地皮菜粗多糖的抗氧化性研究

2012-10-13张先廷周俊丽王迎进

长治学院学报 2012年5期

张先廷，周俊丽，王迎进

（1.忻州师范学院专科部，山西忻州 034000；2.忻州师范学院生化分析技术研究所，山西忻州 034000）

引言：

地皮菜又称地木耳、地软、地耳、地衣等，为念珠藻属植物，是蓝藻科念珠藻属的片状藻类和真菌的复合体[1]，主要分布在石灰石区和碦斯特岩溶地带。现代研究表明地皮菜中含有丰富的蛋白质、多糖、维生素、钙、磷、铁等元素[2]。据中国药典记载，地皮菜对补充维生素、蛋白质、清热解毒、凉血明目、夜盲、皮疹赤热等具有明显滋补食疗效果。目前，有关地皮菜多糖的报道主要研究了地皮菜多糖水热浸提工艺、纯化及其抑菌作用[3-4]。本文对超声提取地皮菜多糖对3种自由基的清除作用及其还原能力做了一个较为全面系统的研究，旨在为广泛地利用地皮菜提供一定的实验依据。

1 材料

1.1 试剂

地皮菜（2011年5月购于山西忻州农贸市场）；葡萄糖、浓硫酸、苯酚、石油醚、三氯甲烷、正丁醇、无水乙醇（均为分析纯），实验用水为二次蒸馏水。

1.2 仪器

752型紫外光栅分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；JYD-650L超声细胞粉碎机（上海之信仪器有限公司）；SHZ-D（III）型循环水式真空泵（河南豫华仪器有限公司）；HH-S型恒温水浴锅（陕西太康生物科技有限公司）。

2 实验方法

2.1 标准曲线的绘制

精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品10 mg，加水溶解，定容至100 mL容量瓶中，得0.1 mg/mL葡萄糖标准溶液。分别移取葡萄糖液0.10、0.20、0.30、0.40、0.50、0.60、0.70、0.80、0.90 mL 于10 mL比色管中,加水至2 mL，再加5%的苯酚溶液1 mL和浓硫酸5 mL，沸水浴15 min。冷却后在490 nm下，以试剂空白为参比，测定吸光度A。以样品浓度c对吸光度A作图，得回归方程：Y=52.767x-0.0095，R2=0.9994。

2.2 地皮菜多糖的提取及含量测定

将地皮菜洗净、烘干、粉碎、过筛（60目）后得地皮菜粉。称取地皮菜粉50 g于圆底烧瓶中，用石油醚500 mL（沸程60-90℃）回流脱脂2 h，抽滤，挥干。用95%乙醇500 mL回流2 h（以除去地皮菜中的小分子），干燥得地皮菜药渣。准确称取脱脂后地皮菜粉20 g于烧杯中，加蒸馏水250 mL，在超声功率为50%，提取温度为80℃下，超声提取30 min，过滤。滤渣重提两次，合并滤液，浓缩至约100 mL，加入4倍体积的无水乙醇，4℃静置24 h，离心，洗涤，蒸馏水复溶得地皮菜粗多糖试液。按标准曲线实验方法测得地皮菜中粗多糖含量分别为3.76 mg/mL。

2.3 地皮菜多糖对自由基清除作用的测定

2.3.1 羟自由基清除作用按文献[5]方法测定

2.3.2 超氧阴离子自由基清除作用按文献[5]方法测定

2.3.3 DPPH·自由基清除作用按文献[6]方法测定

2.3.4 还原能力按文献[7]方法测定

3 结果与分析

3.1 地皮菜多糖对羟自由基的清除作用

羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标。地皮菜粗多糖对·OH的清除效果见图1。由图1可知，随着浓度的增加，对·OH的清除作用逐渐增强。浓度在0-0.3 mg/mL范围内，多糖对·OH的清除作用急剧增加；当浓度高于0.3 mg/mL时，地皮菜多糖对·OH的清除作用随浓度的增加缓慢提高，最高达到54.4%。

图1 地皮菜多糖对·OH的清除作用

3.2 地皮菜多糖对超氧阴离子自由基的清除作用

地皮菜多糖对·O2-清除效果见图2。由图2可知，随着多糖浓度增加，对·O2-清除率逐渐升高。在反应开始4 min，浓度为0.6 mg/mL时，地皮菜多糖和BHT对·O2-的清除率分别为67.60%和79.85%，说明地皮菜多糖具有较强清除·O2-能力。在浓度范围为0-0.4 mg/mL时，地皮菜多糖的清除能力与BHT相当。