精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠的治疗作用研究

张 悦，陈军霞，卞 凌，潘林梅

（1.南京医科大学附属南京妇幼保健院，江苏 南京 210004；2.南京中医药大学中药复方分离工程重点实验室，江苏 南京 210029）

更年期综合症是更年期妇女卵巢功能减退，雌激素水平降低，引起月经周期变化、潮热、心悸、抑郁、易激动，注意力难于集中等。临床上多补充雌激素以缓解症状，但长期应用激素能诱发妇科肿瘤，本院在临床中发现精制紫河车胶囊对更年期综合征具有良好效果，为研究其机制，本实验观察精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠的治疗作用。

1 材料

精制紫河车胶囊（南京市妇幼保健院制剂室，由胎盘等组成，内含生药0.5 g /粒）；己烯雌酚（北京中新制药厂，批号：20110301）；水合氯醛（岳阳威特瑞化工有限公司，批号：20100821）；戊巴比妥钠（南京生兴生物技术有限公司，批号：20081216）；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）测试盒、谷胱甘肽 过氧化物酶（GSH-PX）测试盒，由南京生兴生物技术有限公司提供；其余试剂均为分析纯。

SPF级ICR雌性小鼠，上海斯莱克实验动物有限公司提供，实验动物生产许可证SCXK（沪）2007-0005，体质量18～22 g，动物分笼饲养，室温（22±1）℃，自由饮水摄食。

2 实验方法与结果

2.1 去势小鼠造模与分组给药方法[1]

取ICR雌性小鼠，在鼠板上腹部朝上，用戊巴比妥钠麻醉，在下腹部、离开脊柱两侧各2 cm处切口，分离肌肉，用小镊子取出卵巢；结扎，剪去卵巢，其余组织放回腹腔内，缝合。假手术组打开腹腔即缝合。注射适量抗生素，防止感染。小鼠作阴道涂片检查，确定为间情期的小鼠进行下一步研究，将造模成功小鼠分为6组：假手术组、模型组、己烯雌酚组（0.001g/kg）、精制紫河车胶囊低、中、高剂量组分别为6×0.0026=（0.78、1.56、3.12 g/kg）。精制紫河车胶囊临用前用生理盐水配成混悬液，灌胃给药，其余组灌胃相同容积生理盐水溶液。

2.2 自主活动的影响实验

各组动物在给药后7 d，测定自主活动的影响，方法是将小鼠置于自主活动仪中，测定自主活动次数，精制紫河车胶囊各组与模型组相比，能显著减少小鼠的自主活动次数（P＜0.01），己烯雌酚组也能减少自主活动次数。结果见表1。

表1 精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠自主活动的影响（±s，n=10）

表1 精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠自主活动的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较*P＜0.05；**P＜0.01。

组别 剂量（g.kg-1）自主活动数假手术组 — 96.3±17.3*模型组 — 134.7±23.1己烯雌酚 0.001 85.2±26.8*精制紫河车胶囊组 0.78 84.8±18.9*1.56 79.6±22.7*3.12 75.8±17.5**

2.3 学习记忆的影响实验

上述各组动物，在给药10 d后，进行学习记忆的影响实验，将小鼠放入反应箱内，通以36V交流电，训练5 min并记录错误次数，以此作为学习记忆能力。在24 h后重作测试，记录第一次跳下平台的潜伏期和5 min内错误次数。

结果表明，精制紫河车胶囊各组与模型组相比，能改善小鼠的学习记忆能力；24 h后测试，精制紫河车胶囊各组与模型组相比，能延长潜伏期，明显减少错误次数。己烯雌酚组亦有相同效果。结果见表2。

表2 精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠学习记忆能力的影响（±s，n=10）

表2 精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠学习记忆能力的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

错误次数假手术组 — 2.3±1.5* 86.3±23.7* 1.9±1.1*模型组 — 5.8±2.1 26.1±26.8 3.7±1.4己烯雌酚 0.001 3.2±2.4* 79.3±17.7* 2.0±0.8*精制紫河车胶囊组 0.78 3.4±3.1* 58.6±19.4* 2.3±1.4*1.56 2.9±2.5* 60.1±22.6* 1.8±1.8**3.12 3.1±1.8** 67.3±25.2* 1.7±0.7**组别 剂量（g/kg-1）训练错误次数潜伏期（S）

2.4 对镇静催眠的影响实验

上述各组动物给药15 d后，进行对镇静催眠的影响实验研究，首先在动物给药后1 h，腹腔注射戊巴比妥钠（35 mg·kg），观察如果小鼠15 min内翻正反射消失，并且时间超过1 min，表明造模成功。记录小鼠进入睡眠的潜伏期时间、睡眠小鼠数量及各组小鼠睡眠时间。

结果表明，精制紫河车胶囊各组与模型组比较，能增加进入睡眠状态的小鼠数量.缩短小鼠进入睡眠的潜伏时间，延长睡眠时间。己烯雌酚组具有类似效果。见表3。

2.5 血清中SOD、MDA、GSH-PX含量测定

上述各组动物给药40 d后，在最后一次给药后1 h，眼眶后静脉丛取血，分离血清，测定SOD、MDA、GSH-PX含量。

上述结果表明精制紫河车胶囊各组与模型组相比，能增加小鼠血清中SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，己烯雌酚组具有类似结果。见表4。

3 讨论

本实验通过建立小鼠更年期综合征模型，观察精制紫河车胶囊的作用机制，结果显示，精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠具有镇静催眠作用，并能提高学习记忆能力，增加SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，表明精制紫河车胶囊对自由基损伤有一定的保护作用，这为其临床用于治疗妇女更年期综合征提供了实验依据。[2]

表3 精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠睡眠的影响（±s，n=10）

表3 精制紫河车胶囊对去势雌性小鼠睡眠的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

组 别 剂量（g/kg-1） 入眠小鼠（只）入眠率（%）潜伏期（min）睡眠时间（min）假手术组 — 0 0 16模型组 — 0 0 16己烯雌酚 0.001 10 100 6.76±1.62* 24.52±21.65**精制紫河车胶囊组 0.78 3 30 6.97±1.15* 25.76±18.54 1.56 5 50 7.81±1.64** 26.51±21.92 3.12 9 90 8.78±0.93** 27.45±20.43

表4 精制紫河车胶囊对去势雌性血清SOD、MDA、GSH-PX的影响（±s，n=10）

表4 精制紫河车胶囊对去势雌性血清SOD、MDA、GSH-PX的影响（±s，n=10）

注：与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。

组别 剂量（g/kg-1）SOD（U·mL-1）GSH PX（S）MDA含量（nmoL·mL-1）假手术组 — 72.34±6.15* 156.33±14.73* 4.92±2.73*模型组 — 55.87±12.13 119.15±22.83 7.74±1.63己烯雌酚 0.001 73.41±8.35* 175.75±27.76* 5.10±1.68*精制紫河车胶囊组 0.78 69.19±9.21* 58.6±29.71** 5.93±1.24 1.56 69.63±9.72* 60.1±26.17** 4.38±1.18*3.12 73.93±10.33** 67.3±23.81* 4.87±0.97*

[1]徐叔云,卞如濂,陈 修.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,2005:805,827.

[2]方玉荣,王立金,周 昕.围绝经期妇女血清性激素水平与自由基/血脂含量的变化[J].实用妇产科杂志,2004,20(3):151-152.