食管鳞状细胞癌组织中EGFR、GST－π和癌基因C－erbB－2的表达及其意义

强 勇，徐艳辉，李忠东，钱建军，景 华

（南京军区南京总医院心胸外科，南京210002）

食管鳞状细胞癌组织中EGFR、GST－π和癌基因C－erbB－2的表达及其意义

强 勇，徐艳辉，李忠东，钱建军，景 华

（南京军区南京总医院心胸外科，南京210002）

目的本研究观察EGFR、GST－π和C－erbB－2在216例食管鳞癌中的表达及其意义。方法收集手术食管鳞癌标本，应用EnVision法免疫组化检测EGFR、GST－π和C－erbB－2。并分别比较高分化与中、低分化组，局部浸润较浅与较深组，有与无淋巴结转移组，临床分期较早与较晚组3种基因的表达，探讨3者与食管鳞癌临床因素间的关系。结果EGFR的表达与食管鳞癌分化程度（P＝0.036）、局部浸润（P＝0.022）、淋巴结转移情况（P＝0.037）、临床分期（P＝0.021）有相关性，GST－π和C－erbB－2的表达与局部浸润（P＝0.019、0.006）、淋巴结转移情况（P＝0.028、0.039）、临床分期（P＝0.012、0.027）紧密相关，与分化程度（P＝0.162、0.722）不相关。结论EGFR、GST－π和C－erbB－2联合检测对判断食管鳞癌生物学行为、预后及指导治疗有重要意义。

肿瘤，鳞状细胞；食管；EGFR；GST－π；C－erbB－2；免疫组织化学

食管癌是我国五大癌症之一，发病率和病死率一直居高不下。其治疗面临早期诊断困难、易出现局部浸润、淋巴结转移、耐药性等问题。以往研究证实EGFR、GST－π和C－erbB－2与上皮来源肿瘤的局部浸润、淋巴结转移、耐药性等问题密切相关［1－5］。本研究应用EnVision免疫组化法检测食管鳞状细胞癌组织中EGFR、GST－π和C－erbB－2的表达情况，观察它们与食管鳞癌临床因素的关系，以期为食管癌早期诊断、判断其生物学行为以及预后提供重要参考依据，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源 本研究收集病例，为本科2010年11月至2011年4月收治，术后病理学检查证实为食管鳞状细胞癌，排除术前行放疗、化疗及免疫治疗，共216例，其中，男151例，女65例；年龄42～79岁，中位年龄58岁。有淋巴结转移者68例，无淋巴结转移148例。按组织学分化程度：高分化者61例，中低分化者155例。按国际抗癌联合会（international union against cancer，UICC）2009年标准临床病理分期：0期12例，Ⅰ期56例，Ⅱ期70例，Ⅲ期67例，Ⅳ期11例。标本组织经4%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋4μm厚连续切片，分别进行苏木精－伊红（H－E）染色、光镜观察，并运用EnVision免疫组化法染色，检测 EGFR、GST－π和C－erbB－2的表达。所有染色结果均由两位资深病理科医生阅读诊断核实。

1.2 试剂与方法 鼠抗人单克隆抗体 EGFR、GST－π、C－erbB－2分别购自Dakoky公司、novocastra公司、NeoMaikers公司，克隆号分别为：E30、LW29、Cocktail；Envision免疫组化检测试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司，DAB显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学法采用En－Vision二步法，抗原修复采用EDTA缓冲液（pH 8.0）高温高压热修复，染色程序按Envision试剂盒说明书进行，采用3，3′－二氨基联苯胺（DAB）－H2O2显色。

1.3 结果判断 EGFR阳性信号定位于细胞膜，GST－π阳性信号定位于细胞质。C－erbB－2阳性信号定位于细胞膜，均为黄色或棕黄色颗粒作为阳性细胞。每张切片随机选择10个高倍视野（×200），按阳性细胞百分比分为4个等级，即不着色为阴性（－），＜25%为弱阳性（＋），25%～50%为中度阳性（＋＋），＞50%为强阳性（＋＋＋）。本文所指阳性包括弱阳性、中度阳性和强阳性。

1.4 统计学处理 研究结果应用SPSS17.0软件进行统计分析。率的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 EGFR、GST－π和 C－erbB－2在食管鳞癌中的表达 EG－FR、GST－π和C－erbB－2在食管鳞状细胞癌中的表达情况见表1、封2图1。

2.2 EGFR、GST－π和 C－erbB－2表达与临床因素间的关系局部浸润较深者，淋巴结转移阳性者，临床分期较晚者，EGFR、GST－π和 C－erbB－2的阳性表达率均更高；分化程度较低者，EGFR的阳性表达率更高。即 EGFR、GST－π和 C－erbB－2的阳性表达率与局部浸润、淋巴结转移、临床分期呈正相关，而与患者性别、年龄、肿瘤直径比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1 EGFR、GST－π和C－erbB－2在食管鳞癌中的表达（%）

表2 食管鳞癌中EGFR的表达与临床因素间的关系（n）

2.3 EGFR、GST－π和 C－erbB－2基因表达情况与预后相关因素间的关系 众多研究显示［6－7］，局部浸润程度、肿瘤分期及淋巴结转移情况与食管鳞癌预后紧密相关，是判断其预后的主要因素。EGFR、GST－π和C－erbB－2基因在食管鳞状细胞癌中，2个或2个以上基因阳性表达者113例（52.3%），无基因或1种基因阳性表达者103例（47.7%），基因阳性表达情况与食管鳞癌预后相关因素的关系见表3。

表3 3种基因表达情况与预后相关因素间的关系［n（%）］

3 讨 论

表皮生长因子受体（EGFR）是肿瘤细胞增殖、分化和抗凋亡过程中的重要调节因子，其高表达可以促进肿瘤细胞增殖、黏附、侵袭和转移，诱导肿瘤新生血管形成［1］。这一结论得到本研究结果验证，即EGFR高表达与食管鳞癌分化程度、局部浸润、淋巴结转移情况、临床分期有密切的关系。关于EGFR及针对EGFR的靶向药物的研究，已成为近年来抗肿瘤治疗的主要热点［4，8］。

GST－π，即胎盘型谷胱甘肽硫转移酶，具有结合、解毒等功能［9－10］，Kodate等在1986年首次证明在人结肠癌中 GST－π高表达，以后相继在多种肿瘤中发现GST－π阳性表达或含量显著增高［11］。这与本研究结果基本一致，即在食管鳞癌中GST－π阳性表达率高达80.1%。本研究还显示，GST－π的表达与食管鳞状细胞癌局部浸润深度、淋巴结转移情况、临床分期密切相关。大量研究表明，GST－π与肿瘤预后和耐药关系密切，是肿瘤细胞产生耐药的一种标志，已成为癌症化疗方案选择的重要参考［2－3，12－13］。

C－erbB－2基因，又称 HER－2基因，位于17号染色体长臂上（17q21），cDNA的长度为4.5kb，编码的C－erbB－2蛋白是一种相对分子质量为185×103的跨膜糖蛋白，其胞内区的羧基端含有多个酪氨酸，可以通过磷酸化而被激活，再与含有SH2结构域的蛋白结合。将胞外信号传到核内，最终在核内调节转录，从而发挥对细胞功能的调节作用。C－erbB－2的表达与食管癌预后关系的报道尚不多。已有不少学者正致力于C－erbB－2肿瘤靶向治疗的研究［14］。

本研究显示，2个或2个以上基因阳性表达与主要预后相关因素，即局部浸润、淋巴结转移情况、临床分期，均密切相关。提示联合检测EGFR、GST－π和C－erbB－2对判断食管鳞癌生物学行为、预后及指导治疗有重要意义。

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Expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2 in esophageal squamous cell carcinoma and their clinical significance

Qiang Yong，Xu Yanhui，Li Zhongdong，Qian Jianjun，Jing Hua
（Department of Cardiothoracic Surgery，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，Nanjing，Jiangsu210002，China）

ObjectiveTo observe the expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2in 216esophageal squamous cell carcinoma（ESCC）patients.MethodsWe collected surgical specimens of ESCC，and applied EnVision immunohistochemical method to detect the expression of EGFR，GST－πand C－erbB－2，compared well－differentiated group and poorly differentiated group，shallow local infiltration group and deep group，with and without lymph node metastasis group，earlier clinical stage group and later group，then researched the relationship between the three biochemical substances and clinical factors.ResultsThe data indicates that the expression of EGFR was closely related to differentiation degree（P＝0.036），the depth of local infiltration（P＝0.022），lymph node metastasis（P＝0.037）and the clinical stage（P＝0.021）；and the expression of GST－πand C－erbB－2were associated with depth of local infiltration（P＝0.019，0.006），lymph node metastasis（P＝0.028，0.039）and the clinical stage（P＝0.012，0.027），but not associated with the differentiation degree（P＝0.162，0.722）.ConclusionCombined detection of EGFR，GST－πand C－erbB－2can play an important role to predict the biological behaviour，prognosis and guide therapy.

neoplasms，squamous cell；esophagus；EGFR；GST－π；C－erbB－2；immunohistochemistry

10.3969／j.issn.1671－8348.2012.32.009

A

1671－8348（2012）32－3377－03

2012－02－20

2012－07－08）

·临床研究·