分数为0.046 mg/g，RSD为0.78%，表明供试品溶液在制备72h后基本稳定。
2.4.4 重现性试验 取同一样品6份，平行制备供试品溶液，分别进行测定,计算得盐酸小檗碱的平均质量分数为0.048 mg/g，RSD为0.43%。
2.4.5 加样回收率 精密称取供试品2g，共6份，分别精密加入0.1 mg/ml盐酸小檗碱对照品溶液1 ml，制备供试品溶液，进行测定，计算得平均回收率为98.37%，RSD为0.79%。
2.4.6 样品测定 分别称取不同季节采收的小檗叶粉，制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样分析，外标法计算样品中小檗碱的含量，结果见附表。
3 讨论
从样品测定结果看出，花前期，花期的小檗叶中小檗碱含量较高，果期次之，秋后的小檗叶质量差[1]。
