寄生柑橘的根腐线虫种类鉴定

高小倩，刘国坤，肖 顺，张绍升

(福建农林大学植物保护学院，福建 福州 350002)

2010年7月至2012年1月，本研究对福建省柑橘线虫种类进行调查发现，一些生长衰退的柑橘根部受根腐线虫(Pratylenchus spp.)的侵染。据报道根腐线虫侵染柑橘能引起柑橘暴衰病[1－4]，因此，本研究对采自柑橘的根腐线虫种类进行鉴定，了解其对柑橘的危害性，为柑橘线虫病害诊断提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 样本采集

采集地为福建省南平市顺昌县洋墩乡洋墩村及漳州市长泰县五四果场的生长衰退的柑橘园，选择症状明显的病树采集病根及其根际土壤。

1.2 症状观察

肉眼观察发病树的地上部与根部症状，结合根组织染色进行观察和描述。

1.3 线虫分离与鉴定

利用改良贝曼漏斗法分离线虫，将其缓慢加热杀死后用TAF固定液固定，并制成临时玻片放在倒置显微镜下进行形态特征的观察及摄影、测量。线虫体表的细微结构特征采用扫描电镜进行观察。根据文献[4]－[7]进行线虫种类鉴定。

2 结果与分析

2.1 症状

调查表明，病树树势衰弱，叶片小、稀少，并出现僵硬和黄化。重病树的树冠枝叶稀少，多枯枝，最后整株果树枯死(图1A、1B)。病树抗寒、抗旱能力差，冬季大量落叶，春季花期提早，花多易落，坐果率低，落果严重，果实小，产量低。根腐线虫主要侵染幼根的皮层薄壁组织，通过在根组织内迅速繁殖大量破坏浅层根系。病树根系萎缩，极少甚至无营养根，细根表皮产生褐色伤痕，皮层腐烂，易剥落(图1C、1D)，病根组织内可解剖到病原线虫(图1E、1F)。

图1 根腐线虫对柑橘的为害症状Fig.1 Harm symptoms of root-lesion nematodes to citrus

2.2 病原线虫鉴定

经鉴定侵染柑橘的根腐线虫有2个种:咖啡根腐线虫[P.coffeae(Zimmermann，1898)Filipjev＆Schuurmans Stekhoven，1941]和玉米根腐线虫(P.zeae Graham，1951)。

2.2.1 咖啡根腐线虫 (1)测量值。♀♀(n=20):L=652(543 －748)μm，a=20.5(17.0 －25.3)，b=6.31(5.81 －7.20)，b'=4.50(4.37 －4.94)，c=20.80(18.74 －22.93)，c'=1.93(1.70 －2.08)，V=80.3(78.1 －81.9)，口针长 =17.4(17.1 －17.8)μm，背食道腺开口距口针基部球 =2.91(2.64 －3.27)μm，尾长度 =31.55(29.75 －36.29)μm，口针基部球高 =2.68(2.64 －2.70)μm，口针基部球宽 =3.82(3.75 －3.88)μm，食道腺覆盖肠的长度 =42.3(32.1 －47.5)μm。

♂♂(n=20):L=580(556 － 637)μm，a=22.7(19.9 －27.3)，b=6.33(5.34 － 7.69)，b'=4.48(3.69 －5.41)，c=19.4(16.8 －21.9)，c'=1.73(1.40 －2.01)，口针长 =17.4(16.1 －19.7)μm，背食道腺开口距口针基部球 =3.01(2.96 － 3.03)μm，尾长度 =30.1(27.6 － 33.1)μm，口针基部球高 =1.86(1.69 －2.29)μm，口针基部球宽 =2.86(2.64 －3.38)μm，食道腺覆盖肠的长度 =38.4(28.0 －52.6)μm。

(2)形态描述。雌虫虫体缓慢加热杀死后直伸或稍向腹面弯曲(图2A)。虫体环纹清晰，侧区具4条侧线。唇区稍缢缩，2个唇环，唇角钝圆(图2F)。头架中等发达，外缘向体后延伸至第1条体环处。口针粗短、发达，口针基部球圆形。背食道腺开口明显，距口针基部球约2.91 μm。中食道球卵圆形，轮廓清晰，有明显的瓣膜。食道腺覆盖于肠前端的腹面和侧面，覆盖长度约42.3 μm(图2B)。排泄孔位于食道—肠瓣门的前方，半月体紧靠排泄孔的前部，约占2个体环的宽度。单卵巢前伸，卵母细胞单行排列，受精囊明显，卵呈圆形，其内充满精子。后阴子宫囊长度约62.7 μm，约为体宽的2倍，末端有明显的细胞分化(图2C)。阴道短直，长约阴门处体宽的1/4(图2G)。尾部近似圆柱形，末端钝圆或平截，光滑，偶有缺刻，尾部环纹明显，宽约1.44 μm(图2J－2N)。侧尾腺口较小，位于尾的中后部。

雄虫常见，雌雄比例相近。雄虫体长略短于雌虫，前部较窄，口针基部球偏小，头部形态特征及唇环数目与雌虫相似(图2D、2H)。交合刺纤细，长度约为16.4(14.3 －19.8)μm，引带长约4.53 μm(图2E、2I)。

图2 咖啡根腐线虫的形态特征Fig.2 Morphological characters of P.coffeae

2.2.2 玉米根腐线虫 (1)测量值。♀♀(n=15):L=410(389 －457)μm，a=20.7(17.5 －24.1)，b=5.08(4.62 －6.02)，b'=3.61(3.34 － 4.02)，c=14.8(10.8 － 16.9)，c'=2.44(2.14 － 3.42)，V=71.8(68.5 －73.8)，口针长 =15.7(14.8 －16.5)μm，背食道腺开口距口针基部球 =2.64(2.18 －2.90)μm，尾长度 =28.4(24.6 －36.7)μm，口针基部球高 =2.73(2.44 －2.99)μm，口针基部球宽 =5.06(4.47 －5.71)μm，食道腺覆盖肠的长度 =33.6(26.7 －44.4)μm。

♂♂(n=1):L=352 μm，a=19.9，b=4.53，b'=3.30，c=16.0，c'=2.17，口针长 =13.9 μm，背食道腺开口距口针基部球 =2.53 μm，尾长度 =21.9 μm，口针基部球高 =1.61 μm，口针基部球宽 =3.39 μm，食道腺覆盖肠的长度 =29.1 μm。

(2)形态描述。雌虫虫体粗短，温热杀死后身体僵直或略向腹面弯曲(图3A)。虫体环纹较细，侧区具4条侧线。唇区较高，无明显缢缩，有3条唇环，第1条唇环明显比后2条唇环窄，唇拐角钝圆(图3B、F)。头架中等骨化，口针发达，口针基部球锚状，高2.73 μm，宽5.06 μm。中食道球卵圆形，轮廓较为清晰，有明显的瓣膜。排泄孔位于食道—肠瓣门的前方，半月体紧靠排泄孔的前部，食道腺从腹面及侧面覆盖于肠的前端，覆盖长度稍短，约33.6 μm。前生单卵巢，卵母细胞单行排列，受精囊不清楚，不缢缩，阴道直而短，约为阴门处体宽的1/3(图3G)。后阴子宫囊无细胞分化，长度约27.5 μm。尾端窄，锥圆，末端钝尖，光滑无纹，侧尾腺口位于尾的中后部(图3C、3H)。雄虫稀少，虫体纤细，前部较窄，口针基部球明显小于雌虫(图3D)，其他形态特征与雌虫相似。交合刺明显，长15.5 μm，引带长4.55 μm，侧尾腺口位于尾的中后部(图3E)。

图3 玉米根腐线虫的形态特征Fig.3 Morphological characters of P.zeae

3 讨论

据报道，柑橘可以遭受咖啡根腐线虫、短尾根腐线虫(P.brachyurus)和伤残根腐线虫(P.vulnus)等多种根腐线虫侵染而引起柑橘暴衰病，咖啡根腐线虫为优势种[8]，本研究从福建省生长衰退的柑橘根部分离和鉴定了咖啡根腐线虫和玉米根腐线虫，咖啡根腐线虫为优势种。本研究表明，根腐线虫侵染的柑橘园柑橘树表现黄化和衰退，为了证实该线虫对柑橘的危害性，目前正在进一步开展根腐线虫对柑橘的致病性研究。

[1]张绍升.植物线虫病害诊断与治理[M].福州:福建科学技术出版社，1999:129－131.

[2]张绍升，刘国坤，肖顺，等.果树疑难病害诊治图谱[M].福州:福建科学技术出版社，2006:11－20.

[3]张绍升.果树线虫病害和防治研究[J].果树科学，1996，13(1):10 －13.

[4]HANDOO Z A，GOLDEN A M.A key and diagnostic compendium to the species of the genus Pratylenchus filipjev，1936[J].Journal of Nematology，1989，21(2):202 －218.

[5]ROMAN J，HIRSCHMANN H.Morphology and morphomertrics of six species of Patylenchus[J].Journal of Nematogy，1969，1(4):363－386.

[6]SIDDIQI M R.C.I.H.Description of Plant-parasitic Nematodes Set 1，No.6:Pratylenchus coffeae[S].England:CAB International Institute of Parasitology，1972.

[7]FORTUNER R.C.I.H.Description of Plant-parasitic Nematodes Set 6，No.77:Pratylenchus zeae[S].England:Commonwealth Institute of Helminthology，1976.

[8]LUC M，SIKORA R A，BRIDGE J.Plant-parasitic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture[M].CAB Internathionl，UK，1990:452 －454.