高效液相色谱法测定四环素片的含量

2012-10-19广东省韶关市食品药品检验所512028严晓明朱兴保刘旺培

首都食品与医药 2012年16期

广东省韶关市食品药品检验所（512028）严晓明朱兴保刘旺培

广东省韶关市皮肤病医院（512000）李志林

四环素片是具有广谱抑菌作用（高浓度时具杀菌作用）的四环素类抗生素口服制剂，是目前生产和临床应用最久的抗生素之一，对革兰氏阴性菌和阳性菌均有抑制作用，临床上多用于呼吸道、肠道、泌尿道感染。卫生部药品标准[1]收载的四环素片的含量测定方法为中国药典规定的抗生素微生物检定法，该方法检验周期长，准确度差，操作繁琐，影响因素较多，不能满足批量生产质量控制的需要。因此，笔者采用高效液相色谱法取代效价法测定四环素片的含量，检验周期短、结果准确、重现性好、稳定性好，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱系统（美国安捷伦公司），包括G1322A 真空脱气机，G1311A四元泵，G1329A自动进样器，G1316A柱温箱，G1314B可变波长紫外检测器；盐酸四环素对照品（中国药品生物制品检定所，含量为88.2%，批号为130488-200403）；四环素片和四环素阴性对照品（厂家提供，样品批号分别为20100803，20100903，20101003，规格为0.25g）；水为纯化水，甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：SUPELCO Discovery C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：0.1%磷酸-甲醇（40∶60）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：268nm；进样量：10μl。

2.2 溶液制备精密称定盐酸四环素对照品10.13mg，置于100ml容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取四环素片10片，精密称定，研细，精密称取0.1488g（约相当于四环素100mg），置于200ml容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密吸取滤液10ml，置于50ml容量瓶中，用0.1mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取不含四环素的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察系统适用性试验：取2.2项下3种溶液，按拟订方法进行测定。结果显示，阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱峰相应保留时间位置上未出现吸收峰，由此可见，其他成分对四环素测定无干扰，四环素的保留时间约为3min，理论板数按四环素峰计算不低于10000，该方法专属性良好。

2.4 线性关系考察精密吸取对照品溶液1，2.5，5，10，20，40，80μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，测定峰面积（见附图）。以进样量为横坐标X、峰面积为纵坐标Y作图，得线性回归方程Y=2309.03X+332.64，r=0.9983（n=7）。结果表明，四环素进样量在0.1～8.0μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.5 精密度试验精密吸取对照品溶液10μl，重复进样6次，结果显示，峰面积平均值为2619.33，RSD为0.22%（n=6），这表明仪器精密度良好。

2.6 重现性试验取同一批号样品，依供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，分别测定峰面积，计算四环素含量。结果测得平均含量为95.66%，RSD为0.35%（n=6），试验结果表明该法重现性良好。

附表四环素加样回收试验测定结果(n=6)

2.7 稳定性试验取同一供试品溶液10μl，依法分别于0，2，4，6，8，10，12h进样，记录色谱峰面积。结果RSD为0.52%（n=6），试验结果表明，供试品溶液在室温条件下12h内稳定。

2.8 加样回收试验精密称取已知含量的样品6份，分别精密加入一定量盐酸四环素对照品，按供试品溶液制备方法制备，依法测定，计算回收率，结果见附表。

2.9 样品含量测定取3批样品，依法制备供试品溶液，精密吸取10μl，测定峰面积，按外标法计算含量。结果显示，高效液相色谱法所测样品中四环素含量分别为93.35%，93.78%，93.53%，中国药典2010年版[2]收载的微生物检定法所测样品中四环素含量分别为93.46%，93.82%，93.69%。