龙牙缓释片释放度测定及体外释药机制研究

陈大忠，刘 磊，王海龙，李 强

(1.黑龙江中医药大学中医药研究院，哈尔滨150040;2.黑龙江省军区医院，哈尔滨150001;3.北京中医药大学中药学院，北京100102)

龙牙缓释片是将从东北地道中药材龙牙楤木中提取获得的齐墩果酸成分制成的缓释片剂，临床用于治疗黄疸型肝炎、慢性肝炎、酒精肝和脂肪肝等[1].目前临床应用的主要有胶囊剂.通过对其缓释片中齐墩果酸释放度的测定，探讨其体外释药机制.

1 仪器与试药

美国Waters 600E-2487型高效液相色谱仪，美国Millennium32色谱工作站数据处理系统;电子分析天平BS124SGC-06(北京赛多利斯仪器有限公司);D-800LS智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂).乙腈(色谱级)，其他均为分析纯，齐墩果酸对照品(中国生物制品检定所).羟丙基甲基纤维素HPMCK4M(上海COLORCON有限公司);聚乙烯吡咯烷酮(上海化学试剂公司);微晶纤维素、硬脂酸镁(山东三泰化工有限公司);乳糖(天津化学试剂有限公司).

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈—0.1%磷酸溶液(67∶33)[2];检测波长:210 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃[3].

2.2 齐墩果酸缓释片的制备

将主药与HPMC及其他辅料以等量递增法混合均匀，过筛(80目)，以质量分数0.6%PVP乙醇溶液为粘合剂，过20目筛，湿法制粒，70℃干燥整粒，加入适量硬脂酸镁压片，即得.

2.3 齐墩果酸的测定方法

2.3.1 对照品溶液制备

精密称取齐墩果酸对照品，置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液(1.024 mg/mL).

2.3.2 供试品溶液制备

精密量取溶出液5 mL，经0.8μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液.

2.3.3 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.1、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分别置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得.在210 nm处测定系列质量浓度的齐墩果酸峰面积值，以吸收峰面积为纵坐标，对照品质量浓度为横坐标，绘制标准曲线.回归方程为:y=199 316.07x-686.16，r=0.999 9.齐墩果酸在0.204 8～5.120 0μg之间呈良好的线性关系.

2.3.4 精密度试验

精密吸取2.3.2项供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，进行测定.RSD为0.72%(n=6)，精密度良好.

2.3.5 稳定性试验

精密吸取2.3.2项供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，分别在1、2、4、8、12、24 h进行测定.RSD为1.01%(n=6)，供试品24 h内稳定性良好.

2.3.6 回收率试验

精密称取供试品，按其齐墩果酸含量计加入，加入80%、100%、120%的齐墩果酸对照品，用溶出介质(0.5%十二烷基硫酸钠溶液，磷酸盐调pH值7.0±0.1)900 mL溶解，制备成供试品溶液，测定计算齐墩果酸量，以测得量与加入量对比，齐墩果酸回收率为98.49%.

2.4 释放度考察

2.4.1 体外释放度的测定

按照中国药典2005版体外释放度试验转篮法[4]，释放介质体积分数0.5%十二烷基硫酸钠溶液900 mL(磷酸盐调pH值7.0±0.1)，温度(37±1)℃，转速100 r/min.分别于2、4、6、8、10、12 h取样5 mL(补充等体积同温介质)，滤过，取续滤液20μL和对照品溶液20μL，分别注入液相色谱仪，测定峰面积值，外标法测定时间点内的累计释放度.

2.4.2 体外释放度的重现性考察

测定3批龙牙缓释片不同时间的释放度，考察批次间释放度的重现性，实验结果见表1.

表1 缓释片释放度重复性试验结果(n=6)

利用相似因子f2检验考察3批缓释片之间的释放度差异，计算方式如下.

其中:n为取样点个数;Rt为t时间参比样品的释药量;Tt为t时间受检样品的释药量.当f2在0～50之间时，两因素有差异;f2值在50～100之间，表明两条释放曲线相似，即受试制剂和参比制剂间释药无差别[5].结果表明，3批样品之间无差异.

2.4.3 体外释放度的均一性考察

以其中一批为对象，在2、4、6、8、10、12 h考察同一批缓释片的6片释放度的均一性.结果见表2.结果表明，缓释片释放均一性较好.

表2 缓释片释放度均一性试验结果(n=6)

2.5 缓释片释药机制的探讨

对释放度进行零级动力学方程、一级动力学方程、Higuchi模型、Ritger-Peppas方程的拟合，分别以各模型拟合方程预测各时间点的累计释放百分率与实测值比较，计算AIC值，并求出决定系数R2(相关系数R的平方值).根据各模型拟合方程的R2值最大、AIC值最小的原则，确定缓释片体外释放的最佳拟合模型，并根据模型拟合结果对释放规律进行探讨[6].

AIC的计算公式为:AIC=N ln Re+2P，其中:N为实验数据的个数，本试验取7;P为所设模型参数的个数，本试验取2.Re的 计 算 公 式 为:，其中Wi为权重系数，可取1.

拟合度结果见表3.

表3 龙牙缓释片拟合数据结果

3 讨论

1)根据相关系数表明，龙牙楤木中物质基础成分齐墩果酸缓释片符合Higuich方程、零级动力学方程和Ritger-pappas[7]方程优于一级动力学方程，其体外释放机制比较接近Higuich方程、零级动力学方程和Ritger-pappas方程释药模型.

2)根据Ritger-peppas指数释药模型F(t)=ktn中[8]，F(t)为药物在指定时间的累积释放率，k为常数，n为药物释放机制的特殊参数，当n＜0.45时，药物释放符合Ficks扩散机制，当0.45＜n＜0.89时，药物的释放为扩散与溶蚀协同作用，当n＞0.89时，药物的释放为骨架溶蚀机制.本实验中Peppas方程:Q=-2.212 7+0.880 1t，r=0.998 3，n为0.88＜0.89，其体外释放机制为扩散与骨架溶蚀协同作用机理，由于齐墩果酸为水难溶性药物，偏于骨架溶蚀机制，可以减轻药物突释的现象.

[1]周志勇，袁 丁.齐墩果酸药理作用研究进展[J].中国医院药学杂志，2008，28(23):2031-2033.

[2]林瑞群，姚五湖.高效液相色谱法测定肝速康胶囊中齐墩果酸含量[J].中国药业，2009，18(9):35.

[3]韦建华，李耀华，蔡少芳，等.HPLC测定柿子中齐墩果酸与熊果酸的含量[J].中国实验方剂学，2010，16(13):48-50.

[4]国家药典委员会.中国药典二部2005版[Z].北京:化学工业出版社，2005，77.

[5]聂诗明，张 志，方达任，等.复方祛风缓释片释放度的测定及体外释药特性研究[J].湖北中医学院学报，2009，11(3):37-39.

[6]万发里，邓树海，苗彩云.氧化苦参碱缓释片的制备及其体外释药动力学研究[J].中国药学杂志，2005，40(13):1002-1003.

[7]刘军田，陈修毅.缓控释骨架片药物体外释放行为的评价方法[J].齐鲁药事，2005，24(3):178-179.

[8]刘亚妮，易以木，陈华庭，等.齐墩果酸缓释片的研制及体外释放度考察[J].中国医院药学杂志，2008，28(5):345-347.