动态浊度法定量检测地龙注射液中的细菌内毒素

2012-10-19广东省佛山市禅城区中心医院528031张朝阳欧有权罗润嫦赖永娥

首都食品与医药 2012年16期

广东省佛山市禅城区中心医院（528031）张朝阳欧有权罗润嫦赖永娥

本文通过动态浊度法定量检测地龙注射液中的细菌内毒素含量，建立地龙注射液中细菌内毒素定量分析的方法。

1 材料与仪器

地龙注射液（批号：0909404、901007、090702，规格：2ml/支，广东省博罗先锋药业集团有限公司）；动态浊度鲎试剂（批号：0907252，1.25mL/支，湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素工作标准品（批号：150601-200961，150/支，中国药品生物制品检定所）；细菌内毒素检查用水（批号：0909080，5mL/支，湛江安度斯生物有限公司）；BET-32B型细菌内毒素测定仪（天津大学无线电厂）；ZH-2型漩涡混合器（天津药典仪器厂）。

附表1 标准曲线的可靠性试验

附表2 地龙注射液干扰预实验结果

附表3 地龙注射液定量检查结果

2 方法与结果

2.1 细菌内毒素限值的确定按细菌内毒素限值公式L=K/M，K为人用每kg体重每1h最大可接受的内毒素剂量，非放射性注射剂的K值为5.0Eu•kg-1•h-1，M为1h内每kg体重人的最大给药剂量。地龙注射液〔国家食品药品监督管理局中成药地方标准上升国家标准部分（内科肺系一分册）WS-11340（ZD-1340）2002〕一次2ml，其L值为L=K/M=5/（2/60）=150Eu/ml。考虑到药厂可作中间产品的质量控制，把安全系数提高5倍。限值确立为L=150Eu/ml÷5=30Eu/ml。

2.2 标准曲线的制作及可靠性[1]用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品进行溶解稀释，使其最终内毒素浓度分别为5.0，1.0，0.2，0.04Eu/ml稀释系列。各取0.2ml分别加到预先加有0.1ml动态浊度鲎试剂反应管内，混合均匀。立即插入BET-32B型细菌内毒素测定仪进行自动检测，其中每一浓度做2支平行管，并同时做2支阴性对照管（NC）（见附表1）。

结果标准曲线为lgT=2.7465+（-0.22252lgC），r=0.9931，|r|＞0.980，标准曲线最低内毒素浓度点λ1=0.04Eu/ml，阴性对照内毒素小于标准曲线最低点，标准曲线成立。

2.3 干扰实验

2.3.1 供试品最大稀释倍数计算[1]按公式MVD=L•C/λ，地龙注射液的L=30EU/ml，C为1.0 ml/ml，选取0.04～5.0Eu/ml的范围测试。标准曲线的最低内毒素浓度λ1为0.04Eu/ml，其最大稀释倍数均为MVD=30×1.0/0.04=750倍。

2.3.2 供试品溶液配制及干扰预实验[2][3]将地龙注射液（批号0909404）的pH值调至6.0～8.0，用细菌内毒素检查用水依次稀释为1∶50，1∶100，1∶200等比系列稀释液，作为供试品空白管（Et）。同时再分别取内毒素标准溶液浓度为2λ(λ为中点浓度0.5 Eu/ml)和供试品各等比系列的2倍浓度稀释液，在稀释用试管中等量混合，得到在此稀释倍数下含λm内毒素的供试品溶液，作为供试品阳性管（Es）。分别取上述溶液各0.2ml加入预先加有0.1ml动态浊度法鲎试剂反应管内，混合均匀。立即插入BET-32B型细菌内毒素测定仪进行自动检测，其中每一浓度做2支平行管，并同时做2支阴性对照管（NC），2支阳性对照管（PC）。计算回收率（%）=（Es-Et）/λ×100%（见附表2）。供试品等比稀释液中，1∶50，1∶100，1∶200稀释液的回收率分别为147%和113%和116%。稀释液的回收率均在50%～200%之间，符合中国药典规定。在日常检查中选1∶100稀释液。

2.4 定量检查根据以上预干扰实验结果，对3批地龙注射液以1∶100稀释液进行定量检查（见附表3）。